微生物学检验葡萄球菌属
主管检验技师考试临床医学检验微生物检验讲义第13章病原性球菌及检验
病原性球菌及检验● 考点葡萄球菌属、链球菌属、肠球菌属、奈瑟菌属生物学性状微生物学检查法临床意义（致病性、所致疾病）【内容讲解】普及共性，单记个性生物学性状形态与结构：革兰染色性，菌体形态，大小，排列状态，特殊结构。
培养特性：对气体需求，营养要求，最适pH值，最适温度，在培养基中的生长现象。
生化反应：特殊生化。
抗原：分类：致病性致病物质所致疾病微生物学检查：针对生物学性状和致病性。
一、葡萄球菌属一群革兰阳性球菌，因常堆聚成葡萄串状而得名。
（一）生物学特性1.形态与结构G+，球形，0.5～1.5μm，呈葡萄串状成堆排列（在脓汁、肉浸液培养物中，可见单个，成对或短链排列），无鞭毛和芽胞，某些菌株能形成荚膜。
2.培养特性需氧或兼性厌氧，营养要求不高，最适pH为7.4，最适温度为35～37℃。
普皿：圆形、凸起、表面光滑湿润、边缘整齐并且不透明的菌落，直径为2～3mm。
可产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。
血琼脂平板：几乎所有的葡萄球菌可产生α、β、γ和δ溶血素。
液体培养基：生长迅速呈均匀混浊状。
3.生化反应触酶试验（+）；多数能分解葡萄糖、麦芽糖及蔗糖，产酸不产气；分解甘露醇产酸、液化明胶和产生血浆凝固酶（多数致病性葡萄球菌）。
4.抗原（1）蛋白抗原：为完全抗原，有种属特异性，无型特异性。
存在于葡萄球菌的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白（SPA）。
（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特异性，有三种：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。
5.分类（1）《伯杰系统细菌学手册》（2）古典分类法6.抵抗力对理化因素抵抗力强，耐热，耐干燥，耐高盐。
是抵抗力最强的无芽胞细菌。
（二）临床意义葡萄球菌感染的特点是感染部位组织的化脓、坏死和脓肿形成。
金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起临床感染最常见的葡萄球菌。
（1）金黄色葡萄球菌致病物质：血浆凝固酶；葡萄球菌溶血素；杀白细胞素；肠毒素；表皮溶解毒素；毒性休克综合征毒素。
葡萄菌属的微生物学检验方法与原理
葡萄菌属的微生物学检验方法与原理1.标本采集：根据葡萄球菌感染所致的疾病不同，可采集脓汁、渗出液、伤口分泌物、血液、尿液、粪便、痰液以及脊髓液等。
2.检验方法及鉴定（1）直接镜检：无菌取脓汁、痰、渗出物和脑脊液（离心后取沉渣）涂片，经革兰染色后镜检，如为革兰阳性球菌呈葡萄状排列可初步报告为："找到革兰阳性葡萄状排列球菌，疑为葡萄球菌".（2）分离培养：血液标本（静脉血约5ml）注入50ml 葡萄糖肉汤或含硫酸镁肉汤增菌培养，迅速摇匀，以防凝固，置35℃，一般于24h后开始观察有无细菌生长，若均匀混浊，溶血及胶胨状生长，则接种于血琼脂，进一步鉴定，若无细菌生长，于48～72h后自行观察（一般以7天为限），并接种血琼脂，以确定有无细菌生长。
血液标本也可注入商品血培养瓶培养。
脓汁、尿道分泌物、脑脊液离心沉淀物，通常可直接接种血琼脂。
35℃18～24h培养，可见直径2～3mm，产生不同色素的菌落。
金黄色葡萄球菌在菌落周围有透明的溶血环。
尿液标本，必要时作细菌菌落计数。
粪便、呕吐物应接种高盐卵黄或高盐甘露醇琼脂平板，经35℃18～24h培养，可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。
（3）鉴定试验1）触酶试验：细菌产生的过氧化氢酶催化双氧水生成水和氧气，产生气泡。
方法：取营养琼脂上的菌落置于洁净试管内或洁净玻片上，滴加3％H202溶液数滴，观察结果，如立即（1min内）有大量气泡产生为阳性，不产生或气泡量少为阴性。
葡萄球菌属为触酶阳性。
2）血浆凝固酶试验：血浆凝固酶是金黄色葡萄球菌所产生的一种与其致病力有关的侵袭性酶，分游离型和结合型两种。
其作用是使血浆中的纤维蛋白在菌体表面沉积和凝固以阻碍吞噬细胞的吞噬。
可分别用试管法和玻片法检测。
玻片法用于粗筛，若玻片法为可疑或阴性结果，还需用试管法确证。
使用的血浆为EDTA抗凝兔血浆。
有商品化乳胶凝集试验。
3）甘露醇发酵试验。
4）新生霉素敏感试验：凝固酶阴性的葡萄球菌的鉴别，采用新生霉素敏感试验。
金黄色葡萄球菌的检查[宝典]
![金黄色葡萄球菌的检查[宝典]](https://img.taocdn.com/s3/m/caed84d80408763231126edb6f1aff00bed57020.png)
金黄色葡萄球菌的检查同学们，这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。
金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。
本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤。
看，这就是金黄色葡萄球菌，它是一种革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。
该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。
所以，国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌，检验金黄色葡萄球菌有重要意义。
金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示，与之前讲述过的其他控制菌的检查一样：在完成培养基的配制和供试品的处理后，用营养肉汤于30～35℃增菌培养18～24小时，必要时可延至48小时。
增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。
接着，进行分离纯化，其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。
以接种环沾取以接种环沾取1～2环培养液，划线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置30～35℃培养24～72小时。
当阳性对照平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表中所列特征，可判为未检出金黄色葡萄球菌。
若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别接种于营养琼脂斜面上，于30～35℃培养18～24小时，取其培养物做以下检查。
1. 革兰染色镜检革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征：金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，无荚膜。
排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列，菌体较小。
2. 血浆凝固酶试验金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血浆凝固。
检查时，轻轻将试管倾斜（动作勿大），仔细观察，阴性对照管血浆应流动自如，阳性对照管血浆应凝固状，若试验管液血浆凝固为血浆凝固酶试验阳性；否则为阴性。
微生物学检验葡萄球菌属PPT课件
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致病物质
• 凝固酶 • 葡萄球菌溶素 • 杀白细胞素 • 肠毒素 • 剥脱毒素 • 毒性休克综合征毒素－1
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凝固酶
• 游离凝固酶：采用试管法检测
协同因子
游离凝固酶
凝血酶
纤维蛋白原
纤维蛋白
血浆凝固
• 结合凝固酶：采用玻片法检测
报告
检验方法—直接镜检
• 方法:取标本直接涂片,革兰染色后镜检 • 初步报告:
“查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑 似葡萄球菌” “查见革兰阳性球菌”
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检验方法—分离培养
• 脓、痰、脑脊液标本－→接种血平板 • 菌落特征：光滑型、中等大小、脂溶性
色素、透明溶血环（β-溶血环）
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葡萄球菌传统分类
产生溶血毒素
金黄色 葡萄球菌
+
表皮 葡萄球菌
－
腐生 葡萄球菌
－
产生凝固酶
+
－
－
产生耐热DNA酶
+
－
－
产生SPA
+
－
－
新生霉素敏感性
S
S
R
致病性
强
弱
无
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金葡菌噬菌体分型
• 分型：分五个群，共22型 • 意义：追踪传染源
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抵抗力
• 是抵抗力最强的无芽孢细菌 • 耐干燥 • 对龙胆紫敏感 • 易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄
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抗原构造
★葡萄球菌A蛋白（SPA） • 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁 • 可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性
第三节 金黄色葡萄球菌检验
血平板
BP平板
36± 1℃ 24hr
镜检 营养肉汤
36± 1℃ 24hr
血浆凝固酶 实验
36± 1℃ 6hr
报告结果
定量 检测
（MPN法）
25g样品+ 225ml 生理盐水
梯度稀释
选三个连续梯度，每个梯度各取3mL加入3管胰酪胨大豆肉汤
36± 1℃ 48hr
将有生长的管划线接种
选择适宜稀释度的样品匀液，各取1mL分别加入纸片
36±1℃ 判读 24±2h
只有典型紫红色菌落 没有菌落
除典型紫红色菌落外其他 颜色的菌落 加入确认反应片， 36±1℃，培养1~3h 有粉红色菌晕的菌落计数 为金黄色葡萄球菌
将所有紫红色菌落计数 为金黄色葡萄球菌 报告
• 金黄色葡萄球菌PetrifilmTM测试片，含具有显 色功能、经改良的Baird-Parker培养基，对金黄 色葡萄球菌的生长有很强的选择。金黄色葡萄 球菌在测试片上生成为暗紫红色的菌落，可以 直接完成鉴定和计数。
• 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好； • 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长。 • 一般用含10%氯化钠的大豆肉汤增菌或 7.5%氯化钠肉汤增菌。
生物学特性—生化特征
• 所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的 菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。 • 产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶 菌酶，大多数菌株可水解天然的动物蛋白， 例如血红蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和 多肽类如明胶，水解脂类、吐温类和磷脂 蛋白质，并释放脂肪酸；
分布
• 在自然界中广泛存在，空气、水、灰尘及人和动 物的排泄物中都可找到。
• 作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和 动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的 皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受 其污染的机会很多。
医学微生物学葡萄球菌
2. 间接接触传播：如 使用被污染的医疗器 械、血液制品等。
3. 空气气溶胶传播： 在封闭、通风不良的 环境中，金葡菌可通 过空气气溶胶的形式 传播。
02
葡萄球菌属的生物学特性
葡萄球菌属的形态及染色特性
葡萄球菌属的形态
葡萄球菌属的细菌细胞壁厚实，通常呈圆形或卵圆形，直径约为0.5-1.0微米 。它们通常以单个、成对或葡萄状形式出现。
葡萄球菌属的致病性及毒力因子
葡萄球菌属的致病性
葡萄球菌属的细菌具有多种致病性，能够引起人类和动物多 种疾病。它们通常通过接触传播，如皮肤和黏膜接触，或通 过吸入飞沫和尘埃传播。
葡萄球菌属的毒力因子
葡萄球菌属的毒力因子主要包括毒素、侵袭性酶类和其他表 面结构。这些毒力因子在葡萄球菌的致病过程中发挥重要作 用，如凝固酶、脂酶、透明质酸酶等。
03
葡萄球菌属的检测与鉴定
临床标本的采集及处理
标本采集
根据感染部位不同，采集的方法和部位也有所差异。例如，皮肤感染的标本 可以通过拭子擦拭病灶边缘皮肤表面来采集，而血液感染的标本则需要通过 静脉采血来获取。
标本处理
采集到的标本需要进行预处理，如清洗、离心等，以去除杂质和干扰因素， 以便于后续的检测和鉴定。
分类：葡萄球菌属分为三个主要 种：表皮葡萄球菌、腐生葡萄球 菌和金黄色葡萄球菌。
1. 表皮葡萄球菌主要存在于皮肤 和黏膜上，通常不致病。
3. 金黄色葡萄球菌具有致病性， 可引起多种疾病，如肺炎、心内 膜炎等。
葡萄球菌属在医学有重要意义，因其可引起多种感 染，包括皮肤感染、肺炎、心内膜炎等。
葡萄球菌属的分离培养及鉴定
1 2
培养基选择
选择适合葡萄球菌属生长的培养基进行培养， 如营养琼脂培养基、肉汤培养基等。
微生物检测技术-金黄色葡萄球菌检测
国内检测标准
GB 4789.10-2010
食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验
GB/T 20944.32008
食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素的测定 第3部分：黄曲霉毒素 M1的测定
GB/T 23511.42008
食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定 第4部分：脱氢乙酸含量的 测定
样品中的快速检测。
纳米技术
纳米材料如纳米金、纳米孔等在 金黄色葡萄球菌检测中展现出巨 大潜力，具有高灵敏度、低检测
限和快速响应等优点。
未来研究方向
开发更高效、特异性的检测方法
01
针对金黄色葡萄球菌的不同表型和基因型，开发更高效、特异
性的检测方法，提高检测的准确性和可靠性。
集成化与自动化
02
将多种检测方法集成于一体，实现金黄色葡萄球菌的自动化检
治疗方案的选择。同时，对于流行病学调查和疾病监测也具有重要意义。
05
CATALOGUE
金黄色葡萄球菌检测技术展望
新技术发展与应用
基因组学技术
利用全基因组测序技术，能够快 速准确地检测金黄色葡萄球菌，
并识别其耐药性和毒力基因。
生物传感器技术
生物传感器能够实时、快速地检 测金黄色葡萄球菌，具有高灵敏 度和特异性，适用于食品和环境
测，提高检测效率，降低人工误差。
多重耐药性研究
03
深入研究金黄色葡萄球菌的多重耐药性机制，为遏制耐药性的
传播提供科学依据和技术支持。
对公共卫生的影响与意义
保障食品安全
金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，通过改进检测技 术，能够及时发现和控制食品中的污染，保障公众的食品 安全。
预防疾病传播
葡萄球菌
3．荚膜抗原几乎所有金黄色葡萄球菌菌株的表面有荚膜多糖抗原的存在。表皮葡萄球菌仅个别是菌株有此 抗原。
致病性
致病物质
免疫性
致病物质
金葡菌产生多种毒素与酶
历史发展
历史发展
葡萄球菌
葡萄球菌是柯赫（R．Koch．1878年）、巴斯德（L．Pasteur，1880年）和奥格斯顿（A．Og-ston，1881 年）从脓液中发现的，但通过纯培养并进行详细研究的是F．J．Rosenbach（1884年）。从黄色葡萄球菌的细胞 壁分离出的蛋白质A可与免疫球蛋白（主要为IgG）进行特异的结合，这是由K．Jensen氏（1959年）发现的，现 已被应用于各种免疫反应。
谢谢观看
食物中毒病人的呕吐物，粪便或剩余食物在作细菌分离鉴定的同时，接种于肉汤培养基中，孵育后取滤液注 射于6～8周龄的幼猫腹腔，注射后4小时内发生呕吐、腹泻、体温升高或死亡提示有肠毒素存在的可能。
防治原则
防治原则
加强卫生宣传教育，讲究个人卫生，注意防护措施。皮肤创伤应及时处理，注意中西医结合，合理用药，避 免滥用抗生素。
培养特性
金黄色葡萄球菌革兰氏染色营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长 更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧。28~38℃均能生长，致病菌最适温度为37℃，PH为4.5~9.8，最适为7.4。 在肉汤培养基中24小时后呈均匀混浊生长，在琼脂平板上形成圆形凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，不透明的 菌落。不同种的菌标产生不同的色素，如金黄色、白色、柠檬色。色素为脂溶性。葡萄球菌在血琼脂平板上形成 的菌落较大，有的菌株菌落周围形成明显的完全透明溶血环（β溶血），也有不发生溶血者类
09-1葡萄球菌属
局部化脓性感染的微生物学检查意义不大，但在确定全身性感染病因或选择有效治疗药物上有一定价值。
1标本直接涂片镜检依据病情可采取脓汁、血液、脑脊液、尿液和骨髓穿刺液等。食物中毒取剩余食物、患者呕吐物、粪便等不同标本。取标本涂片，革兰染色后镜检。一般根据细菌形态、排列和染色特性可做出初步诊断。
2分离培养和鉴定将标本接种至血琼脂平板t 37℃孵育18～24小时后挑选可疑菌落行涂片染色镜检。血液标本需经肉汤培养基增菌后，再接种到血琼脂平板。
致病性葡萄球菌的鉴定主要根据：①能产生金黄色色紊；②有溶血性；③凝固酶试验阳性；④耐热核酸酶试验阳性；⑤能分解甘露醇产酸。由于凝固酶阴性菌株有时亦能致病，在最后判定时应结合临床病症。毒素鉴定多采用E【tlsA法。进一步的型别鉴定可以采用细菌核糖体基因分型法(rlb0‘yp_Ilg)、质粒指纹图谱等分型法。
(6)毒性休克综合征毒素1(toxlr shock synd…toxin—1．TSS-1)：引起毒性休'克综合征(TSS)。Tss_r_1是金黄色葡萄球菌分泌的一种外毒素，可引起机体发热、休克及脱屑性皮疹。TSS_r'l能增加机体对内毒素的敏感性，感染产毒菌株后，可引起机体多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综台征。
(2)葡萄球菌溶素(staphylolysln)：致病性葡萄球菌能产生多种抗原性不同的溶素，分为。、D、y、8等，对人类有致病作用的主要是a溶素。a溶素生物学活性广泛，对多种哺乳动物红细胞有溶血作用，对白细胞、血小板、肝细胞、皮肤细胞等有损伤破坏作用。a溶紊为外毒索，抗原性好。其作用机制可能是毒素分子插入细胞膜疏水区，破坏膜的完整陛导致细胞溶解。
(3)根据核酸分析的遗传学分型：随着分子生物学技术的发展，出现了DNA和RNA分析的遗传学分型方法，其特异性比表型分类法高。如DNA脉冲电泳和PcR法分型等方法。目前，依据16s rRNA不同，把葡萄球菌属又分为48个种和亚种。
金黄色葡萄球菌检验与计数,GB4789.10-2016及纸片法-JW
金黄色葡萄球菌的肠毒素
金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一 种重要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因 为食品污染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大 量肠毒素而导致的。
近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株 在实验室条件下可产生肠毒素，并且1个菌株能 产生两种或两种以上的肠毒素。
肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的 肽链组成。分子量约为3000左右。易溶于水， 难溶于有机溶剂。
分离培养基
Baird-Parker琼脂：培养基中含有卵黄亚 碲酸钾，能抑制大多数细菌的繁殖，并能 促进金黄色葡萄球菌的生长使其产生黑色 和晕圈。培养基中的丙酮酸钠和甘氨酸也 能促进金黄色葡萄球菌的生长。
金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑 凸起、湿润，直径约2~3mm，颜色呈灰色到 黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在 其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似 有奶油树胶的硬度，偶而可见无混浊带和 透明圈的非典型菌落。
血浆凝固酶试验
挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落 1个或以上，分别接种到5mL BHI和营养琼脂 小斜面，36℃±1℃培养18 h～24 h。
取新鲜配置兔血浆0.5mL，放入小试管中，再 加入可疑菌落的BHI培养物0.2mL～0.3mL，振 荡摇匀，置36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半 小时观察一次，观察6h，如呈现凝固（即将 试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积 大于原体积的一半，判定为阳性结果。
金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色， 有时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、 表面光滑，周围有透明的β溶血环。
血平皿上的形态
血平板：金黄色葡萄球菌可以产生溶血素， 因此在血平板上产生明显的溶血环。
典型菌落：呈金黄色，有时也为白色，大而 突起，圆形，不透明，表面光滑，菌落周围 有完全透明溶血环。
葡萄球菌属
葡萄球菌属
流行病学 生物பைடு நூலகம்性状
流行病学现状 形态与染色 培养和生化反应 抗原构造 抵抗力
内 容
致病性 免疫性
致病物质
所致疾病
临床医学免疫的特点 标本 涂片染色镜检 分离培养 鉴定 临床医学预防治疗
微生物学检查方法 防治原则
流行病学
葡萄球菌属（Staphylococcus）
成人对金黄色葡萄球菌有一定天然抵抗 力。 当机体皮肤粘膜损伤或机体抵抗力下降 时才引起感染。 病后能获得一定免疫力，但作用不强， 且不持久，可再次感染。
微生物学检验
（一）标本采集：脓、血液、
脑脊液、粪便、呕吐物、剩余食 物。
（二）检验程序（方法）： 1.血液、脑脊液→ 增 菌培养（葡萄糖肉汤 37℃24h） 2.直接涂片染色： （Gram染色） 3.分离培养 4.鉴定试验
生化反应
触酶阳性，致病株可分 解甘露醇（鉴定致病性）
抗原结构
1.葡萄球菌A蛋白（SPA） 2.荚膜 3.多糖抗原
抵抗力
易产生耐药性
致病性
血浆凝固酶 肠毒素
葡萄球菌溶血素
致病物质
表皮剥脱毒素
杀白细胞素 其他酶
TSST-1
1.致病物质
1 血浆凝固酶 coagulase：
血浆协同因子
致病性
纤维蛋白原
游离凝固酶
凝血酶样物质
纤维蛋白 结合凝固酶：菌体纤维蛋白原受体，菌血浆混合，血浆纤维 蛋白原与菌受体交联，细菌凝聚
作用：抗吞噬、抗杀菌物质、菌不易扩散
2 葡萄球菌溶素 staphylosin：30KDa蛋白，αβγδ四种，其中α致
食品中金黄色葡萄球菌检验
式（2）
案例
T A1B1/ C1 A2B2 / C2其中Leabharlann 1.1d样品稀释液
10-1
10-2
典型菌落数
183
21
T：样品中金黄色葡萄球菌菌落数；
用于做血浆凝固
A1：第一稀释度（低稀释倍数）典型菌落的总数；
5
5
酶菌落数
A2：第二稀释度（高稀释倍数）典型菌落的总数；
B1：第一稀释度（低稀释倍数）血浆凝固酶阳性的菌落数； 血浆凝固酶阳性
二、金黄色葡萄球菌定性检测
注意事项
Baird-Parker平板： 胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏:提供碳源、氮源、硫、维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠:生长促进剂 亚碲酸盐:对除金黄色葡萄球菌外的其他能分解卵黄菌株有毒性，并使菌落产生黑色 卵黄:提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂:对金黄色葡萄球菌以外的其它菌株有抑制作用。
36±1℃， 24~48h
圆形，光滑突起，湿润，直径23mm，颜色呈灰色到黑色，边缘 常为淡色（米黄色或灰白色略带 灰色或黄色的白色），周围为一 混浊带，在其外缘常有一透明圈。 用接种针接触菌落似有黄油树胶 的粘稠感。
革兰氏染色
血浆凝固酶鉴别
金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球 菌，排列呈葡萄球状，无芽孢
血平板上其典型菌落呈金黄色，有时也为白色，大 而突起，圆形，不透明，表面光滑，有溶血圈。
36℃±1 ℃
45h~48h
计数及血浆凝固酶试验
GB 4789.10-2016 金黄色葡萄球菌的检验第二法
报告
操作规程
样品稀释 同菌落总数检验
选择合适稀释度 接种涂布BP平板
三、金黄色葡萄球菌定量检测
样品处理
移1ml
第三篇 常见微生物
•
ห้องสมุดไป่ตู้
一 生物学特性
• • 1 形态与染色 革兰阳性，呈圆形，直径0.5~1.5um。在固体培养基上成堆排 列，形似葡萄串状；在液体培养基或脓汁标本中可见成单、成双或短链状排 列，易与链球菌混淆。葡萄球菌无鞭毛、无芽胞，某些菌株可形成荚膜。当 细菌衰老、死亡被吞噬后或在青霉素等药物作用下（可形成L型细菌），菌体 可呈革兰阴性。 2 培养特性 需氧或兼行厌氧，营养要求不高，在大多数细菌培养基上生长迅 速，最适 为7.4，最适温度为35~37℃。在固体培养基上培养24~48小时后， 最适PH为 最适 可形成直径2~3mm、圆形、凹起、表面光滑、边缘整齐、湿润不透明的菌落。 不同菌株产生不同的脂溶性色素，如金黄色、白色、柠檬色色素。某些菌株 耐盐性强，能耐受10%~15%氯化钠，在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。 金黄色葡萄球菌在羊血琼脂平板上的典型菌落为金黄色、光滑整齐、微隆起、 不透明菌落，其周围有明显的β-溶血环，其中有小菌落变异株，生长缓慢， 菌落较小，易于β-溶血性链球菌的菌落相混淆。在液体培养基中呈均匀混浊 生长。 3 生化反应 触酶阳性，多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。 致病菌株可分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶，耐热DNA酶阳性
第三篇 常见微生物鉴定技术
第十章 需氧和兼性厌氧球菌
第一节 葡萄球菌属
• 葡萄球菌属是一类触酶实验阳性的革兰染色阳性 球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐 生葡萄球菌、溶血葡萄球菌等35个钟，17个亚种， 因其常堆积成葡萄串状而得名。广泛分布于自然 界，大多数无致病性，并构成人体正常的球菌。 有些人群的皮肤和鼻咽部可带有致病菌株，特别 是医务工作者带菌率高达70%以上。金黄色葡萄 球菌为其中最重要的致病菌，是引起医院感染的 重要微生物，是常见的化脓性性球菌。近年来， 表皮葡萄球菌等凝固性酶阴性葡萄球菌在临床感 染中有上升的趋势。
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检验方法—分离培养
• 粪便标本－→高盐甘露醇平板 • 菌落特征：光滑型、中等大小、淡黄色
菌落
2020/6/21
检验方法—分离培养
• 血标本－→增菌（葡萄糖肉汤）－→分 离培养（血平板）
• 生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血
2020/6/21
金葡菌的鉴定依据
• 血平板上金黄色色素、β-溶血环 • 血浆凝固酶 + • 发酵甘露醇 + • 耐热核酸酶 +
2020/6/21
2020/6/21
细菌鉴定的基本程序
标本
直接涂片 革兰染色镜检
分离培养 取可疑菌落
鉴定试验和药敏试验
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结果报告
标本采集
• 根据病种不同，采集不同标本 脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿 液、痰液、脑脊液、粪便
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检验程序
脓、穿刺液、尿液、痰 脑脊液 血液
结合凝固酶（位于菌体表面）
纤维蛋白原
纤维蛋白
细菌凝集
• 金葡菌凝固酶试验均为阳性 • 凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志
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所致疾病
• 侵袭性疾病 • 化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎
、脑膜炎、败血症等 • 毒素性疾病： • 食物中毒、假膜性肠炎等
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免疫性
• 有一定天然免疫力 • 病后获得的免疫力作用不强、不持久
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葡萄球菌传统分类
产生溶血毒素
金黄色 葡萄球菌
+
表皮 葡萄球菌
－
腐生 葡萄球菌
－
产生凝固酶
+
－
－
产生耐热DNA酶
+
－
－
产生SPA
+
－
－
新生霉素敏感性
S
S
R
致病性
强
弱
无
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金葡菌噬菌体分型
• 分型：分五个群，共22型 • 意义：追踪传染源
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抵抗力
• 是抵抗力最强的无芽孢细菌 • 耐干燥 • 对龙胆紫敏感 • 易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄
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生物学性状
• 形态染色 • 培养特点 • 生化反应 • 抗原构造 • 分类 • 抵抗力
报告
检验方法—直接镜检
• 方法:取标本直接涂片,革兰染色后镜检 • 初步报告:
“查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑 似葡萄球菌” “查见革兰阳性球菌”
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检验方法—分离培养
• 脓、痰、脑脊液标本－→接种血明溶血环（β-溶血环）
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• 血平板（营养培养基）： 中等大小、光滑型菌落、脂溶性色素色素 、透明溶血环（致病葡萄球菌）
• 高盐甘露醇平板（选择鉴别培养基）： 淡橙黄色菌落（致病葡萄球菌）
• 卵黄高盐琼脂平板（选择鉴别培养基）： 菌落周围形成白色沉淀圈（致病葡萄球菌 ）
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生化反应
• 触酶试验：+ • 葡萄糖氧化发酵试验：发酵+ • 甘露醇分解试验：+（致病菌株）
培养特性
生长条件 • 需氧、兼性厌氧 • 营养要求不高，普通培养基上生长良好 • 耐盐，10～15％NaCl上能生长
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培养特性
生长现象 • 液体培养基：均匀混浊、少许沉淀 • 固体培养基：中等大小菌落、圆形、凸
起、边缘整齐、光滑、湿润的S型菌落
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常用培养基及菌落特征
球菌
• 种类: • 革兰阳性
葡萄球菌属、链球菌属（链球菌、肺炎 链球菌）、肠球菌属、微球菌属等 • 革兰阴性 奈瑟菌属、布兰汉菌属
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形态染色
• 革兰阳性球菌、葡萄串状排列 • 无鞭毛、无芽孢、一般不形成荚膜
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葡萄球菌革兰染色镜下图
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染色性： 形态： 排列：
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凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）
• 条件致病菌 • 医院内感染的重要病原菌 • 对多种抗生素耐药
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• 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS ）是院内感染的重要病原菌之一，MRSA 、MRCNS对多种抗生素耐药，MRSA不仅 对青霉素类、头孢菌素类等β－内酰胺类抗 菌药物耐药，同时也对四环素、红霉素、 氯霉素、克林霉素及庆大霉素等常用抗菌 药物耐药，对利褔平和磺胺的耐药率也达 30％，但通常对万古霉素敏感。MRSA、 MRCNS常常引起院内感染与播散，且难于 治疗和控制，病死率高。
球菌（MRSA）已成为医院感染最常见 的致病菌
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致病物质
• 凝固酶 • 葡萄球菌溶素 • 杀白细胞素 • 肠毒素 • 剥脱毒素 • 毒性休克综合征毒素－1
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凝固酶
• 游离凝固酶：采用试管法检测
协同因子
游离凝固酶
凝血酶
纤维蛋白原
纤维蛋白
血浆凝固
• 结合凝固酶：采用玻片法检测
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抗原构造
★葡萄球菌A蛋白（SPA） • 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁 • 可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性
结合，应用于协同凝集试验 • 抵抗吞噬细胞的吞噬 ★多糖抗原 • 具有型的特异性,有助于金葡菌感染的诊
断
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分类和分型
葡萄球菌包括32种及亚种 • 根据产生色素的不同分类 • 根据产生凝固酶与否进行分类 • 按噬菌体分型法分类
• 玻片法：检测结合型血浆凝固酶，简便 快速
生理盐水 待检细菌 新鲜兔血浆
• 试管法：检测游离型血浆凝固酶，灵敏
2020/6/21
协同凝集试验
金葡菌
2020/6/21
细胞壁
SPA
细胞质
2020/6/21
SPA 细胞膜
链球菌属
• 分布：自然界、人和动物肠道、健康人 鼻咽部
• 所致疾病：致病链球菌引起各种化脓性 炎症、猩红热、风湿热等疾病。
2020/6/21
• 有资料表明两者的耐药谱及机理都有许 多相似的地方，其传播方式是患者―― 医护人员――患者之间的传播，特别是 医护人员手的传播，这些带菌者是有可 能成为传染源，推测病房医护人员 MRSA,MRCNS带菌可能是由于长期工 作在病房，接触患者较多所致。
2020/6/21
鉴定试验：血浆凝固酶试验
粪便、呕吐物
增菌培养 直接涂片染色 分离培养 分离培养
分离培养
鉴定试验和药敏试验
菌落涂片染色 血浆凝固酶 耐热核酸酶 药敏试验 其它试验
2020/6/21
报告
金葡菌脓标本检验程序
脓标本
直接涂片染色
分离培养(血平板)
鉴定试验和药敏试验
涂片染色 血浆凝固酶 耐热核酸酶 药敏试验 其它试验
2020/6/21