植物生理学实验4叶绿体色素的提取、分离及理化性质(纸层析法)

➢注意：叶绿素理化性质测定每组各做一份观 察。
结果分析
1. 仔细观察和记录实验结果。 2. 画图说明叶绿体色素纸层析结果，并
解释原因。 3. 解释叶绿素的荧光现象。 4. 解释叶绿体色素分子的替代作用现象。
思考题
1. 研磨提取叶绿素时，为何要加入 CaCO3？
2. 铜在叶绿素分子中具有替代镁的作用， 这有何实用意义？
实验试剂：丙酮、碳酸钙、石英砂、四 氯化碳、无水硫酸钠、浓盐酸、醋酸铜 晶体。
叶绿素的提取
称取新鲜菠菜叶片2g，剪碎放入研钵中，加入 丙酮5 ml、少许CaCO3(中和细胞中的酸防止 Mg2+从叶绿素中心释放)和石英砂，研磨成匀浆， 再加入适量的丙酮（5 ml），然后用漏斗过滤， 即得叶绿体色素液。
铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏， 故常用此法制做植物的原色标本。
实验目的
掌握叶绿体色素的提取方法。 掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和
步骤。 掌握叶绿体色素的部分理化性质。
实验器材和试剂
植物材料: 菠菜叶片
实验器材：试管25 ml量筒、软木塞、 台式天平、研钵、10 ml量筒、试管、 酒精灯、毛细滴管、滤纸、剪刀（自 备）。
3. 在量筒中加入四氯化碳3-5毫升及少量硫酸钠，将滤纸悬 于塞子上。扦入试管，使窄端浸入溶剂中，立于暗处层 析0.5-1小时后观察分层现象。
4. 注意：要求每个同学做一份。
胡萝卜素
最上端橙黄色 的是胡萝卜素， 其次为叶黄素， 于下面蓝绿色 为叶绿素a，最 后的黄绿色为 叶绿素b.
叶黄素
叶绿素a
叶绿素b
韩山师范学院生物系
植物生理学实验
实验四 叶绿体色素的提取、分离及理化 性质（纸层析法)
实验原理
叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光；叶绿 素的化学性质很不稳定，易受强光的破坏， 特别是叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。
叶绿素分子头部的金属卟啉环中心均为 Mg2+。在弱酸作用下，叶绿素分子中的镁 可被H+ 取代而形成褐色的去镁叶绿素，后 者遇铜则可形成绿色的铜代叶绿素。
注意：叶绿体色素液各组做一份，共用。
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叶绿体色素的分离——纸层析法
1. 准备滤纸条：长×宽=14×1 cm。一端剪成窄条：长1.5 cm,宽0.5 cm
2. 用毛细管（可用移液枪枪头）吸取叶绿体色素提取液点 于滤纸的下端窄条上方约1cm处的中央，如色素过淡， 用电吹风吹干后再重复4-5次（事先用铅笔在靠窄条的滤 纸端约1 cm处画一横线，色素液滴于横线处，并用吹风 机吹干）。来自叶绿素提取液荧光现象观察
取色素提取液少许于试管1中： ➢ 分别在反射光和透射光一
侧，观察提取液的颜色； ➢ 透射光方向观察到绿色； ➢ 反射光侧观察到的血红色，
即为叶绿素产生的荧光颜 色。
铜代叶绿素反应
➢取上述色素提取液少许于试管2,3中，分别 滴加浓盐酸少许，形成了去镁叶绿素。然后 试管3加醋酸铜晶体少许，慢慢加热溶液则 又产生鲜亮的绿色。此即形成了铜代叶绿素。