常用试剂、溶液及缓冲液的配制

1常用试剂、溶液及缓冲液的配制

1.基本要求

分子生物学所用试剂必须是分析纯或分子生物学试剂级。溶液配制水尽可能使用灭菌、蒸馏、去离子水（建议用Milli-Q过滤系统或类似系统进行过滤）。除非有特殊的说明，大部分配制的溶液需用0.22um孔径滤膜过滤除菌或者高压灭菌（15psi，121℃,20～30min）。使用高压灭菌的水、灭过菌的容器以及灭过菌的贮液来配制溶液，会延长所配制溶液的使用时间。用干燥的化学试剂和无菌水配置的溶液一般都不需要在灭菌；有些酸、碱和一些有机化合物溶液也不需要灭菌，因为微生物不能在这些溶液中生长。制备的溶液应该分成小分保存。如果没有特别说明，则所有贮液和缓冲液至少能在室温下贮存六个月。作为贮液应贮存在4℃或-20℃，使用时取出到达到室温后再开启，以防止试剂内的缩合作用，以确保度数精确。

以质量浓度表示的溶液浓度是指在100ml溶液中溶质的质量，质量单位为g；以体积分数表示的溶液浓度是指总体积为100ml溶液中各组分成分的体积，体积单位为ml。缓冲液的ph为25℃是溶液的ph。

2.浓酸及碱的摩尔浓度

溶液质量分数/% 浓度

/mol/L

冰乙酸 甲酸

盐酸

硝酸

磷酸

硫酸

氢氧化铵 氢氧化钾 氢氧化钠 90～100

90

36

70

85

95

28（NH3）

50

50

17.4

23.4

11.6

15.7

14.6

18

14.8

13.5

19.1

3.常用贮液与溶液

1mol/L亚精胺（spermidine）

溶解2.55g亚精胺（相对分子质量为254.6）于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份。贮存于-20℃.不须将溶液灭菌

1mol/L精胺（spermine）

溶解3.48g精胺（相对分子质量为348.2）于足量水中，使终体积为10ml，分装为小份贮存于-20℃.不须将溶液灭菌。

10mol/L乙酸铵（ammonium acetate）

将77.1g乙酸铵（相对分子质量为77.1）溶解于水中，加水定容至1L后，用0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。

10mg/ml牛血清蛋白（BSA）

加100mg的牛血清蛋白（组分V或分子生物学试剂级，无DNA酶）与9.5ml水中（为了减少变性，需将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直到牛血清蛋白完全溶解为止。不要漩涡混合（漩涡将产生泡沫，泡沫是蛋白变性的结果）。加水定容到10ml，贮存于-20℃.该溶液一般不需将溶液灭菌。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT）

最简单配制1mol/L二硫苏糖醇溶液的方法是在二硫苏糖醇5g的

原瓶装中加32.4ml水，分成小份于-20℃贮存，该法避免了称量步骤；另一配制方法是转移100mg的二硫苏糖醇（相对分子质量为154.25）至微量离心管，加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。配置的溶液无需灭菌。

8mol/乙酸钾（potassium acetate）

溶78.5g乙酸钾（相对分子质量为98.14）与足量水中，加水定容到100ml。 1mol/L氯化钾（KCL）

溶7.46g氯化钾（相对分子质量为74.55）与足量的水中，加水定容至100ml。

3mol/L乙酸钠（sodium acetate）

溶40.8g的三水乙酸钠（相对分子质量为136.1）于约90ml的水中，用冰乙酸调溶液的ph至5.2，再加水定容到100ml。

0.5mol/LEDTA

最简单配制0.5mol/L EDTA贮液的方法是配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液（如

0.5mol/L），混成后形成的EDTA的三钠盐（三钠盐比二钠盐易溶解）.该溶液的ph 应接近8，可适合于所有的分子生物学实验.配制0.5mol/LEDTA的另一方法是称

取186.1g的Na2EDTA 2H20(相对分子质量为372.2)和20g的NaOH（相对分子质量

为40），并溶于水中，最后定容至1L。

1mol/L HEPES

将23.8g（相对分子质量为238.3）溶于约90ml的水中，用氢氧化钠调ph（常用的ph范围为6.8～8.2），然后用水定容到100ml。

1mol/LHCL

标准浓盐酸的含量为质量分数36%，或11.6N.加8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中并可配制成100ml的1mol/L盐酸溶液。为了避免飞溅引起的严重烧伤，常常加酸于水中，而不可加水于酸中。

25mg/Ml IPTG

溶250mg的IPTG（相对分子质量为238.3）于10ml水中，分成小份于-20℃贮存。溶液一般不需要灭菌。

1mol/LMgCl2

溶20.3g氯化镁（MgCl2 6H2O，相对分子质量为203.3）于足够水中，定容到100ml。

100mol/L PMSF

溶174mg的PMSF（PMSF为苯甲基磺酰氟，相对分子质量为174.2）于足量的异丙醇中，并定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹后于-20℃贮存。溶液无需灭菌。

20mg/ml蛋白酶K（proteinase K）

将200mg的蛋白酶K加入9.5ml水中（为了减少变性，需将蛋白加入水中，而非加水于蛋白），轻轻摇动盖紧盖的管子，直到蛋白酶K完全溶解为止。定容到终体积10ml。不要漩涡混合（会产生泡沫，引起蛋白变性）。分装成小份于-20℃贮存。无需灭菌。

10mg/ml RNase（无DNase-free RNase）

溶10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（ph5.0）。溶解后水浴中煮沸15min，使DNA酶失活。用1mol/LTris-CL调ph至7.5，于-20℃贮存。溶液一般无需灭菌。为了避免RNase被污染，要带上手套，为避免RNase 溶液与RNA实验所用的实验台或仪器表面接触。

10mg/ml蛙鱼精DNA（salmon sperm DNA）

被剪断、变性的蛙鱼精DNA（10mg/ml）有商品出售，但相当昂贵。比较经济的 蛙鱼精DNA可在实验室自行配置，但配置时间所需较长。蛙鱼精DNA贮存的配制可溶1g干的蛙鱼精DNA于100ml水中，至少需搅拌1天。加氯化钠至终浓度100mmol/L后用酚抽提。用超声波或重复通过16号～18号的注射针头15次至20次以剪断提取的DNA。根据适当大小的DNA标准物用琼脂糖凝胶分析DNA片段的大小。用于杂交，理想的DNA大小在500bp～1000bp；而用于酵母乙酸锂转化，5kb～10kb大分子量的蛙鱼精DNA更适合于用作载体。将DNA用乙醇沉淀后并溶于水中，终浓度为10mg/ml。分装成小管（如10ml），置于沸水中煮沸10min使DNA变性后，迅速在冰浴中冷却，于-20℃贮存。每次使用前要煮沸并冰浴冷却。溶液一般无需灭菌。

5 mol/L氯化钠（NaCl）

溶29.2g的氯化钠（相对分子质量为58.44）于足量的水中，加水定容至100ml。 10N氢氧化钠

配制10N的氢氧化钠溶液应加400g氢氧化钠（相对分子质量为40g/M）颗粒于正在用磁力搅拌器搅拌的含有约0.9L水的（放置在冰盒上的）烧杯中（不要加水于氢氧化钠颗粒中）。氢氧化钠颗粒完全溶解后，用水定容至1L。溶液无需灭菌。配制浓的氢氧化钠溶液是一个放热反应，须高度警惕以防被试剂烧伤或玻璃容器破裂。在配制10N的氢氧化钠溶液时，为了避免使用氢氧化钠颗粒，可购买浓的氢氧化钠溶液。加524ml的50%的氢氧化钠溶液（19.1N）于正在磁力搅拌器搅拌的476ml水中即可。

10%(质量浓度为)十二烷基硫酸钠（SDS）

称取100g十二烷基硫酸钠，慢慢的转移到约含有0.9L水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解为止。用水定容到1L。如有需要也可配置20%的十二烷基硫酸钠贮液。溶液无需灭菌。

2mol/L山梨糖醇（sorbitol）

将36.4g山梨糖醇（相对分子质量为182.2）于足量的水中，使终体积为100ml。质量分数为100%三氯乙酸（TCA）

最安全的配置三氯乙酸贮液方法是避免称量三氯乙酸试剂，可直接在装有500g 三氯乙酸的试剂瓶中加入100ml水（三氯乙酸水溶性强）。用磁力搅拌器搅拌知道完全溶解为止。如果需要可再加一些水，用水调终体积为500ml，并贮存在棕色瓶中。溶液无需灭菌。三氯乙酸在浓度低于30%时会进行分解，稀释液应在临用前配制。