生物制品2PPT课件

-
28
细胞培养关键：
1、细胞的冻存与复苏 用DMSO做保护剂 用慢冻快融法
2、细胞培养污染控制 细菌污染、支原体污染、 病毒污染
-
29
五.细胞培养法
（一）单层细胞静止培养或转瓶培养
1.原代细胞培养
2.传代细胞培养
（二）细胞悬浮培养
淋巴样细胞、 癌细胞、 sf-9、 sf21细胞
1.快速旋转管和充气摇动瓶法
第四节 培养基的制备程序 第五节 常用培养基
第六节 细菌的繁殖 一、细菌群体的繁殖规律 （一）迟缓期 原因、特点 （二）对数期 原因、特点 （三）稳定期 原因、特点 （四）衰亡期 原因、特点
-
15
-
16
二、影响细菌繁殖的因素
（一）营养
（二）温度 接近最适生长温度时繁殖最 快
（三）氢离子浓度（PH）
-
20
三. 接种后动物的饲养管理和收获病毒
在有良好隔离装置场地饲养 不同组分开饲养 接种动物出现典型症状者才能收获病 毒
-
21
第二节 鸡胚培养
一、鸡卵的选择与孵育： 应来自健康鸡群，最好是SPF鸡群 无母源抗体 用浅色鸡蛋
-
22
二、鸡胚接种： 1.绒毛尿囊膜接种 2.尿囊腔接种 3.卵黄囊接种 4.羊膜腔接种 5.静脉、脑内接种 三、收获 鸡胚放4C下过夜，消毒蛋壳
-
23
-
24
-
25Leabharlann Baidu
第三节 组织培养
包括组织块培养、器官培养和细胞培养。 一般指细胞培养 原代细胞：用新鲜组织制备。 二倍体细胞：含双倍的染色体，能传50-
100代。 传代细胞：能够在体外无限传代的细胞。
-
26
培养液： 基础培养液，有RPMI-1640、MEM等 生长液：加5-10%小牛血清 维持液：加1-2%血清
-
12
第二节 培养基的主要成分与功用 一、肉浸汁 二、蛋白胨 三、明胶 四、琼脂 五、酵母浸汁
-
13
第三节 培养基的种类与用途 天然培养基 合成培养基 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 选择培养基：根据某一种类微生物的特
殊营养要求或对某些物理、化学因素的 抗性设计的一类培养基。 鉴别培养基：含有- 特定指示剂的培养1基4 。
-
10
四、毒种鉴定
强毒毒种和弱毒毒种要根据各自的特性 制订相应的标准。
五、菌毒种的保存 避免变异
真空冷冻干燥（冻干），冻干的菌种 4℃，毒种-20℃以下.
-
11
第三章 细菌培养
第一节 细菌繁殖的营养要求 一、水
二、碳源
三、氮源
四、无机盐 五、生长因子：某些微生物不能利用普通碳 源、氮源自身合成，而需要从外界得到补充， 又是它生长繁殖所必需的有机物质。
蛋白质的场所； ②病毒增殖方式为复制； ③病毒增殖过程分为吸附、侵入、脱壳、
生物合成、装配及释放。
-
19
第一节 动物培养
一.动物的选择： 对病毒易感，健康，最好为SPF动物
二.动物接种方法：
1. 皮下 2．皮内 3．静脉 4．腹腔 5．脑内 6．鼻腔滴入等
三. 接种后动物的饲养管理和收获病 毒
PH 6—9 PH7.0—7.6
（四）二氧化碳 自养菌
（五）通气 O2 （六）渗透压
-
17
第七节 大量生产细菌培养方法
一、固体表面培养法 二、液体静置培养法 三、液体深层通气培养法 四、透析培养法 五、连续培养法
-
18
第四章 病毒培养
病毒增殖的特点： ①活细胞内寄生 缺乏完备的酶系统和合成
2.发酵罐法
（三）微载体培养法
-
30
-
31
-
32
-
33
-
34
-
35
基质
（2）国家有关部门批准取得生产许可证。
-
3
二、生物制品生产的申报与审批 1、实验室实验 2、田间实验 3、中间实验 4、区域实验 5、申报
-
4
6、审批 7、新制品试生产 8、申请转为正式生产 9、经兽药评审委员会再评价后，建设列
入规程的，发给正式生产批准文号
-
5
第四节 我国兽医生物制品事业的慨况与成 就
影响细胞生长的因素 1．温度 37℃ 2．pH值 7.0-7.4 6.8-7.6 3．气体 O2 、CO2 4．细胞接种量 5．无菌条件
-
27
单细胞的制备
1. 机械分散法
2. 酶消化法
0.25%胰蛋白酶
3. 螯合剂分散法
EDTA
0.01%EDTA+0.025% 胰 蛋 白 酶 混合液
对动物的病原性特点，引起细胞病变的 特征
生物化学、免疫学及血清学特性
-
8
3、血清型相符 与疫苗使用区的流行病原相符 4、遗传性状稳定 保存、传代、使用过程中受各种因素影
响容易变异
-
9
三、菌种鉴定 （一）毒力鉴定 «规程» 规定有具体标准 （二）免疫原性鉴定
攻毒保护试验 （三）稳定性试验 毒力是否稳定、是否反强
-
1
第三节 制造生物制品的条件
一、基本条件
1、相应的厂房和动物舍 2、相应的生产设备 3、一定比例的专业技术人员，包括能掌握生产
技术和实验技术的专业人员。
4、具有防止散毒的设施和隔离条件，具有良好 的卫生环境。
-
2
5、具有良好的消毒和排污设施 6、水、电供应 7、具有稳定的合乎标准要求的菌毒种 （1）合格的实验动物及细菌、病毒的培养
★1951年，成立了兽医生物制品监察所 （1982年改名中国兽药监察所）。
★猪瘟兔化弱毒苗属世界领先地位，
★马传贫弱毒苗、牛瘟疫苗、鸭瘟疫苗、 小鹅瘟疫苗、仔猪副伤寒苗属国际水平。
★与发达国家相比仍有许多不足。
-
6
第二章 生物制品的菌种与毒种
一、生物制品菌、毒种的概念与分类
凡应用于生物制品生产、鉴定和研究的细 菌菌种、病毒毒种以及分类地位在原虫以 下的生物种都属于生物制品的菌种和毒种 范围。
按用途分类：1、生产用菌、毒种，A、 直接生产用 B、免疫用 C、加工用
2、鉴定用菌、毒种 ，4、标准菌株（参 考菌株）
-
7
二、生物制品菌毒种的一般要求
1、来源（历史）清楚 ，资料完整 由中监所或中监所委托分管的单位负责
供应 2、生物学特性比较典型 1. 菌、毒种的形态特征，培养特性，