第六章微生物生长繁殖及其控制
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要求： 样品充分混匀； 每支移液管及涂布棒只能接触一个 稀释度的菌液； 同一稀释度三个以上重复,取平均值； 每个平板上的菌落数目合适，便于 准确计数；
每ml活菌数＝同一稀释度平均数×稀释倍数×5
注意：要三个以上重复平第板六章平微生均物计生长数繁殖；及不其控适制 合丝状菌
C，比浊法 在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度 (optical density, 即O.D.)表示菌量。 注意： 测量应在菌浓度与O.D.成正比的线性范围内，否则不准
长
客观地反映微生物生长的规律；
第六章微生物生长繁殖及其控制
微生物生长的测定方法
➢ 个体计数
直接计数法 间接计数法
➢ 生物量测定：重量测定、生理指标测定
个体计数法通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长 情况或样品中所含微生物个体的数量；
第六章微生物生长繁殖及其控制
P146
1.个体计数法 A.直接法
曲线特征：根据微生物每小时的分裂代数（R）不同，一般可 把生长曲线分成迟缓期（延滞期）、对数生长期、稳定期、衰 亡期。
第六章微生物生长繁殖及其控制
第六章微生物生长繁殖及其控制
1、迟缓期（lag phase）
定义：少量微生物接种到新鲜培养基，开始的一段时间 内数目不增加的时期。
特点： ➢ 生长速率常数等于零。 ➢ 细胞形态变大或增长（巨大芽孢杆菌 接种3.4μm，培养
➢ 研究细菌群体培养的原因： ➢ 由于个体微小； ➢ 微生物接种是群体接种，接种后的生长是微生
物的群体繁殖生长。
第六章微生物生长繁殖及其控制
一、细菌群体的生长规律
生长曲线：细菌接种到定量的液体培养基中，定时取 样测定细胞数量，以培养时间为横座标，以菌数为纵 座标作图，得到的一条反映细菌在整个培养期间菌数 变化规律的曲线。
利用血球 计数板， 在显微镜 下计算一 定容积里 样品中微 生物的数 量。
缺点： 不适于1对m运m动2 细菌2的5（计1数6）；中格 需要相对高1的6（细2菌5 浓）度小；格， 个体小的细共菌4在00显小微格镜下难以观察；
第六章微生物生长繁殖及其控制
B.简接法
原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可 以通过生长形成菌落。
对细菌生长与分裂起调节作用的主要是于转肽酶和 D,D－羧肽酶活性比。 转肽酶活性高些，利于CW扩增，导致细菌生长。
羧肽酶高些，利于横隔壁形成，导致细胞分裂。
第六章微生物生长繁殖及其控制
第二节 微生物生长的测定
评价培养条件、营养物质
微
等对微生物生长的影响；
生
物Leabharlann Baidu
评价不同的抗菌物质对微生物产
生
生抑制(或杀死)作用的效果；
5.5小时，19.8μm） ➢ 胞内RNA尤其是rRNA含量增高; ➢ 合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快）。 ➢ 对外界不良条件（氯化钠浓度、温度）抗生素等反应敏
感。
第六章微生物生长繁殖及其控制
➢ 延迟期出现的原因：可能是为了调整代谢。当细胞 接种到新的环境(如从固体培养接种至液体培养基) 后，需要重新合成必需量的酶、辅酶或某些中间代 谢产物，以适应新的环境。
酸的作用。G＋菌：L－赖氨酸；G－菌：二氨基庚二酸 4、作用于细胞壁的酶：
作用于双糖单位的：N－乙酰葡萄糖胺酶和N－乙酰胞壁 酸酰胺酶 肽聚糖短肽链的：第转六章肽微生酶物、生长内繁殖肽及酶其控和制 羧肽酶
三、细菌生长与分裂的调节
各种物质复制后，质膜内陷伴随新肽聚糖插入，导致 横隔壁向心生长，最后会合，一分为二。
行复制. 2、生长迅速的细菌中，新产生的子细胞中已
经有复制着的染色体DNA，即DNA复制与 细胞分裂并非同步。
P128
第六章微生物生长繁殖及其控制
二、细胞壁的扩增
1、球形菌的细胞壁扩增方式：在赤道板附近插入； 2、杆形菌的细胞壁扩增方式：新老细胞壁间隔分布； 3、细胞壁扩增的分子基础：短肽中第三位双氨基氨基
第六章微生物生长繁殖及其控制
2.重量法 ➢ 测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法。 ➢ 以干重（105℃）、湿重直接衡量微生物群体
的生物量；
➢ 通过样品中蛋白质、核酸含量的测定间接推算 微生物群体的生物量；
➢ 蛋白质含量测定法：从一定量培养物中分离出细菌，洗涤， DNA以含除量去测培定养法基：带利入用的D含NA氮与物D质A。BA再-2用H凯Cl氏(即定新氮配法制法的测定总 20%含W氮/W量，。3，5-二氨基苯甲酸-盐酸溶液)能显示特殊荧光反应 的➢原一量理般=而含细设氮菌计量的的%含。×氮因6量.2为5约每为个原细生菌质平干均重含的D1N4A%8。.4×故1，0-蛋5纳白克质，总可 根➢据蛋D白NA质含含量量计占算细出菌第细六总菌章重微的生的物数生～长量6繁。5殖％及其，控制故细胞总量＝蛋白质总
量×1.54
3.生理指标测定法
微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、 生物热等与其群体的规模成正相关。
样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显， 因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热 计等设备来测定相应的指标。
常用于对微生物的快速鉴定与检测
第六章微生物生长繁殖及其控制
第三节 细菌群体的生长繁殖
稀释平板计数法
先将待测菌液作一系列10倍稀释，使平皿上长出的菌落数在 30-300个之间→ 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖 → 肉眼可见的菌落 → 对菌落数目的计数推测样品中的微生 物细胞数
第六章微生物生长繁殖及其控制
涂布平板法
使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！（一般0.2ml）
第六章 微生物的生长繁殖
及其控制
本章内容
• 细菌的个体生长； • 微生物生长的测定； • 细菌的群体生长繁殖； • 环境对微生物生长的影响； • 微生物生长繁殖的控制。
第六章微生物生长繁殖及其控制
概论
生长：细胞物质不可逆地增加，体积增大的过程。 （量变过程）
繁殖：生命个体数量增加的过程。 （质变过程）
在单细胞微生物中，生长繁殖的速度很快，而且两者 始终交替进行，个体生长与繁殖的界限难以划清，因 此实际上常用群体生长作为衡量微生物生长的指标。
群体生长指在一定时间和条件下细胞数量的增加；实 质上包含着个体细第胞六章生微生长物生与长繁繁殖及殖其控交制替进行的过程
第一节 细菌个体生长
一、物质的复制－DNA 1、在细菌个体生长过程中，DNA以双向的方式进
每ml活菌数＝同一稀释度平均数×稀释倍数×5
注意：要三个以上重复平第板六章平微生均物计生长数繁殖；及不其控适制 合丝状菌
C，比浊法 在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度 (optical density, 即O.D.)表示菌量。 注意： 测量应在菌浓度与O.D.成正比的线性范围内，否则不准
长
客观地反映微生物生长的规律；
第六章微生物生长繁殖及其控制
微生物生长的测定方法
➢ 个体计数
直接计数法 间接计数法
➢ 生物量测定：重量测定、生理指标测定
个体计数法通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长 情况或样品中所含微生物个体的数量；
第六章微生物生长繁殖及其控制
P146
1.个体计数法 A.直接法
曲线特征：根据微生物每小时的分裂代数（R）不同，一般可 把生长曲线分成迟缓期（延滞期）、对数生长期、稳定期、衰 亡期。
第六章微生物生长繁殖及其控制
第六章微生物生长繁殖及其控制
1、迟缓期（lag phase）
定义：少量微生物接种到新鲜培养基，开始的一段时间 内数目不增加的时期。
特点： ➢ 生长速率常数等于零。 ➢ 细胞形态变大或增长（巨大芽孢杆菌 接种3.4μm，培养
➢ 研究细菌群体培养的原因： ➢ 由于个体微小； ➢ 微生物接种是群体接种，接种后的生长是微生
物的群体繁殖生长。
第六章微生物生长繁殖及其控制
一、细菌群体的生长规律
生长曲线：细菌接种到定量的液体培养基中，定时取 样测定细胞数量，以培养时间为横座标，以菌数为纵 座标作图，得到的一条反映细菌在整个培养期间菌数 变化规律的曲线。
利用血球 计数板， 在显微镜 下计算一 定容积里 样品中微 生物的数 量。
缺点： 不适于1对m运m动2 细菌2的5（计1数6）；中格 需要相对高1的6（细2菌5 浓）度小；格， 个体小的细共菌4在00显小微格镜下难以观察；
第六章微生物生长繁殖及其控制
B.简接法
原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可 以通过生长形成菌落。
对细菌生长与分裂起调节作用的主要是于转肽酶和 D,D－羧肽酶活性比。 转肽酶活性高些，利于CW扩增，导致细菌生长。
羧肽酶高些，利于横隔壁形成，导致细胞分裂。
第六章微生物生长繁殖及其控制
第二节 微生物生长的测定
评价培养条件、营养物质
微
等对微生物生长的影响；
生
物Leabharlann Baidu
评价不同的抗菌物质对微生物产
生
生抑制(或杀死)作用的效果；
5.5小时，19.8μm） ➢ 胞内RNA尤其是rRNA含量增高; ➢ 合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快）。 ➢ 对外界不良条件（氯化钠浓度、温度）抗生素等反应敏
感。
第六章微生物生长繁殖及其控制
➢ 延迟期出现的原因：可能是为了调整代谢。当细胞 接种到新的环境(如从固体培养接种至液体培养基) 后，需要重新合成必需量的酶、辅酶或某些中间代 谢产物，以适应新的环境。
酸的作用。G＋菌：L－赖氨酸；G－菌：二氨基庚二酸 4、作用于细胞壁的酶：
作用于双糖单位的：N－乙酰葡萄糖胺酶和N－乙酰胞壁 酸酰胺酶 肽聚糖短肽链的：第转六章肽微生酶物、生长内繁殖肽及酶其控和制 羧肽酶
三、细菌生长与分裂的调节
各种物质复制后，质膜内陷伴随新肽聚糖插入，导致 横隔壁向心生长，最后会合，一分为二。
行复制. 2、生长迅速的细菌中，新产生的子细胞中已
经有复制着的染色体DNA，即DNA复制与 细胞分裂并非同步。
P128
第六章微生物生长繁殖及其控制
二、细胞壁的扩增
1、球形菌的细胞壁扩增方式：在赤道板附近插入； 2、杆形菌的细胞壁扩增方式：新老细胞壁间隔分布； 3、细胞壁扩增的分子基础：短肽中第三位双氨基氨基
第六章微生物生长繁殖及其控制
2.重量法 ➢ 测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法。 ➢ 以干重（105℃）、湿重直接衡量微生物群体
的生物量；
➢ 通过样品中蛋白质、核酸含量的测定间接推算 微生物群体的生物量；
➢ 蛋白质含量测定法：从一定量培养物中分离出细菌，洗涤， DNA以含除量去测培定养法基：带利入用的D含NA氮与物D质A。BA再-2用H凯Cl氏(即定新氮配法制法的测定总 20%含W氮/W量，。3，5-二氨基苯甲酸-盐酸溶液)能显示特殊荧光反应 的➢原一量理般=而含细设氮菌计量的的%含。×氮因6量.2为5约每为个原细生菌质平干均重含的D1N4A%8。.4×故1，0-蛋5纳白克质，总可 根➢据蛋D白NA质含含量量计占算细出菌第细六总菌章重微的生的物数生～长量6繁。5殖％及其，控制故细胞总量＝蛋白质总
量×1.54
3.生理指标测定法
微生物的生理指标，如呼吸强度，耗氧量、酶活性、 生物热等与其群体的规模成正相关。
样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显， 因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热 计等设备来测定相应的指标。
常用于对微生物的快速鉴定与检测
第六章微生物生长繁殖及其控制
第三节 细菌群体的生长繁殖
稀释平板计数法
先将待测菌液作一系列10倍稀释，使平皿上长出的菌落数在 30-300个之间→ 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖 → 肉眼可见的菌落 → 对菌落数目的计数推测样品中的微生 物细胞数
第六章微生物生长繁殖及其控制
涂布平板法
使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！（一般0.2ml）
第六章 微生物的生长繁殖
及其控制
本章内容
• 细菌的个体生长； • 微生物生长的测定； • 细菌的群体生长繁殖； • 环境对微生物生长的影响； • 微生物生长繁殖的控制。
第六章微生物生长繁殖及其控制
概论
生长：细胞物质不可逆地增加，体积增大的过程。 （量变过程）
繁殖：生命个体数量增加的过程。 （质变过程）
在单细胞微生物中，生长繁殖的速度很快，而且两者 始终交替进行，个体生长与繁殖的界限难以划清，因 此实际上常用群体生长作为衡量微生物生长的指标。
群体生长指在一定时间和条件下细胞数量的增加；实 质上包含着个体细第胞六章生微生长物生与长繁繁殖及殖其控交制替进行的过程
第一节 细菌个体生长
一、物质的复制－DNA 1、在细菌个体生长过程中，DNA以双向的方式进