《各类成分分析》PPT课件

BH十十In－→（BH十In－）→BH十·In－
CHCl3 、CH2Cl2 常用酸性染料：溴麝香草酚兰（BTB）、溴甲酚绿 关键：pH、酸性染料、有机溶剂
例：小儿宝泰康颗粒中贝母素类总生物碱的含量测定
对照品：贝母素甲0.28mg/ml
标准曲线：精密量取对照液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9ml， 分别置分液漏斗中，加水至2ml，各加溴甲酚绿溶液2 ml，摇匀，再精密加入三氯甲烷10ml，剧烈振摇约2 分钟，静置，分取三氯甲烷液，滤过，取续滤液。 λ=411nm，绘制A-C曲线。
益母草、苦参、黄柏、贝母、洋金花、川乌
§1 生物碱
生物碱与兴奋剂
1988年奥运会 ，卡尔·刘易斯 ，麻黄碱 1992年奥运会，巫丹，士的宁 1992年奥运会 ，玛丽·乔·费尔南德斯 ，伪麻黄碱 1994年世界杯，马拉多纳，麻黄碱 2000年奥运会 ，拉杜坎，麻黄碱
§1 生物碱
生物碱与毒品
OH
OH
例：黄连（黄连上清片） 甲苯-异丙醇-EtOAc-MeOH-水 （6:1.5:3:1.5:0.3） 置氨蒸气饱和的展开缸内展开
§1 生物碱
四、鉴别
2、薄层色谱法 （3）对薄层板改性：1~2%NaOH溶液
例：钩藤（天麻钩藤颗粒） 1%NaOH硅胶G板 甲苯-三氯甲烷-丙酮-甲醇-浓氨试液（4:5:4:3:0.8）
§2 黄酮
三、供试品溶液的制备
提取 净化
苷元：乙酸乙酯、三氯甲烷、 乙醚、醇
苷：甲醇、乙醇
聚酰胺柱 大孔树脂柱
§2 黄酮
三、供试品溶液的制备 净化
例：HPLC测定强阳保肾丸中淫羊藿苷的含量
取强阳保肾丸3g，...…提取……至已处理好的聚 酰胺柱（内径1.5cm，聚酰胺4g，干法装柱，先 用50ml乙醇洗，继用150ml水洗）上，先后以纯 化水150ml、乙醇70ml洗脱，收集乙醇洗脱液， 蒸干…溶解，定容…即为供试品溶液。
一、概述
大黄、决明子、何首乌、虎杖： 大黄素、大黄酚、大黄酸
茜草、巴戟天：茜草素类 番泻叶：番泻苷
活性：泻下 、抗菌等
§3 蒽醌
二、理化性质
1、化学结构
OH O
OH
O
OH
OH
O
蒽醌 （大黄素型）
O
蒽醌 （茜草素型）
§3 蒽醌
二、理化性质
2、酸碱性：显酸性 3、溶解度
蒽醌苷元：乙醚、氯仿、甲醇、乙醇 蒽醌苷：甲醇、乙醇、热水
1、在酸性介质中定量反应 2、硫氰酸铬铵本身有颜色，生成的反应物 的颜色的吸光度取决于硫氰酸铬铵部分 3、反应物不溶于水，易溶于丙酮
测定方法：
1、沉淀过滤，溶于丙酮，直接测定A 2、滤除沉淀后，测定残存的过量雷氏盐，间接计算
例：产复康颗粒中益母草总生物碱的含量测定
对照液：盐酸水苏碱加0.1M盐酸制成1mg/ml。
（2）重量法
例7-2：昆明山海棠片中总生物碱的含量测定
止喘灵注射液
【处方】麻黄、洋金花、苦杏仁、连翘
精密量取10ml 加N
§1 生物碱
（一）总生物碱的含量测定 2、分光光度法
排除干扰：化学分离、柱色谱
定量方法：标准曲线法 对照品比较法 吸收系数法
酸性染料比色法
在适当的pH介质中，生物碱盐的阳离子BH+与酸性染料阴 离子In－定量地结合成有色离子对（BH十·In－ ）。
4、显色反应
① 碱性条件下：红色等 ② 醋酸镁反应：红色等络合物
§3 蒽醌
二、理化性质
5、光谱特征
可见光：黄色 紫外光：苯甲酰 ≈254nm
OH O
OH
O
§3 蒽醌
三、供试品溶液的制备
总蒽醌：
样 甲醇回流 蒸 盐酸
品提
干△
水 CHCl 萃
解3
取
提取：甲醇或乙醇；回流或超声 水解：盐酸或硫酸 萃取：三氯甲烷或乙醚
供试液：取12g，乙醇超声，滤液蒸干，加0.1M盐酸 10ml使溶解。
测定法：上述两溶液各加活性炭0.5g，水浴加热1min 滤过，滤液分别置25ml量瓶，用0.1M盐酸洗涤，洗液 并入同一量瓶中；另取0.1M盐酸20ml置另一25ml量 瓶中，作为空白溶液。各精密加2%硫氰酸铬铵3ml， 加0.1M盐酸稀释至刻度，冰浴放置1h，滤过，取续 滤液，以0.1M盐酸为空白，λ=525nm，用空白溶液 的吸光度分别减去对照品与供试品的吸光度，计算， 即得。
葛根：葛根素
淫羊藿：淫羊藿苷
化橘红：柚皮苷
陈皮、枳实：橙皮苷、新橙皮苷
银杏叶：山奈酚、芦丁、银杏双黄酮
§2 黄酮
一、概述
具有广泛活性： 抗菌消炎：黄芩苷、木犀草素 扩张血管：银杏黄酮、葛根素 防治高血压：芦丁、橙皮苷 止咳祛痰：杜鹃素、金丝桃苷 抗癌：紫檀素、黄柏素
§2 黄酮
二、理化性质
1、化学结构：
NH
麻黄碱
NH
伪麻黄碱
NH
冰毒
§1 生物碱
二、理化性质
1、结构： C、H、O、N，碱性
OH
O
O
NH
N+ OCH3
麻黄碱
OCH3
小檗碱
§1 生物碱
二、理化性质
2、溶解性 亲脂性：大多数，在CHCl3中溶解度最大 亲水性：少，季铵型
一般都易溶于酸水
§1 生物碱
二、理化性质
3、沉淀反应
（1）碘化铋钾（BiI3·KI） O2N
§2 黄酮
四、鉴别
（一）化学反应法 ：盐酸-镁粉反应
例：大山楂丸（10药典） 取9g，剪碎，加乙醇40ml，加热回流，滤过，
滤液蒸干，残渣加水10ml，加热使溶解，用正丁醇 15ml振摇提取，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇 5ml使溶解，滤过。取滤液1ml，加少量镁粉与盐酸 2～3滴，加热4-5min，显橙红色。
§3 蒽醌
四、鉴别
（四）薄层色谱法
例：大黄的鉴别（10药典） 展开剂：石油醚（30~60℃） -甲酸乙酯-甲酸（15:5:1） 的上层溶液 检视：365nm，氨熏
§3 蒽醌
五、含量测定
（一）总蒽醌
比色法 对照品：1,8-二羟基蒽醌 显色方法： ♣ 5%NaOH-2%NH4OH混合碱液显色，λmax=510nm ♣ 醋酸镁显色， λmax=498nm
（2）雷氏盐
NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]
（3）苦味酸
特点：酸性水溶液（苦味酸在中性） 沉淀有颜色，常易溶于有机溶剂
干扰：蛋白质、多肽、鞣质
OH NO2
NO2
§1 生物碱
二、理化性质
4、光谱特征
OH
NH
麻黄碱 210 nm
O N+
O OCH3
OCH3
小檗碱 225 、 270 、 331n m365nm下 有荧光
例：牛黄千金散中盐酸小檗碱 乙腈-水（50：50） 每100ml含0.34g KH2PO4和0.17g SDS
§1 生物碱
（二）单体生物碱的含量测定 2、TLCS
例1：益母草口服液中盐酸水苏碱的含量测定 显色，λ=527nm单波长扫描 例2：万氏牛黄清心丸中黄连盐酸小檗碱的含量测定 荧光扫描，激发波长366nm 例3：九分散中马钱子（士的宁）的含量测定 荧光淬灭扫描，λs=254nm， λR=325nm
§1 生物碱
（二）单体生物碱的含量测定 3、HPCE
【1】高效毛细管电泳法测定复方苦参结肠溶胶 囊中氧化苦参碱. 中草药，2010，41（5）：725
【2】高效毛细管电泳法测定清胃黄连丸中盐酸 小檗碱的含量. 中国药业，2011，20（19）：20
§2 黄酮
一、概述
槐米：芦丁、槲皮素
黄芩：黄芩苷
§2 黄酮
四、鉴别
（二）薄层色谱法
1、硅胶板：酸性条件下斑点形状好
展开剂：EtOAc-丁酮-甲酸-水（10:1:1:1）苷
甲苯-醋酸乙酯-甲酸
苷
元
显色剂： AlCl3，生成黄色配合物，有荧光
§2 黄酮
四、鉴别
（二）薄层鉴别
2、聚酰胺
蒲
展开剂： ① 醇、酸或水
黄
② 微乳液 微乳液的配制：取SDS 3g、正丁醇6ml、正庚 烷2ml，加水25ml搅拌溶解，放置24h。
儿茶素
芦丁
槲皮素（甲） 槲皮素（水）
黄芩苷
黄芩素
香蒲新苷
山奈酚
橙皮苷
原儿茶醛
原儿茶酸
咖啡酸
绿原酸
没食子酸
阿魏酸
41
§2 黄酮
五、含量测定
（二）单体成分
RP-HPLC 固定相：ODS、苯基硅烷键合硅胶 流动相： 乙腈-0.5%冰醋酸；乙腈-0.2%磷酸溶液； 甲醇-0.1%磷酸 检测器：UVD
§3 蒽醌
第七章 中药各类成分分析
中药各类成分分析
生物碱* 黄酮* 皂苷* 蒽醌 挥发油
中药各类成分分析
一、概述 二、理化性质 *三、供试品溶液制备（提取、净化） *四、鉴别：化学反应、TLC *五、含量测定：总成分、单体成分
§1 生物碱
一、概述
黄连：小檗碱、巴马汀、药根碱、 表小檗碱、黄连碱
延胡索：延胡索乙素、延胡索甲素 马钱子：马钱子碱、士的宁 麻黄：麻黄碱、伪麻黄碱
§1 生物碱
（二）单体生物碱的含量测定 1、HPLC ♣ 离子抑制色谱法：二乙胺、三乙胺
例：浙贝母中贝母甲素和贝母乙素 乙腈-水-二乙胺（70：30：0.03）
此外，也可加入缓冲盐
§1 生物碱
（二）单体生物碱的含量测定 1、HPLC
♣ 离子对色谱法： SDS、辛烷基磺酸钠
为控制pH常加入缓冲 盐
§2 黄酮
五、含量测定
（一）总黄酮 分光光度法： 比色法
对照品：芦丁 显色方法： ♣ NaNO2-Al(NO3)3-NaOH显色，λmax=510nm ♣ AlCl3-KAc显色， λmax=420nm
例：排石颗粒中总黄酮的含量测定（比色法）【10药典】
对照品：芦丁0.2mg/ml（溶剂为50%甲醇） 标准曲线：精密量取对照液1、2、3、4、5ml，分别 置10ml量瓶，各加50%乙醇至5ml，加5%NaNO20.3 ml，摇匀，放置6min，加10%Al(NO3)30.3ml，摇匀， 放置6min，加NaOH试液4ml，加50%乙醇至刻度， 摇匀。以相应溶液为空白，在510nm处测定A。 测定法：取5g或1g，甲醇回流提取，滤过，取续滤 液25ml，加水稀释至50ml。取2ml，置10ml量瓶， 加50%乙醇至刻度，摇匀，作为空白。另取2ml，置 10ml量瓶，照标准曲线项下方法测A。
§1 生物碱
四、鉴别
2、薄层色谱法 ♣ 365nm下看荧光
视检 例：小檗碱（黄连）
♣ 显色：①改良碘化铋钾
②稀碘化铋钾+亚硝酸钠乙醇液 例：苦参碱、氧化苦参碱（苦参） ③ 茚三酮 例：麻黄碱、辛弗林
§1 生物碱
五、含量测定
（一）总生物碱的含量测定 1、化学分析法 （1）酸碱滴定法：返滴法
例：止喘灵注射液中总生物碱的含量测定
§3 蒽醌
五、含量测定百度文库
（二）单体蒽醌
HPLC 例7-8 三黄片中大黄的含量测定（P188） 色谱柱：ODS柱 流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（85:15） 检测波长：254nm
§1 生物碱
四、鉴别
1、化学反应法
例：马钱子散中生物碱成分的鉴别 【处方】马钱子 地龙 取1g→加浓氨试液→三氯甲烷浸泡→滤过 →滤液蒸干→加稀盐酸→加碘化铋钾试液 →黄棕色沉淀
§1 生物碱
四、鉴别
2、薄层色谱法 （1）展开系统：乙二胺、氨水
例：急支糖浆中麻黄碱的鉴别
§1 生物碱
四、鉴别
2、薄层色谱法 （2）氨蒸气预饱和
O
O
黄酮
O
O
二氢黄酮
O
OH
O
黄酮醇
O
O
异黄酮
§2 黄酮
二、理化性质
2、酸碱性：显酸性
O
3、光谱特征
O
可见光：黄色
紫外光： I 带（桂皮酰）：300~400nm
II带（苯甲酰） ：240~280n m
§2 黄酮
二、理化性质
4、溶解度： 黄酮苷元：醇、EtOAc、CHCl3、乙醚 黄酮苷：醇、水
5、显色反应： ①盐酸-镁粉反应 ②AlCl3：生成黄色配合物，且有荧光
§1 生物碱
三、供试品溶液的制备
1、有机溶剂提取法 碱化+ CHCl3
例：九分散中士的宁的含量测定
2、氧化铝柱色谱法
（P182例7-4）
例：黄连上清片中总生物碱的含量测定（实验）
3、离子交换树脂法
例：益母草口服液中盐酸水苏碱的含量测定
九分散中士的宁的含量测定（10药典）
处方：马钱子粉、麻黄、乳香（制）、没药（制）
游离蒽醌？
结合蒽醌？
§3 蒽醌
四、鉴别
（一）化学反应法 ① 碱性条件下→红色等 ② 醋酸镁反应：红色等络合物
（二）显微鉴别
大黄的草酸钙簇晶
§3 蒽醌
四、鉴别
（三）升华法
例：大黄流浸膏 取本品1ml，置瓷坩埚中，在水浴上蒸干
后，坩埚上覆以载玻片，置石棉网上直火徐徐 加热，至载玻片上呈现升华物后，取下载玻片， 放冷，置显微镜下观察，有针状、羽状等，滴 加NaOH试液，结晶溶解，溶液显紫红色。
测定法：取8g，加水30ml，氨试液调pH11，用乙醚 振摇提取4次，合并乙醚液，挥干，残渣加0.1M盐酸 和水，移至25ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过， 取续滤液2ml，置分液漏斗中，照标准曲线，测定A， 从标准曲线上读出贝母素甲的量，计算，即得。
雷氏盐比色法
B + NH4[Cr(NH3)2(SCN)4] = BH[Cr(NH3)2(SCN)4] ↓