葡萄球菌属
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杆菌肽 ＋ 0.0４单 位耐药
呋喃唑 － 酮耐药 １００μ ／片
触酶 ＋
肠球 链球 菌属 菌属 ＋＋ +-
＋Ｖ
－－
－－
气球 动力 菌属 球菌
属 ＋－ ND ND
－ ＮＤ
－－
－＋
口腔 链球 属 ＋ ND
ＮＤ
－
＋－
微球 菌属 － -
－
＋
＋
纸片扩散法－标准化
NCCLS：美国实验室标准化委员会 (National Committee for Clinical Laboratory Standards) 每年修订更改
试验策略:
医生要求时做
应该用能查出 低水平耐药的方法 (如： 纸片扩 散法、 扩展的稀释板、 Etest)
似乎环丙沙星能预报加替沙星和左氧氟沙星的 结果
将 4 or 8 g/ml 的MICs值报告 “R”是可以 的
对加替沙葡萄球菌星和左氧氟沙 星的新的折点
旧旧 旧 新 新 新 SI R S I R 环丙沙星 <1 2 24 不变 不变 不变
加碘沙星 <2 4 28 <0.5 1 >2
左氧氟沙 <2 4 28 <1 2 >4 星
沙星
没 没 没 <0.5 1 >2 有有 有
葡萄球菌 . 红霉素 / 克林霉素
机制 基因 msrA
核糖体修饰 erm
核糖体修饰 erm
红霉素 克林霉素 RS
R源自文库
S*
R
R
结构
泵出
erm= 红霉素核糖体23S rRNA甲基化 （MLSB 耐药） msrA= 大环内脂类及链阳霉素
和 试验 / 报告的建议 (表 1)
泰利霉素 – 添加入表 1
Oxacillin-耐药的 葡萄球菌
mecA = 由基因决定的 苯唑西林耐药 称 “经典” MRSA 和 MRCoNS mecA 编码 PBP2a蛋白质 引起苯唑西林耐药 所以要测 mecA 或 PBP2a 查“经典”苯唑西林 耐药 只有极少数苯唑西林耐药的葡萄球菌(非经典) mecA 或 PBP2a 阴性 MICs 或 抑菌圈在 “R” 范围 苯唑西林耐药分界限
NCCLS 对万古霉素- 葡萄球菌属 的解释标准
方法(mm) S MIC (µg/ml) 4 纸片(30 µg) 15
I
8-16 -
R
32 -
金葡对万古霉素测试流程图
包括
MIC方法加 VA 筛选平皿
(BHIA with 6 µg/ml of VA)
纸片扩散方法加 VA 筛选平皿
(BHIA with 6 µg/ml of VA)
用头孢西丁纸片作扩散试验 OX-S 葡萄球菌要求报告 -内酰胺药 结果 测试路登葡萄球菌Staphylococcus lugdunensis 金葡菌降低对万古霉素敏感性 用BHI 万古霉素筛选琼脂检测
萄葡球菌属 (续)
添加了…
克林霉素诱导试验– QA / QC的建议 氟喹诺酮类 – 改写了纸片扩散和 MIC 折点 达托霉素纸片扩散法 ，MIC 折点
ＰＹ Ｒ
凝
固
因
子
－－
－－ ＋－ －－ －－
脲酶
＋ ＋ － ＋ ＮＤ
甘蔗 露糖
醇
－＋ Ｖ＋ Ｖ＋ Ｖ＋ －－
新生 霉素 耐药
多粘 菌素 Ｂ耐 药
－＋
＋－ －－ －－ －－
孔氏葡萄球菌 － － Ｖ ＋ － ＋ －
常见的凝固阴性葡萄球菌生物学特性
菌名
ＰＹＲ 凝固 脲素 甘露醇 蔗糖 新生霉 多粘菌
因子
素耐药 素Ｂ耐药
１本菌的血平板菌落呈金黄色或白色革兰 氏阳性球菌，ＤＮＡ酶和血浆凝固酶均为 阳性，发酵甘露醇. ２与微球菌的鉴别 葡萄球菌属葡萄糖为发 酵型,镜下以葡萄状排列为主，菌体较小； 而微球菌为氧化型或无反应，镜检以四联 排列为主，且菌体较大。 ３与链球菌的鉴别 链球菌氧化型，触酶阴 性
凝固酶阳性葡萄菌的生物学特性
葡萄球菌
庆大霉素 R 交叉耐氨基糖代类但除外链霉素。
葡萄球菌
-内酰氨酶（+）
青霉素
R
苯唑西林
R
含酶抑制剂复方 S
耐药性由获得性-内酰胺酶所致。
葡萄球菌
环丙沙星
R
任何三代喹诺酮
R
交叉耐其他喹诺酮类
葡萄球菌
红霉素
R
林可霉素
R
磷霉素
R
则可能耐大环内脂类、林可霉素和链霉素
*需要诱导展现耐药
葡萄球菌
红霉素
I-R
林可霉素
I-R
交叉耐全部大环内脂类
VRSA(目前已发现3 个分离株 )
菌株 万古霉素 MIC (µg/ml) 1
1
1024
2
322
3
642
1肉汤微量稀释参考MIC方法
2用自动化仪漏检或结果不肯定(有的仅 < 2 µg/ml )
NCCLS 对万古霉素- 葡萄球菌属 的解释标准
方法
S
I
MIC (µg/ml) 4 8-16
纸片(30 µg)(mm) 15 -
R
32 -
VISA
VRSA
葡萄球菌 -lactam类结果的报告方法
结果报告
Oxacillin-S 如果测试了其它的-lactam 类，报告所得结果(不加任何评论)
Oxacillin-R 即使体外敏感，报告所有的 -lactam类耐药
苯唑 MIC = 苯唑 纸片 = 西叮 纸片 = PBP2a = mecA*
99% 98%
98% 100%
特异性: “S” 阳性的菌株数/mecA 阴性的菌株数x100
苯唑 MIC = 苯唑 纸片 = 西叮 纸片 = PBP2a = mecA
100% 99%
100%
100%
敏感性/特异性 测 mecA-介导的CoNS耐药
mecA介导的葡萄球菌耐药的表型试验
纸片扩散法 – 用头孢西丁 (CX DD 30 g) 纸片
金葡菌 –其结果等于苯唑西林纸片(OX DD)结果。
CoNS – 结果优于苯唑西林纸片的结果。 结果清晰，读起来比苯唑西林容易。 报告时仍写苯唑西林，而不写头孢西丁。
MIC试验 – 仍用苯唑西林，不用头孢西丁。
－
Ｖ
革兰氏阳性球菌的生物学特性
葡 肠 链 气 动 口微
萄 球 球 球 力 腔球
球 菌 菌 菌 球 链菌
菌 属 属 属 菌 球属
属
属属
动力
－ V － － ＋ －－
６５g／Ｌ氯化钠 ＋ ＋ Ｖ ＋ ＋ － ＋
联苯胺
＋ － － － ＋ ＋＋ －
葡萄球 菌属
厌氧葡 ＋ 萄产酸
红霉素 + 0.4μ/M L耐药
菌名 金黄
结合凝 游离 固酶 凝固
酶
＋
＋
ＰＤ Ｖ ＹＮ Ｐ ＲＡ
－＋ ＋
鸟氨酸 脱羧酶
－
中间 － 施氏 ＋ 路邓 ＋
＋ ＋＋ － － － ＋＋ ＋ － － ＋－ ＋ ＋
５ 凝固酶阴性葡萄球菌的鉴别 表皮葡萄球菌对新生霉素敏感 腐生葡萄球菌对新生霉素耐药
常见的凝固阴性葡萄球菌生物学特性
菌名
表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 溶血葡萄球菌 华纳葡萄球菌 解糖葡萄球菌
导)
反应“D Test” – 阴性
无诱导： msrA-介导的 红霉素耐药
可诱导： 克林霉素耐药 (erm-介导)
在检测mecA阳性株时为什么头孢 西丁纸片的结果比苯唑西林纸片 结果好 ?
在头孢西丁存在时，mecA 的表达水平比采 用苯唑西林高。
对加替沙葡萄球菌星和左氧氟沙 星的新的折点
目前市售系统尚未改变 ; 最低浓度一般为 2 g/ml.
培养特性
血平板: 金黄色葡萄球菌典型菌落为金黄色周围有明
显透明β溶血环，部分菌落为灰白色或柠檬 色，在高盐平板为淡橙黄色菌落． 表皮葡萄球菌等在血平板上菌落为白色或柠 檬色，不溶血
生化反应
触酶阳性，能分解葡萄糖、麦芽糖、 蔗糖和甘露醇，不分解棉子和水杨苷， 液化明胶，血浆凝固酶和ＤＮＡ酶阳 性
鉴别要点
包括质控 新药的判定标准 特殊耐药性的检测
NCCLS的法规
规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控 规定常规测试报告的抗生素 不同的药判定标准不同 不同的菌判定标准也不同
CLSI/NCCLS M100-S15
革兰阳性菌
添加…
苯唑西林试验和报告 …还添加 mecA 和PBP2a 试验
敏感性: “R” 阳性菌株数/mecA 阳性的菌株数x100
苯唑 MIC = 苯唑 纸片 = 西叮 纸片 = PBP2a =mecA*
99% 99%
98% 100%
特异性: “S” 阳性的菌株数/mecA 阴性的菌株数x100
苯唑 MIC =苯唑纸片<西叮纸片= PBP2a < mecA*
61% 67% 96% 94%**
葡萄球菌中用头孢西丁查mecA- 介导 的耐药性
头孢西丁抑菌圈 (mm) Res
Susc
金葡菌和 路登葡萄球菌
CoNS
19* 24*
20** 25**
* 报告苯唑西林耐药 ** 报告苯唑西林敏感
葡萄球菌 – 苯唑西林
MIC (µg/ml) Susc Int Res
金葡菌 和
2
路登葡萄球菌
-
4
CoNS
0.25 - 0.5
如何鉴定路登葡萄球菌？
凝固酶
玻 片法
阳性或阴性
试管法
阴性
鸟氨酸脱羧酶Ornithine decarboxylase 阳性
PYR Pyrrolionyl arylamidase
阳性
青霉素
敏感
敏感性/特异性 测 mecA-介导的金葡菌耐药
敏感性: “R” 阳性菌株数/mecA 阳性的菌株数x100
需氧和兼性厌氧球菌
革兰阳性球菌
葡萄球属
是一类触酶试验阳性革兰氏阳性球菌 包括：金黄色葡萄球菌
腐生葡萄球菌 表皮葡萄球菌 中间葡萄球菌 施氏葡萄球菌 路邓葡萄球菌等３２个种，金黄 色葡萄球菌是重要的致病菌
形态与染色
革兰阳性球菌直径0.5-1.5μm，短 链不规则葡萄状排列，在液体培养 或脓液标本中往往成双或短链，误 为链球菌。在菌血症或败血症患者， 两者血液标本直接涂片查见阳性球 菌
VA 抑菌环<14 mm和在VA 筛选平皿上生 长
克林霉素纸片扩散诱导试验QA/QC
每日/ 每周 QC S. aureus ATCC 25923 用于红霉素和克
林霉素纸片法质控 QA
S. aureus ATCC BAA-976 (msrA; 无诱
导) S. aureus ATCC BAA 977 (ermA; 有诱
孔氏葡萄球菌 －
－
Ｖ
＋
－
＋
－
模仿葡萄球菌 ＋
－
＋
＋
＋
－
－
头状葡萄球菌 －
－
Ｖ
＋
＋
－
－
木糖葡萄球菌 Ｖ
－
＋
＋
＋
＋
－
耳葡萄球菌 Ｖ
－
－
－
Ｖ
－
－
施氏葡萄球菌 ＋
＋
－
－
－
－
－
路邓葡萄球菌 ＋
Ｖ
Ｖ
－
＋
－
Ｖ
人型葡萄球菌 －
－
＋
－
＋
－
－
耳葡萄球菌 Ｖ
－
－
－
Ｖ
－
－
施氏葡萄球菌 ＋
＋
－
－
－
－
－
路邓葡萄球菌 ＋
Ｖ
Ｖ
－
＋
呋喃唑 － 酮耐药 １００μ ／片
触酶 ＋
肠球 链球 菌属 菌属 ＋＋ +-
＋Ｖ
－－
－－
气球 动力 菌属 球菌
属 ＋－ ND ND
－ ＮＤ
－－
－＋
口腔 链球 属 ＋ ND
ＮＤ
－
＋－
微球 菌属 － -
－
＋
＋
纸片扩散法－标准化
NCCLS：美国实验室标准化委员会 (National Committee for Clinical Laboratory Standards) 每年修订更改
试验策略:
医生要求时做
应该用能查出 低水平耐药的方法 (如： 纸片扩 散法、 扩展的稀释板、 Etest)
似乎环丙沙星能预报加替沙星和左氧氟沙星的 结果
将 4 or 8 g/ml 的MICs值报告 “R”是可以 的
对加替沙葡萄球菌星和左氧氟沙 星的新的折点
旧旧 旧 新 新 新 SI R S I R 环丙沙星 <1 2 24 不变 不变 不变
加碘沙星 <2 4 28 <0.5 1 >2
左氧氟沙 <2 4 28 <1 2 >4 星
沙星
没 没 没 <0.5 1 >2 有有 有
葡萄球菌 . 红霉素 / 克林霉素
机制 基因 msrA
核糖体修饰 erm
核糖体修饰 erm
红霉素 克林霉素 RS
R源自文库
S*
R
R
结构
泵出
erm= 红霉素核糖体23S rRNA甲基化 （MLSB 耐药） msrA= 大环内脂类及链阳霉素
和 试验 / 报告的建议 (表 1)
泰利霉素 – 添加入表 1
Oxacillin-耐药的 葡萄球菌
mecA = 由基因决定的 苯唑西林耐药 称 “经典” MRSA 和 MRCoNS mecA 编码 PBP2a蛋白质 引起苯唑西林耐药 所以要测 mecA 或 PBP2a 查“经典”苯唑西林 耐药 只有极少数苯唑西林耐药的葡萄球菌(非经典) mecA 或 PBP2a 阴性 MICs 或 抑菌圈在 “R” 范围 苯唑西林耐药分界限
NCCLS 对万古霉素- 葡萄球菌属 的解释标准
方法(mm) S MIC (µg/ml) 4 纸片(30 µg) 15
I
8-16 -
R
32 -
金葡对万古霉素测试流程图
包括
MIC方法加 VA 筛选平皿
(BHIA with 6 µg/ml of VA)
纸片扩散方法加 VA 筛选平皿
(BHIA with 6 µg/ml of VA)
用头孢西丁纸片作扩散试验 OX-S 葡萄球菌要求报告 -内酰胺药 结果 测试路登葡萄球菌Staphylococcus lugdunensis 金葡菌降低对万古霉素敏感性 用BHI 万古霉素筛选琼脂检测
萄葡球菌属 (续)
添加了…
克林霉素诱导试验– QA / QC的建议 氟喹诺酮类 – 改写了纸片扩散和 MIC 折点 达托霉素纸片扩散法 ，MIC 折点
ＰＹ Ｒ
凝
固
因
子
－－
－－ ＋－ －－ －－
脲酶
＋ ＋ － ＋ ＮＤ
甘蔗 露糖
醇
－＋ Ｖ＋ Ｖ＋ Ｖ＋ －－
新生 霉素 耐药
多粘 菌素 Ｂ耐 药
－＋
＋－ －－ －－ －－
孔氏葡萄球菌 － － Ｖ ＋ － ＋ －
常见的凝固阴性葡萄球菌生物学特性
菌名
ＰＹＲ 凝固 脲素 甘露醇 蔗糖 新生霉 多粘菌
因子
素耐药 素Ｂ耐药
１本菌的血平板菌落呈金黄色或白色革兰 氏阳性球菌，ＤＮＡ酶和血浆凝固酶均为 阳性，发酵甘露醇. ２与微球菌的鉴别 葡萄球菌属葡萄糖为发 酵型,镜下以葡萄状排列为主，菌体较小； 而微球菌为氧化型或无反应，镜检以四联 排列为主，且菌体较大。 ３与链球菌的鉴别 链球菌氧化型，触酶阴 性
凝固酶阳性葡萄菌的生物学特性
葡萄球菌
庆大霉素 R 交叉耐氨基糖代类但除外链霉素。
葡萄球菌
-内酰氨酶（+）
青霉素
R
苯唑西林
R
含酶抑制剂复方 S
耐药性由获得性-内酰胺酶所致。
葡萄球菌
环丙沙星
R
任何三代喹诺酮
R
交叉耐其他喹诺酮类
葡萄球菌
红霉素
R
林可霉素
R
磷霉素
R
则可能耐大环内脂类、林可霉素和链霉素
*需要诱导展现耐药
葡萄球菌
红霉素
I-R
林可霉素
I-R
交叉耐全部大环内脂类
VRSA(目前已发现3 个分离株 )
菌株 万古霉素 MIC (µg/ml) 1
1
1024
2
322
3
642
1肉汤微量稀释参考MIC方法
2用自动化仪漏检或结果不肯定(有的仅 < 2 µg/ml )
NCCLS 对万古霉素- 葡萄球菌属 的解释标准
方法
S
I
MIC (µg/ml) 4 8-16
纸片(30 µg)(mm) 15 -
R
32 -
VISA
VRSA
葡萄球菌 -lactam类结果的报告方法
结果报告
Oxacillin-S 如果测试了其它的-lactam 类，报告所得结果(不加任何评论)
Oxacillin-R 即使体外敏感，报告所有的 -lactam类耐药
苯唑 MIC = 苯唑 纸片 = 西叮 纸片 = PBP2a = mecA*
99% 98%
98% 100%
特异性: “S” 阳性的菌株数/mecA 阴性的菌株数x100
苯唑 MIC = 苯唑 纸片 = 西叮 纸片 = PBP2a = mecA
100% 99%
100%
100%
敏感性/特异性 测 mecA-介导的CoNS耐药
mecA介导的葡萄球菌耐药的表型试验
纸片扩散法 – 用头孢西丁 (CX DD 30 g) 纸片
金葡菌 –其结果等于苯唑西林纸片(OX DD)结果。
CoNS – 结果优于苯唑西林纸片的结果。 结果清晰，读起来比苯唑西林容易。 报告时仍写苯唑西林，而不写头孢西丁。
MIC试验 – 仍用苯唑西林，不用头孢西丁。
－
Ｖ
革兰氏阳性球菌的生物学特性
葡 肠 链 气 动 口微
萄 球 球 球 力 腔球
球 菌 菌 菌 球 链菌
菌 属 属 属 菌 球属
属
属属
动力
－ V － － ＋ －－
６５g／Ｌ氯化钠 ＋ ＋ Ｖ ＋ ＋ － ＋
联苯胺
＋ － － － ＋ ＋＋ －
葡萄球 菌属
厌氧葡 ＋ 萄产酸
红霉素 + 0.4μ/M L耐药
菌名 金黄
结合凝 游离 固酶 凝固
酶
＋
＋
ＰＤ Ｖ ＹＮ Ｐ ＲＡ
－＋ ＋
鸟氨酸 脱羧酶
－
中间 － 施氏 ＋ 路邓 ＋
＋ ＋＋ － － － ＋＋ ＋ － － ＋－ ＋ ＋
５ 凝固酶阴性葡萄球菌的鉴别 表皮葡萄球菌对新生霉素敏感 腐生葡萄球菌对新生霉素耐药
常见的凝固阴性葡萄球菌生物学特性
菌名
表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 溶血葡萄球菌 华纳葡萄球菌 解糖葡萄球菌
导)
反应“D Test” – 阴性
无诱导： msrA-介导的 红霉素耐药
可诱导： 克林霉素耐药 (erm-介导)
在检测mecA阳性株时为什么头孢 西丁纸片的结果比苯唑西林纸片 结果好 ?
在头孢西丁存在时，mecA 的表达水平比采 用苯唑西林高。
对加替沙葡萄球菌星和左氧氟沙 星的新的折点
目前市售系统尚未改变 ; 最低浓度一般为 2 g/ml.
培养特性
血平板: 金黄色葡萄球菌典型菌落为金黄色周围有明
显透明β溶血环，部分菌落为灰白色或柠檬 色，在高盐平板为淡橙黄色菌落． 表皮葡萄球菌等在血平板上菌落为白色或柠 檬色，不溶血
生化反应
触酶阳性，能分解葡萄糖、麦芽糖、 蔗糖和甘露醇，不分解棉子和水杨苷， 液化明胶，血浆凝固酶和ＤＮＡ酶阳 性
鉴别要点
包括质控 新药的判定标准 特殊耐药性的检测
NCCLS的法规
规定纸片含量、接种浓度、培养基、平 皿厚度、判定标准、质控 规定常规测试报告的抗生素 不同的药判定标准不同 不同的菌判定标准也不同
CLSI/NCCLS M100-S15
革兰阳性菌
添加…
苯唑西林试验和报告 …还添加 mecA 和PBP2a 试验
敏感性: “R” 阳性菌株数/mecA 阳性的菌株数x100
苯唑 MIC = 苯唑 纸片 = 西叮 纸片 = PBP2a =mecA*
99% 99%
98% 100%
特异性: “S” 阳性的菌株数/mecA 阴性的菌株数x100
苯唑 MIC =苯唑纸片<西叮纸片= PBP2a < mecA*
61% 67% 96% 94%**
葡萄球菌中用头孢西丁查mecA- 介导 的耐药性
头孢西丁抑菌圈 (mm) Res
Susc
金葡菌和 路登葡萄球菌
CoNS
19* 24*
20** 25**
* 报告苯唑西林耐药 ** 报告苯唑西林敏感
葡萄球菌 – 苯唑西林
MIC (µg/ml) Susc Int Res
金葡菌 和
2
路登葡萄球菌
-
4
CoNS
0.25 - 0.5
如何鉴定路登葡萄球菌？
凝固酶
玻 片法
阳性或阴性
试管法
阴性
鸟氨酸脱羧酶Ornithine decarboxylase 阳性
PYR Pyrrolionyl arylamidase
阳性
青霉素
敏感
敏感性/特异性 测 mecA-介导的金葡菌耐药
敏感性: “R” 阳性菌株数/mecA 阳性的菌株数x100
需氧和兼性厌氧球菌
革兰阳性球菌
葡萄球属
是一类触酶试验阳性革兰氏阳性球菌 包括：金黄色葡萄球菌
腐生葡萄球菌 表皮葡萄球菌 中间葡萄球菌 施氏葡萄球菌 路邓葡萄球菌等３２个种，金黄 色葡萄球菌是重要的致病菌
形态与染色
革兰阳性球菌直径0.5-1.5μm，短 链不规则葡萄状排列，在液体培养 或脓液标本中往往成双或短链，误 为链球菌。在菌血症或败血症患者， 两者血液标本直接涂片查见阳性球 菌
VA 抑菌环<14 mm和在VA 筛选平皿上生 长
克林霉素纸片扩散诱导试验QA/QC
每日/ 每周 QC S. aureus ATCC 25923 用于红霉素和克
林霉素纸片法质控 QA
S. aureus ATCC BAA-976 (msrA; 无诱
导) S. aureus ATCC BAA 977 (ermA; 有诱
孔氏葡萄球菌 －
－
Ｖ
＋
－
＋
－
模仿葡萄球菌 ＋
－
＋
＋
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－
头状葡萄球菌 －
－
Ｖ
＋
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－
－
木糖葡萄球菌 Ｖ
－
＋
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耳葡萄球菌 Ｖ
－
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施氏葡萄球菌 ＋
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路邓葡萄球菌 ＋
Ｖ
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Ｖ
人型葡萄球菌 －
－
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耳葡萄球菌 Ｖ
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施氏葡萄球菌 ＋
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路邓葡萄球菌 ＋
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