免疫胶体金技术
免疫胶体金技术及其在兽医临床上的应用
X u m u s h o u y i免疫胶体金技术是一种全新的免疫标记方式，有着方便、成本低、应用范围广等多方面使用优势。
这一技术在20世纪80年代发展，随着其发展近年来在生物医学的不同领域中得到充分的应用，特别是在兽医领域中得到足够的发展。
免疫胶体金凭借着自身的精准性高、操作简单等特点在兽医临床中应用，可以在很短的时间内实现对畜禽疫病的有效判断，可提升禽畜疫情防控的成效。
一、免疫胶体金技术概述1、基本原理在具体的应用中，免疫胶体金主要是通过胶体金作为示踪的标注物，在抗原抗体的反应中实际使用。
氯金酸在还原剂的作用下渐渐的变为金颗粒，成为疏水胶溶剂，会带有负电荷。
在弱碱环境中，胶体金有着负电荷，动物体内则有着正电荷基团，将此二者结合后不会对蛋白质原本的生物特性造成影响。
而且，胶体金离子会对蛋白质的分子形成一定的吸附功效，可在临床疫病的检测中有效应用。
2、检测技术一般情况下，常常使用的检测技术有CGEIA、DIGFA这两种方法。
此两种方式的相同点是，在抗原或者是抗体中加入适量的需要检验的标本，在渗滤作用下，两者会结合，再通过胶体金标记。
DIGFA应用中，会将蛋白质吸附，加快免疫速度，也使颜色转变更加明显。
CGEIA在实际应用中，要通过免疫层析条，依照一定的顺序粘贴，并切成条状检测。
3、使用优点这一技术在实际使用中有着多方面优势。
具体来讲，在使用上方便且高效，可以在基础或者是现场等环境中使用，其所有呈现的反应都能够维持在15分钟之内。
使用的费用不高，此技术在应用中不需要购买特殊或者是贵重的相关仪器。
应用的范围也很广泛，能够满足各种检测的条件。
还可以开展多项内容的测试，将样品的应用率提高，在保证成本大幅度降低的同时，也能有效解决部分样品难以获取的难题。
这项技术的标记物性质也很稳定，保留的时间很长，而且保存所需条件也不多。
二、免疫胶体金技术在兽医临床上的应用1、在禽类临床上应用禽类产品的质量将直接影响人们的身体健康，若是禽类产品出现疾病，造成的危害是不可估量的。
免疫胶体金技术
The gold conjugate must be purified from excess antibody and any small clusters removed before concentrating and storing. Spin the gold conjugate at speeds according to gold particle size . The gold conjugate will form a loose precipitate at the bottom of the tube. Discard the clear supernatant and resuspend the pellet with proper buffer.
. 劣质金外形不均一，且非球形，有凝集现象，颗粒间变异系数较大
How are the antibodies coupled to the gold?
Conjugation of antibodies to gold particles depends upon three separate but dependent phenomena : a). ionic attraction between the negatively charged gold and the positively charged protein b). hydrophobic attraction between the antibody and the gold surface c). Sulfur binding (Cysteine and Methionine)
胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。 需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要降低胶体金的pH值时可用0.1N HCl。测定金溶液的pH可能损害pH测定计的探头，因此，一般用精密的pH试纸测定其pH即可.
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用研究
胶体金免疫层析技术在食品检测中的应用研究胶体金免疫层析技术是一种在食品检测中广泛应用的方法。
该技术利用胶体金颗粒的特性，在固体支撑上进行免疫层析反应，实现对分析物的检测。
本文将从胶体金免疫层析技术的原理、方法和应用等方面进行介绍，并探讨该技术在食品检测中的优势和未来发展方向。
首先，胶体金免疫层析技术是基于免疫学原理的一种快速、灵敏、特异的检测方法。
该技术利用胶体金颗粒的特殊性质，即在纳米尺度下具有高度可控的光学和电化学性质。
由于胶体金颗粒的尺寸和形态可以通过调整合成条件进行控制，因此可以用于检测不同大小和形态的分析物，包括蛋白质、DNA、细菌等。
其次，胶体金免疫层析技术的方法简单、操作便捷、成本低廉。
在实际操作中，只需将样品滴加到含有胶体金颗粒和特异抗体的免疫纸条上，然后等待几分钟即可观察到胶体金颗粒在纸条上的迁移情况。
通过观察纸条上的色带出现与否以及色带的颜色变化，可以判断样品中是否存在目标分析物，并进行定量分析。
相比于传统的基于酶标记技术的免疫层析方法，胶体金免疫层析技术不需要复杂的仪器设备和多步酶标记过程，因此更加简便快速。
再次，胶体金免疫层析技术在食品检测中具有广泛应用前景。
目前，该技术已被应用于多种食品中的残留物检测，包括食品中的农药、重金属、毒素等。
例如，研究人员利用胶体金免疫层析技术能够检测到食品中的抗生素残留、农药残留、酶毒素等，在食品安全监测中起到了重要的作用。
此外，胶体金免疫层析技术还可以应用于快速检测食品中的转基因成分、食品中的过敏原等。
最后，尽管胶体金免疫层析技术在食品检测中已经取得了一定的成就，但仍面临一些挑战和未解决的问题。
例如，该技术在样品预处理、灵敏度、特异性等方面还需要进一步优化和改进。
此外，胶体金颗粒的稳定性和存储问题也需要解决，以确保该技术能够在实际应用中长期稳定地实现。
因此，未来的研究方向应该着重解决这些问题，提高胶体金免疫层析技术的准确度和可靠性。
综上所述，胶体金免疫层析技术作为一种快速、灵敏、特异的检测方法，具有广泛的应用潜力。
《免疫胶体金技术》课件
简便操作
免疫胶体金技术操作简便，不需要复 杂的仪器和设备，降低了对实验条件 和技术的要求。
VS
该技术适用于基层医疗机构、实验室 及家庭自测等多种场景，方便快捷， 易于推广应用。
稳定性好
免疫胶体金技术稳定性好，试剂有效期长，可长时间保存，保证了检测结果的稳定性和可靠性。
《免疫胶体金技术》PPT课件
目 录
• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备 • 免疫胶体金技术的特点与优势 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的挑战与前景
01
免疫胶体金技术概述
定义与原理
总结词
简述免疫胶体金技术的定义和基本原理。
详细描述
免疫胶体金技术是一种基于胶体金标记的免疫分析方法，利用胶体金作为示踪标记物，结合抗原抗体反应进行检 测和定量分析。其原理基于抗原抗体反应的特异性和胶体金的颜色变化，实现对目标物质的快速、灵敏和可视化 检测。
组装质控线
在硝酸纤维素膜上固定另一种 抗原或抗体，形成质控线。
组装试剂条
将硝酸纤维素膜、玻璃纤维纸 和吸水纸按顺序粘贴成试剂条
。
质量检测与控制
外观检查
观察试剂条是否平整、无破损、颜色均匀。
稳定性检测
在不同温度和湿度条件下存放试剂条，观察 其稳定性。
性能测试
通过与已知浓度的标准品进行对比，检测试 剂条的灵敏度和特异性。
历史与发展
总结词
概述免疫胶体金技术的发展历程和重要突破。
详细描述
免疫胶体金技术最早可追溯到20世纪70年代，随着科学家对胶体金和免疫学研究的深入，该技术逐渐 发展成熟。近年来，免疫胶体金技术不断取得突破，在临床诊断、生物安全检测、食品安全检测等领 域得到广泛应用。
免疫胶体金的技术
2. 凝胶过滤法
u 将探针溶液装入透析袋内， 4℃ ，置于硅胶或聚乙 二醇中浓缩至原体积的1 4～1 5 u 离心 1500 r min，20min 弃沉淀 u 经Sephacryl（丙烯葡聚糖）S400层析柱分离纯化。 用0.02mol/L TBS(0.1%BSA)洗脱 ? TBS的PH根据蛋白质种类而定 u 按红色深浅分管收集洗脱液
1. 光镜免疫金银法 3 在免疫金染色的基础上增加物理显影的步骤 3 显影液的配制及显影过程应在暗处进行 3 阳性部位呈黑色颗粒状 32. 电镜免疫金银法 3 包埋前染色, 包埋后染色
【IGSS法优点】
1. 可被用于光镜和电镜观察 2. 敏感性高 3. 定位准确 4. 背景清晰, 对比度好 5. 方法简便, 安全 6. 成本较低, 标本可长期保存
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大，15~150nm
白磷还原制备的金颗粒直径较小，3~12nm
【具体制备方法】
（二）影响溶胶稳定性的因素 u 电解质 u 胶体金浓度 u 温度 u 大分子物质
（三）胶体金的鉴定
【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小 及金颗粒的均匀程度
( 七) 标记探针的鉴定
1. 负染色检查: 将胶体金溶液滴在覆有
Formavar膜( 支持膜) 的镍网上, 空气中干燥, 醋 酸铀负染, 透射电镜下观察
2. 生物活性鉴定: 可用直接或间接法放射免疫
测定, 凝聚试验及免疫组化染色进行鉴定
四. 免疫胶体金染色方法
( 一 ) 免疫金染色法
Immunogold staining, IGS
( 五）标记
1. 计算所需待标记蛋白质的总量
根据用以标记的胶体金溶液总体积及所测定的最 适蛋白质稳定量，计算出所需待标记蛋白质的总量
胶体金免疫标记技术
胶体金免疫标记技术胶体金免疫标记技术一、胶体金的制备一、胶体金的制备 根据不同的制备方法，可以制备出直径1－500nm 的胶体金粒子，但做为免疫标记探针，其直径应在3-30nm 范围内。
范围内。
在氯化金（HAuCl4）水溶液中加入还原剂使之还原并聚积形成胶体金粒子。
水溶液中加入还原剂使之还原并聚积形成胶体金粒子。
使用不同种类、使用不同种类、不同剂量的还原剂，可以控制所产生的粒子大小。
即粒子大小取决于反应溶液中最初还原试剂和还原核的数量。
还原剂浓度越高，核浓度也越高，氯化金的还原也就从更多的还原中心开始，开始，因此产生的胶体金粒子数量越多，因此产生的胶体金粒子数量越多，因此产生的胶体金粒子数量越多，但体积也越小。
但体积也越小。
但体积也越小。
粒子直径每增加一倍，数量减少为粒子直径每增加一倍，数量减少为原来的1/8。
以柠檬酸钠和单宁酸做还原剂，能够制备大小相对一致、直径3～16nm 的胶体金。
因此一般胶体金探针均使用该方法进行。
但该方法制备的胶体金粒子直径范围较窄，而且残留的多聚单宁酸残基往往干扰某些蛋白与金粒子的结合。
聚单宁酸残基往往干扰某些蛋白与金粒子的结合。
此时在溶液中添加此时在溶液中添加0.1～0.2％的H2O2能够去除这些残基。
双标记或制备5-10 nm 的胶体金时建议使用该方法。
的胶体金时建议使用该方法。
利用柠檬酸为还原剂，可以制备12～150 nm 直径的胶体金。
但制备大体积的胶体金时，胶体金粒子的误差也同时增加。
因此做单标记时，建议使用该方法制备12-16 12-16 nmnm 直径的胶体金。
金。
除了上述方法外，也可以用磷作为还原剂来制备5 nm 的胶体金，它避免了单宁酸残基的问题，但所形成的金粒子体积变化较大。
磷易燃且有毒，制备的残液需进一步处理，题，但所形成的金粒子体积变化较大。
磷易燃且有毒，制备的残液需进一步处理，故该方法故该方法已经很少使用。
已经很少使用。
氯化金极易吸湿，故一般均以小剂量密封保存（0.5g 或1g ），因此在配制氯化金溶液时一次配完，暂时不用的可以用1.5 1.5 ml ml 试管分装为1 1 ml ml 保存（-20℃）。
胶体金检测技术-
阳性结果 样品中可能含有等于或源自于3ng/ml的盐酸克伦特罗。培训资料
四、ß -激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊 尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要 5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当 尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测 卡才能检测到。
试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无 法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性， 从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。 因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。 3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果 风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会 产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电风扇、空 调的风直吹。
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二 、包装 每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡 ，滴管1个、干燥剂1片。
三、现场筛查步骤
1. 在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡 和待检样本溶液恢复至室温。
2. 从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地 使用。
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3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂 直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。
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图1 金颗粒示意 图
在溶液中金颗粒呈 圆形, 表面带有负电 荷 , 由于静电的排斥 力 , 使其在水中保稳 定状态，形成稳定 的胶体状态。
培训资料 3. 胶体金试纸条的构造
免疫胶体金技术
面临挑战与解决策略
技术挑战
提高胶体金的合成效率、稳定性和生物相容性，降低生产成本，推动技术的实际应用。
应用挑战
拓展免疫胶体金技术在生物医学领域的应用范围，提高其在实际应用中的准确性和可靠 性。
法规与伦理挑战
建立健全相关法规和标准体系，规范免疫胶体金技术的研发和应用，确保其安全性和有 效性。同时，关注伦理问题，尊重人类生命和尊严，推动技术的健康发展。
环境毒理学研究
毒性评估
利用免疫胶体金技术，可以研究 环境污染物对生物体的毒性作用 ，评估其对生态系统和人类健康
的影响。
毒理机制研究
该技术可用于揭示环境污染物与生 物体相互作用的分子机制，为环境 毒理学的深入研究提供有力工具。
污染物代谢研究
通过免疫胶体金技术，可以研究环 境污染物在生物体内的代谢过程， 了解其在生物体内的转化和排泄途 径。
食品营养成分分析
蛋白质检测
利用免疫胶体金技术，可以准确测定食品中的蛋白质含量，为食品 的营养价值评估提供依据。
维生素检测
该技术可用于食品中多种维生素（如维生素A、维生素E等）的定量 分析，有助于评价食品的营养成分组成。
矿物质检测
通过免疫胶体金技术，可以检测食品中的矿物质元素含量，如钙、铁 、锌等，为食品的营养价值提供全面数据。
02
免疫胶体金制备技术
原料选择与处理
01
02
03
氯金酸的选择
选择高纯度的氯金酸作为 原料，确保胶体金的合成 质量。
还原剂的选择
常用还原剂如柠檬酸三钠 、抗坏血酸等，用于将氯 金酸还原为金颗粒。
溶液配制
将氯金酸溶解在适量超纯 水中，配制成一定浓度的 氯金酸溶液。
胶体金合成方法
免疫胶体金技术及其发展前景
免疫胶体⾦技术及其发展前景免疫胶体⾦技术是 80年代继三⼤标记技术（荧光素、放射性同位素和酶）后发展起来的固相标记免疫测定技术。
最初该⽅法仅⽤于免疫电镜技术，现在已经发展到被动凝集试验、光镜染⾊、免疫印迹、免疫斑点渗滤法以及免疫层析技术等。
⽬前已⼴泛应⽤于临床诊断，尤其是在医学临床检验中的应⽤，如早孕、⼄肝、寄⽣⾍、性病和病毒细菌病的检测。
⽽动物医学临床诊断⽅⾯的应⽤起步较晚，最近⼏年才偶有报道，但作为临床诊断试剂盒开发应⽤的还很少。
该⽅法最⼤特点是单份测定、简单快速、特异敏感，像层析试纸条技术，不需任何仪器设备和试剂，⼏分钟就可⽤⾁眼观察到颜⾊鲜明的实验结果，并可保存实验结果。
免疫胶体⾦层析技术现已成为当今最快速敏感的免疫学检测技术之⼀，特别适合于⼴⼤基层单位、医院、野外作业⼈员以及⼤批量时间紧的检测和⼤⾯积普查等，因此该技术具有巨⼤的发展潜⼒和应⽤前景。
现就该技术的原理、⽅法和发展前景作⼀简要综述。
1. 免疫胶体⾦技术1.1 胶体⾦⽤于标记的原理胶体⾦是⼀种负电荷的疏⽔胶，靠静电粒⼦相互排斥作⽤来维持稳定的胶体体系，其颗粒散在、红⾊，直径从⼏纳⽶到⼏⼗纳⽶不等。
由于不同直径的胶体⾦的光散射各异，所以其溶胶颜⾊的深浅相应发⽣显著的变化，这就是胶体⾦⽤于被动凝集试验的基础。
同时由于胶体⾦⾦颗粒对蛋⽩质有很强的吸附功能，可与 @AB、=>?、毒素、糖蛋⽩、酶、抗⽣素和激素等多种物质⾮共价结合，从⽽使其成为免疫反应的优良标记物。
⽽且⾦颗粒还可催化银离⼦还原成⾦属银，因此在胶体⾦免疫测定时加⼊银染⾊液，能放⼤反应信号，⼤⼤增加测定的灵敏度。
1.2 胶体⾦的制备⼀般采⽤还原法，即将氯⾦酸或四氯化⾦与适当的还原剂作⽤⽽使其还原成胶体⾦。
常⽤的还原剂有柠檬酸三钠、鞣酸、抗坏⾎酸钠、⽩磷和硼氢化钠等。
根据需要可通过加⼊不同种类和剂量的还原剂来调节胶体⾦颗粒的⼤⼩。
将纯化好的胶体⾦⽤0.02 mol/L TBS缓冲液1:20稀释，测OD值见表 1。
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前景展望
1 2 3
不断改进技术
随着科学技术的不断发展，免疫胶体金技术将不 断改进和完善，提高检测的灵敏度和特异性。
拓展应用领域
免疫胶体金技术的应用领域将不断拓展，不仅限 于医学诊断，还可应用于食品安全、环境监测等 领域。
实现自动化和智能化
未来免疫胶体金技术将与自动化、智能化技术相 结合，提高检测的效率和准确性，为临床诊断和 科学研究提供更好的服务。
用。
04
免疫胶体金技术具有操作简便、特异性高、稳定性好 等优点，但也存在一些限制，如检测灵敏度相对较低， 对某些低浓度目标物质检测效果不佳。
对未来研究的建议
01
深入研究免疫胶体金技 术的反应机制和影响因 素，为优化技术提供理 论支持。
02
探索新型的标记物和信 号放大策略，提高检测 灵敏度和特异性。
成熟发展
90年代至今，免疫胶体金 技术不断优化，应用范围 逐渐扩大。
02
免疫胶体金技术的制备方法
胶体金的制备
制备原理
利用氯金酸的水溶液在碱性条件下加热产生聚合物颗粒，通过控制反应条件如 温度、pH值和反应时间，可控制胶体金的粒径大小。
制备步骤
将氯金酸水溶液加热至沸腾，加入氢氧化钠调节pH值至碱性，继续加热至溶液 变为橙红色，冷却后即可获得胶体金溶液。
免疫抗原的制备
抗原选择
选择具有特异性识别能力的抗原，如抗体、多肽等，确保与 目标分子有高亲和性。
抗原制备
将抗原与载体蛋白结合，形成抗原-载体蛋白复合
结合原理
利用抗原-抗体之间的特异性结合反应，将免疫抗原与胶体金结合，形成胶体金 标记的免疫复合物。
结合方法
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• 免疫胶体金技术概述 • 免疫胶体金技术的制备方法 • 免疫胶体金技术的应用实例 • 免疫胶体金技术的优缺点及前景展望 • 结论
胶体金检测技术
3.检测时，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹 尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如
1.1939年（英，植物）Kausche和Ruska把烟草叶病毒吸 附在金颗粒上，在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状 颗粒，开启了免疫胶体金技术的研究。 2.1971年（美，微生物）Faulk和Taylor首先将兔抗沙门菌 抗血清与胶体金颗粒结合，用直于检测沙门菌的表面抗原。 3.1974年（奥）Romano等将胶体金标记在马抗人IgG上， 实现了间接免疫金染色法。同年Bauer等报道将胶体金标记 在凝集素上的应用。
待检尿样检测区出现红色条带为阴性 待检尿样检测区不出现红色条带为阳性
阳性结果 样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸克伦特罗。
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四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围： 主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊 尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要 5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当 尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测 卡才能检测到。
规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于 猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml。
培训资料
-------结果判定依据
阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说 明检测卡有效。
如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带， 出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。
实验六 胶体金免疫层析技术
原理：利用胶体金 颗粒与抗体或抗原 结合形成免疫复合 物通过层析技术进 行分离和检测。
胶体金颗粒具有高 灵敏度、高稳定性 和易于观察的特点 。
应用领域：广泛应 用于医学、生物技 术、食品检测等领 域。
历史和发展
1971年胶体金免疫层析技术首 次被提出
1980年代胶体金免疫层析技术 开始应用于临床诊断
05
胶体金免疫层析技术的应用案例
在医学诊断中的应用
快速检测：用于 快速检测传染病、 肿瘤标志物等
定量检测：用于 定量检测激素、 药物浓度等
早期诊断：用于 早期诊断某些疾 病如阿尔茨海默 病等
疾病监测：用于 监测疾病进展和 治疗效果如糖尿 病等
在食品安全检测中的应用
检测食品中的农药残留
检测食品中的重金属含量
准备实验材 料：胶体金 免疫层析试 纸条、样本、
缓冲液等
样本处理： 将样本进行 稀释、离心
等处理
加样：将样 本加入到试 纸条的加样
孔中
孵育：将试 纸条放入孵 育器中设定 合适的温度
和时间
观察结果： 在孵育结束 后观察试纸 条上的颜色 变化判断结
果
数据分析： 根据实验结 果进行数据 分析和报告
撰写
实验结果分析
稳定性好：胶体金颗粒不易氧化 稳定性好
技术局限性
灵敏度较低：胶体金免疫层析技 术灵敏度较低难以检测到低浓度 的抗原或抗体。
检测时间较长：胶体金免疫层析 技术检测时间较长需要等待一定 时间才能得到结果。
添加标题
添加标题
பைடு நூலகம்
添加标题
添加标题
特异性较差：胶体金免疫层析技 术特异性较差容易发生交叉反应 导致假阳性结果。
1990年代胶体金免疫层析技 术逐渐成熟广泛应用于传染病、 肿瘤等疾病的检测
胶体金免疫层析技术PPT课件
用于检测生物样本中药物残留，如抗生素、化疗药物等，评估药物 治疗效果和预防药物滥用。
生物分子检测
用于检测生物样本中特定的生物分子，如抗原、抗体等，辅助诊断疾 病和研究生物过程。
THANKS FOR WATCHING
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该技术主要适用于小分子抗 原和抗体的检测，对于大分 子物质如蛋白质、细胞等的 检测效果不佳。
成本较高
虽然胶体金免疫层析技术试 剂成本相对较低，但仪器设 备和生产工艺的成本较高， 导致整体成本较高。
对环境因素敏感
胶体金免疫层析技术的检测 结果易受环境因素影响，如 温度、湿度等，需要在一定 的条件下进行操作。
抗体或抗原的纯化
通过亲和层析、凝胶过滤等方法去除杂质，获得纯度较高的抗体或 抗原。
抗体或抗原的标记
将抗体或抗原与胶体金颗粒结合，形成抗体-胶体金或抗原-胶体金 复合物，以便后续检测时能够与目标物质发生反应。
制备胶体金与抗体或抗原的结合物
1 2
胶体金与抗体或抗原的结合
通过物理吸附、化学键合等方法将抗体或抗原固 定在胶体金颗粒表面，形成结合物。
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目 录
• 胶体金免疫层析技术概述 • 胶体金免疫层析技术的基本组成 • 胶体金免疫层析技术的制作过程 • 胶体金免疫层析技术的优缺点 • 胶体金免疫层析技术的应用实例
01
胶体金免疫层析技术概 述
定义与特点
定义
胶体金免疫层析技术是一种基于 胶体金标记和免疫层析原理的快 速检测技术。
结合物的纯化
通过离心、超滤等方法去除未结合的抗体或抗原， 获得纯度较高的结合物。
3
结合物的稳定性
通过调节溶液的pH值、加入稳定剂等手段，提 高结合物的稳定性，以确保其在存储和使用过程 中性能稳定。
免疫胶体金技术的基本原理
免疫胶体金技术的基本原理：胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。
胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。
根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。
吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。
用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。
这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌A蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
免疫金标记技术(Immunogold labelling technique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。
2功能编辑本段常用的免疫胶体金检测技术：（1）免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或组织切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。
（2）免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，然后进行负染。
免疫胶体金技术成熟吗
免疫胶体金技术成熟吗提到免疫胶体金技术，很多人可能并不懂这种技术的用途，免疫胶体金技术属于免疫学检验中常用到的技术之一，在整个检验工作过程中，发挥着非常关键的作用，历经多年的发展，免疫胶体金技术应用范围越来越广泛，很多人都在考虑免疫胶体金技术发展的成熟吗？现在在大家一起来探讨一下这个问题，详细的了解一下有关于免疫胶体金技术。
一、免疫胶体金技术的背景想要了解民意胶体金技术成熟吗？要从胶体金技术的发展源头来进行探讨，这一技术是在20世纪80年代后快速发展起来的一种，以胶体金作为标记物的免疫标记技术。
这一类技术在检验的过程中，发挥着非常重要的作用，并且应用于众多领域。
提起胶体金，最早需要溯源到1857 年，法拉第发现胶体金，通过还原法在氯金酸水溶液中制备出了胶体金。
F Faulk 和 Taylar 在 1971 年通过金标抗体 (由胶体金与兔抗沙门氏菌抗血清结合成)来检测细菌表面抗原的分布。
1974 年 Romano 等，通过在抗球蛋白抗体中标记胶体金，创建了间接免疫金染色法。
Geogh-egan1978 年建立了光镜水平的免疫金技术 (IGS)。
Holgate 1983 年将银显影技术与免疫金染色结合，建立了免疫金银染色法 (IGSS)。
这一类技术发展历史比较悠久，并且经历过漫长的发展时间后越来越成熟，在当前应用非常广泛。
比如在食品安全监督临床检验动植物检疫的其他一系列的领域应用都非常的广泛，发挥着非常重要的作用。
二、免疫胶体金技术有哪些分类现阶段免疫胶体金技术已经发展得越来越成熟，并且在整个检测的过程中分为多种不同的检验技术。
1免疫胶体金光镜染色法在进行检测的过程中，这种检验方式，需要细胞悬液涂片或者是组织切片，可以通过胶体金标记的抗体进行染色，同时也可以直接进行标记，在检验时银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。
在具体应用的过程中，应用范围比较广泛，可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合，通过结合之后，便可以开始下一步的负染工作，在整个检测的过程中，尤其是对于病毒的检测具有非常重要的意义，可以观测病毒的形态和病毒的检测工作。
胶体金免疫层析法原理
胶体金免疫层析法原理胶体金免疫层析法是一种常用的生物化学分离技术，它利用胶体金颗粒与抗原或抗体的特异性结合来实现对生物分子的快速、准确检测和分离。
胶体金颗粒具有良好的生物相容性、分散性和表面活性，因此在生物医学领域得到了广泛的应用。
该方法的原理是利用抗原与抗体的特异性结合，将胶体金颗粒标记在抗原或抗体上，形成胶体金-抗原/抗体复合物，然后通过免疫层析技术将目标分子与其他非特异性结合的物质分离开来。
这种方法具有操作简便、灵敏度高、特异性强的特点，因此在临床诊断、生物学研究和生物制药等领域得到了广泛的应用。
胶体金免疫层析法的操作步骤主要包括样品处理、制备试剂、样品加载、洗涤和检测等几个步骤。
首先，需要对样品进行预处理，将目标分子从样品中提取出来。
然后，制备胶体金-抗原/抗体复合物，并将其加载到固相载体上。
接下来进行洗涤步骤，将非特异性结合的物质去除，最后通过检测手段对目标分子进行定量或定性分析。
胶体金免疫层析法的优势在于其操作简便、快速高效、具有较高的特异性和灵敏度。
同时，由于胶体金颗粒的小尺寸和良好的生物相容性，使得该方法在生物医学领域具有广泛的应用前景。
例如，在临床诊断中，可以利用该技术对各种疾病标志物进行检测，实现快速、准确的诊断；在生物学研究中，可以用于蛋白质、核酸等生物分子的检测和分离；在生物制药领域，可以用于药物的质量控制和疫苗的研发等方面。
总之，胶体金免疫层析法作为一种快速、准确、灵敏的生物化学分离技术，具有广泛的应用前景。
随着生物医学技术的不断发展和完善，相信胶体金免疫层析法将在临床诊断、生物学研究和生物制药等领域发挥越来越重要的作用，为人类健康事业做出更大的贡献。
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用
胶体金免疫层析技术在食品安全现场快速检测中的应用随着社会快速发展，人们对食品安全的关注度也越来越高。
食品安全问题直接关系到每个人的健康，而快速有效的食品安全检测技术就显得尤为重要。
胶体金免疫层析技术是一种先进的生物分析技术，具有快速、灵敏度高、操作简便等优点，因此在食品安全现场快速检测中得到了广泛的应用。
一、胶体金免疫层析技术原理及优势胶体金免疫层析技术是一种基于免疫反应的快速检测技术，其原理是将标记了胶体金颗粒的抗体与待测样品中的靶分子发生特异性识别结合，形成抗原-抗体-胶体金复合物。
随后将复合物加载到免疫层析膜上，待样品在膜上流动时，复合物将随之流动，并在免疫层析膜上形成一个特定的条带，最终通过观察胶体金颗粒在免疫层析膜上的聚集情况来判断待测物质的存在与浓度。
（1）快速性：该技术检测时间短，通常在30分钟以内即可得到结果，适用于快速现场检测。
（2）灵敏度高：胶体金颗粒作为标记物质，具有良好的散射光学性能，检测灵敏度高，可达到ppb或ppm级别。
（3）特异性强：抗体的高特异性保证了该技术对靶物质的特异性识别能力，可准确判断待测样品中目标分子的存在与浓度。
（4）操作简便：仪器设备简单，不需要复杂的实验步骤和条件，操作简便，适合于现场快速检测。
1. 农药残留检测：2. 食品中有害物质检测：食品中有害物质如重金属、致癌物质等对人体健康造成严重威胁，通过胶体金免疫层析技术，可以对食品中的这些有害物质进行快速准确的检测，及时发现并处理食品安全隐患。
3. 食品真伪鉴别：胶体金免疫层析技术还可以用于食品的真伪鉴别，通过对食品成分中的特定分子进行快速检测，判断食品原料的真实性，避免假冒伪劣产品对消费者健康造成危害。
4. 生物毒素检测：食品中的生物毒素是一种常见的食品安全隐患，而胶体金免疫层析技术可以用于生物毒素的快速检测，保障食品安全，防止食品中毒事件的发生。
随着人们对食品安全意识的提高和食品安全检测技术的不断进步，胶体金免疫层析技术将在食品安全现场快速检测中发挥越来越重要的作用。
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Immunogold Technique
一. 概述
(一) 发展历史
1971年 Faulk和Taylon 用兔抗沙门氏菌抗血清与胶 体金颗粒结合, 制备成金标抗体, 检测细菌表面抗原的 分布 1975年 Horisberger等 把胶体金技术推广应用于扫 描电镜、透射电镜及冰冻蚀刻电镜的研究 1978年 Geoghegan 水平的应用 1981年 Danscher 发表了胶体金标记物在光质逐级稀释
• 取一批小试管，编号，每管内加已调好PH的胶 体金100ul
• 按从低→高的浓度，将已稀释好的蛋白溶液，
分别加入已编号的试管中，对照管只加不含蛋白 的稀释液，混匀，静置5 ~ 10 min
• 各管分别加10%NaCl 10μl，混匀，静置2hr， 观察结果
利用分光光度计测各管580nm的OD值, 然后以OD 值为纵坐标, 蛋白质浓度为横坐标作一曲线, 取曲 线最先与横轴相接近的那一点的蛋白质浓度, 即为 最适稳定量.
(五）标记 1. 计算所需待标记蛋白质的总量
根据用以标记的胶体金溶液总体积及所测定的最 适蛋白质稳定量，计算出所需待标记蛋白质的总量
2. 调节PH：根据所标记蛋白质的等电点来调节胶
下金颗粒可见性的方法 1983年 Moeremans等 在蛋白质转移电泳中应用 了免疫金银染色法 1986年 Fritz等 在免疫金银法基础上成功进行了 彩色免疫金银染色
免疫胶体金技术
以胶体金为标记物应用在免疫组织化学研 究中，对细胞表面或细胞内的多糖、糖蛋 白、蛋白质、多肽、激素和核酸等生物大 分子进行定位研究
（四）制备胶体金的注意事项
1. 玻璃器皿的清洁
玻璃器皿清洗→清洁液浸泡24h →流水冲→蒸馏 水反复洗涤→晾干
2. 试剂配制
应尽量使用分析纯试剂 各种水溶液必须用三蒸水或去离子水配制
3. 影响胶体金颗粒大小的因素
加入还原剂的速度 搅拌是否均匀
制备胶体金所用的烧瓶大小
三. 胶体金探针的制备
(一) 胶体金与蛋白质结合的原理
(三) 待标记蛋白质的处理 1. 透析除盐: 将蛋白质溶液装入透析袋中, 放
在蒸馏水中透析, 4℃过夜
2. 离心: 10000 r/min, 4℃, 1h, 去除蛋白质聚 合物等沉淀
(四) 胶体金蛋白质最佳结合率测定 不同直径的金颗粒, 及不同分子量大小的 蛋白质, 其结合的比例是不同的 常用的检测二者结合量的方法有目测法和光 电比色法
1
胶体金(ml) 蛋白质(ug) 10%NaCl 1 5 0.1
2
1 10 0.1
3
1 15 0.1
4
1 20 0.1
5
1 25 0.1
6
1 30 0.1
7
1 35 0.1
• 结果判断: 对照管或加入蛋白量不足，胶体金出 现由红变蓝的凝聚现象；加入蛋白质量达到或超过 稳定量，则胶体金保持红色不变
2. 光电比色法
（六）标记探针的纯化 纯化的目的
去除溶液中未标记的 蛋白质，未充分稳定的胶 体金，以及在标记过程中可能产生的各种聚合物
纯化的方法
超速离心法和凝胶过滤法
1. 超速离心法
速度快，适合大样品的制备 • 离心 1500 r min，20min 弃沉淀
• 超速离心 4℃ 1h
弃上清
• 沉淀用PBS或TBS缓冲液（含0.1％牛血清白蛋 白重新悬浮至原体积的 1 10～1 20 • 离心 1500 r min，20min • 分装 4℃ 保存 弃沉淀
电解质
胶体金浓度
温度
大分子物质
（三）胶体金的鉴定
【鉴定方法】在电镜下观察金颗粒的大小
及金颗粒的均匀程度
【鉴定方法】将胶体金滴在覆有Formvar
膜或碳- Formvar膜的镍网上，空气干燥， 透射电镜下观察，拍照，测量金颗粒的 直径，并计算100个以上胶体金颗粒直径 的平均值及标准差
化学还原法
【基本原理】在氯化金水溶液中加入一定量的还
原剂，使金离子还原为金原子。在适当条件下， 还原的金原子凝聚成一定大小的金颗粒，形成 金溶胶。
【常用还原剂】柠檬酸钠、鞣酸、白磷等
柠檬酸钠还原制备的金颗粒直径较大，15~150nm
白磷还原制备的金颗粒直径较小，3~12nm
【具体制备方法】
（二）影响溶胶稳定性的因素
体金的 PH
常用几种蛋白质标记时胶体金的 PH 蛋白质
抗体
PH
9.0
SPA
过氧化物酶
6.0
8.0
低密度脂蛋白
5.5
3. 磁力搅拌下，逐滴加入蛋白质溶液，作 用 5～15min
4. 继续磁力搅拌，加入5％牛血清白蛋白， 使其终浓度为1％，搅拌10min；也可加3％ 聚乙二醇，使其终浓度为0.05％
2. 凝胶过滤法
将探针溶液装入透析袋内， 4℃ ，置于硅胶或聚乙 二醇中浓缩至原体积的1 4～1 5 离心 1500 r min，20min 弃沉淀 经Sephacryl（丙烯葡聚糖）S400层析柱分离纯化。 用0.02mol/L TBS(0.1%BSA)洗脱
TBS的PH根据蛋白质种类而定
胶体金标记蛋白质的过程, 实际上是蛋白质在等电 点或稍偏碱时, 被吸附于胶体金颗粒表面.
（二）胶体金的预处理
标记之前将胶体金的PH值调至待标蛋白质 的等电点或略偏碱
调节PH的方法： 当需要提高胶体金的PH值时，用0.2mol/L K2CO3 或0.1mol/L KOH 当需要降低胶体金的PH值时, 用0.1M HCL或醋酸
按红色深浅分管收集洗脱液
(七) 标记探针的鉴定 1. 负染色检查: 将胶体金溶液滴在覆有
Formavar膜(支持膜) 的镍网上, 空气中干燥, 醋 酸铀负染, 透射电镜下观察
2. 生物活性鉴定: 可用直接或间接法放射免疫
测定, 凝聚试验及免疫组化染色进行鉴定
（二）胶体金的基本概念
胶体金，一般指金的水溶液，又称金溶胶。
---金以微小的粒子分散在水中所形成的金
溶胶。其中分散的金颗粒直径在1~100nm
之间。
二. 胶体金的制备
(一) 可用多种方法制备胶体金 1. 分散法:包括机械分散法、超声波法、电分 散法和胶溶法等 2. 凝聚法:包括物理凝聚法、化学凝聚法（氧 化法、水解法和还原法） 其中应用最多的是化学还原法