第三章植物组织培养
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第三章 植物组织与器官培养
第三章植物组织培养
植物组织培养的基本过程
1).培养材料的选择与采集 2).培养材料的预处理 3).制备外植体 [诱导愈伤组织 悬浮培养 诱导胚性组织] 4).接种和培养 5).根的诱导 6).炼苗移栽
第三百度文库植物组织培养
接种
接种时由于有一个敞口的过程，所以是极易引 起污染的时期，这一时期主要由空气中的细菌 和工作人员本身引起，接种室要严格进行空间 消毒。接种室内保持定期用1%-3%的高锰酸 钾溶液对设备、墙壁、地板等进行搽洗。除了 使用前用紫外线和甲醛灭菌外，还可在使用期 间用70%的酒精或3%的来苏儿喷雾，使空气 中灰尘颗粒沉降下来。
接种是将已消毒好的根、茎、叶等离体器官，经切割 或剪裁成小段或小块，放入培养基的过程。
无菌接种步骤：
（1）将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，带入
超净台上，用消毒剂灭菌，再用无菌水冲洗，最后沥
去水分，取出放置在灭过菌的纱布上或滤纸上。
第三章植物组织培养
（2）材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀， 对材料进行适当的切割。如叶片切成0.5cm平方的小块； 茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含1-2片幼 叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械， 防止交叉污染。
第三章植物组织培养
无菌操作可按以下步骤进行：
(1) 在接种4小时前用甲醛熏蒸接种室，并打开 其内紫外线灯进行杀菌;
（2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风 机以及台上的紫外线灯;
（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用 实验服，并换穿拖鞋等;
（4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特 别是指甲处。然后搽拭工作台面;
1）顶芽和腋芽的发育
采用外源的细胞分裂素，可促进使具有
顶芽或没有腋芽的休眠侧芽启动生长，从而
形成一个微型的多枝多芽的小灌木丛状的结
构。在几个月内可以将这种丛生苗的一个枝
条转接继代，重复芽苗增殖的培养，并且迅
速获得多数的嫩茎。然后将一部分嫩茎转移
到生根培养基上，就能得到可种植到土壤中
去的完整小植株。
但特殊情况下也会生出不定芽,形成芽从。
第三章植物组织培养
2）不定芽的发育
在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱
分化过程，形成愈伤组织的细胞。然后，经再分化，
即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵
轴上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情
况下它形成芽，后形成根。
第三章植物组织培养
另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有 些植物具有从各个器官上长出不定芽的能力, 如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培 养的条件下，培养基中提供了营养，特别是 提供了连续不断植物激素的供应，使植物形 成不定芽的能力被大大地激发起来。许多种 类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。 在许多常规方法中不能无性繁殖的种类，在 试管条件下却能较容易地产生不定芽而再生， 如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子 叶植物储藏器官能强烈地发生不定芽，用百 合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。
第三章植物组织培养
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩 的顶芽的茎尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采 用包括茎尖分生组织在内的一些组织来培养，这样便保证了操作 方便以及容易成活。
用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的
茎梢，扩繁时主要用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。
第三章植物组织培养
（3）用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或 放置到培养基上。
具体操作过程（以试管为例）是： 先解开包口纸，将试管水平放置，使试管口靠近酒
精灯火焰，并将管口在火焰上方转动，使管口里外 灼烧数秒钟。若用棉塞盖口，可先在管口外面灼烧， 去掉棉塞后，再用火焰灼烧管口附近区域。然后用 镊子夹取一块切好的外植体送入试管内，轻轻插入 培养基上。若是叶片直接附在培养基上，以放1-3块 为宜。 材料放置方法:除茎尖、茎段要正放（尖端向上）外， 其他无统一要求。 接种完后，将管口在火焰上再灼烧数秒种。并用棉 塞塞好，包上牛皮纸，牛皮纸内面也要过火。
第三章植物组织培养
2、培养步骤
（1）初代培养
旨在获得无菌材料和无性繁殖系。 初代培养即接种某些外植体后，最初的数代培养。
初代培养时，常用诱导或分化培养基，即培养基中含 有较多的细胞分裂素和少量的生长素。 初代培养建立的无性繁殖系包括：茎梢、芽丛、胚状 体和原球茎等。
第三章植物组织培养
根据初代培养时发育方向可分为：
第三章植物组织培养
（5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从 头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要 过火烤干;
（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、 走动和咳嗽等;
（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭 菌30分钟，若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。
第三章植物组织培养
第三章植物组织培养
培养
培养指把培养材料放在培养室（有光照、温度条件、 无菌）里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进 一步分化成再生植株的过程。
1、培养方法
（1）固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。是现
在最常用的方法。虽然该方法设备简单，易行，但养 分分布不均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒现象 发生。
第三章植物组织培养
一些木本植物和少数草本植物也可以通过这种方式来进行再生繁 殖，如月季、茶花、菊花、香石竹等等。这种繁殖方式也称作微 型繁殖，它不经过发生愈伤组织而再生，所以是最能使无性系后 代保持原品种的一种繁殖方式。
适宜这种再生繁殖的植物，在采样时，只能采用顶芽、侧芽或带 有芽的茎切段，其他如种子萌发后取枝条也可以。
第三章植物组织培养
（2）液体培养法
即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方
法。由于液体中氧气含量较少，所以通常需要通过搅
动或振动培养液的方法以确保氧气的供给。
采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速度一般 为50-100r/min，这种定期浸没的方法，既能使培养 基均一，又能保证氧气的供给。
第三章植物组织培养
在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得 到的培养物，一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。
第三章植物组织培养
植物组织培养的基本过程
1).培养材料的选择与采集 2).培养材料的预处理 3).制备外植体 [诱导愈伤组织 悬浮培养 诱导胚性组织] 4).接种和培养 5).根的诱导 6).炼苗移栽
第三百度文库植物组织培养
接种
接种时由于有一个敞口的过程，所以是极易引 起污染的时期，这一时期主要由空气中的细菌 和工作人员本身引起，接种室要严格进行空间 消毒。接种室内保持定期用1%-3%的高锰酸 钾溶液对设备、墙壁、地板等进行搽洗。除了 使用前用紫外线和甲醛灭菌外，还可在使用期 间用70%的酒精或3%的来苏儿喷雾，使空气 中灰尘颗粒沉降下来。
接种是将已消毒好的根、茎、叶等离体器官，经切割 或剪裁成小段或小块，放入培养基的过程。
无菌接种步骤：
（1）将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，带入
超净台上，用消毒剂灭菌，再用无菌水冲洗，最后沥
去水分，取出放置在灭过菌的纱布上或滤纸上。
第三章植物组织培养
（2）材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀， 对材料进行适当的切割。如叶片切成0.5cm平方的小块； 茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含1-2片幼 叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械， 防止交叉污染。
第三章植物组织培养
无菌操作可按以下步骤进行：
(1) 在接种4小时前用甲醛熏蒸接种室，并打开 其内紫外线灯进行杀菌;
（2）在接种前20分钟，打开超净工作台的风 机以及台上的紫外线灯;
（3）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用 实验服，并换穿拖鞋等;
（4）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特 别是指甲处。然后搽拭工作台面;
1）顶芽和腋芽的发育
采用外源的细胞分裂素，可促进使具有
顶芽或没有腋芽的休眠侧芽启动生长，从而
形成一个微型的多枝多芽的小灌木丛状的结
构。在几个月内可以将这种丛生苗的一个枝
条转接继代，重复芽苗增殖的培养，并且迅
速获得多数的嫩茎。然后将一部分嫩茎转移
到生根培养基上，就能得到可种植到土壤中
去的完整小植株。
但特殊情况下也会生出不定芽,形成芽从。
第三章植物组织培养
2）不定芽的发育
在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱
分化过程，形成愈伤组织的细胞。然后，经再分化，
即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵
轴上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情
况下它形成芽，后形成根。
第三章植物组织培养
另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有 些植物具有从各个器官上长出不定芽的能力, 如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培 养的条件下，培养基中提供了营养，特别是 提供了连续不断植物激素的供应，使植物形 成不定芽的能力被大大地激发起来。许多种 类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。 在许多常规方法中不能无性繁殖的种类，在 试管条件下却能较容易地产生不定芽而再生， 如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子 叶植物储藏器官能强烈地发生不定芽，用百 合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。
第三章植物组织培养
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩 的顶芽的茎尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采 用包括茎尖分生组织在内的一些组织来培养，这样便保证了操作 方便以及容易成活。
用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的
茎梢，扩繁时主要用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。
第三章植物组织培养
（3）用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或 放置到培养基上。
具体操作过程（以试管为例）是： 先解开包口纸，将试管水平放置，使试管口靠近酒
精灯火焰，并将管口在火焰上方转动，使管口里外 灼烧数秒钟。若用棉塞盖口，可先在管口外面灼烧， 去掉棉塞后，再用火焰灼烧管口附近区域。然后用 镊子夹取一块切好的外植体送入试管内，轻轻插入 培养基上。若是叶片直接附在培养基上，以放1-3块 为宜。 材料放置方法:除茎尖、茎段要正放（尖端向上）外， 其他无统一要求。 接种完后，将管口在火焰上再灼烧数秒种。并用棉 塞塞好，包上牛皮纸，牛皮纸内面也要过火。
第三章植物组织培养
2、培养步骤
（1）初代培养
旨在获得无菌材料和无性繁殖系。 初代培养即接种某些外植体后，最初的数代培养。
初代培养时，常用诱导或分化培养基，即培养基中含 有较多的细胞分裂素和少量的生长素。 初代培养建立的无性繁殖系包括：茎梢、芽丛、胚状 体和原球茎等。
第三章植物组织培养
根据初代培养时发育方向可分为：
第三章植物组织培养
（5）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从 头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要 过火烤干;
（6）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、 走动和咳嗽等;
（7）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭 菌30分钟，若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。
第三章植物组织培养
第三章植物组织培养
培养
培养指把培养材料放在培养室（有光照、温度条件、 无菌）里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进 一步分化成再生植株的过程。
1、培养方法
（1）固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。是现
在最常用的方法。虽然该方法设备简单，易行，但养 分分布不均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒现象 发生。
第三章植物组织培养
一些木本植物和少数草本植物也可以通过这种方式来进行再生繁 殖，如月季、茶花、菊花、香石竹等等。这种繁殖方式也称作微 型繁殖，它不经过发生愈伤组织而再生，所以是最能使无性系后 代保持原品种的一种繁殖方式。
适宜这种再生繁殖的植物，在采样时，只能采用顶芽、侧芽或带 有芽的茎切段，其他如种子萌发后取枝条也可以。
第三章植物组织培养
（2）液体培养法
即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方
法。由于液体中氧气含量较少，所以通常需要通过搅
动或振动培养液的方法以确保氧气的供给。
采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养，其速度一般 为50-100r/min，这种定期浸没的方法，既能使培养 基均一，又能保证氧气的供给。
第三章植物组织培养
在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得 到的培养物，一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。