MTT法观察DMF致人肝细胞增殖抑制作用

・论著・

MTT 法观察DMF 致人肝细胞增殖抑制作用

房云1　杨锦蓉2　王菁13

【摘要】目的　观察不同染毒剂量二甲基甲酰胺(DMF )对正常成人离体肝细胞的增殖抑制作用。方法　用MTT 比色法观察细胞生长变化,分别以1156mm ol/L 、6125mm ol/L 、25mm ol/L 、100mm ol/L DMF 为染毒剂量,以6h 、12h 、24h 为染毒时间对人肝细胞进行培养。比较在不同时间下,不同染毒剂量组与阴性组的细胞生长率。结果　同一染毒时间组内,不同剂量组的细胞生长变化率结果差异有显著意义(F =27141、23186、

111122,P <0101),以100mm ol/L DMF 组细胞增殖率为最低,但不同染毒剂量组细胞生长变化率未见明显剂

量2效应关系,染毒6h 和12h 25mm ol/L 组的细胞生长变化率高于其他浓度组;同一染毒剂量组内,各不同染毒时间组的细胞生长变化率结果差异有显著意义(F =27180、29179、42147、28188,P <0101),以24h 组细胞增殖率为最低。结论　与阴性组比较,DMF 对细胞增殖有抑制作用;但不同染毒剂量组细胞生长变化率的剂量2效应关系不明显;随染毒时间延长,同一染毒剂量组内细胞增殖活性变化率有下降趋势,有一定染毒时间2效应关系。

【关键词】二甲基酰胺;肝细胞毒性;噻唑兰实验

中图分类号:R -332 文献标识码:A 文章编号:100720931(2006)1120001203

I nhibitory E ffect of DMF on Cell Proliferation of H um an H ep atocyte Determined by MTT Assay

F AN

G Yun ,WANG Jing ,Y ANG Jin 2rong.(The Institute o f Occupational and Environmental

H ealth ,Zhejiang University ,

Hangzhou ,Zhejiang ,310006,China )

【Abstract 】Objective T o explore the inhibitory effect on cell proliferation of human hepatocyte by N ,N 2dimethylformamide

(DMF )in vitro.Methods The human hepatocytes were exposed to DMF with dose of 0mm ol ΠL ,1156mm ol ΠL ,6125mm ol ΠL ,25mm ol ΠL and 100mm ol ΠL respectively and each dose group was exposed to DMF for 6h ,12h and 24h.M ethylthiaz oltetraz olium assay (MTT assay )was performed to com pare cell proliferation rate am ong these groups.R esults At same point of exposure time ,cell proliferation rates am ong different dose groups had statistically significant difference (P <0101),of which 100mm ol ΠL DMF group was lowest.But the dose 2effect relationship could not be observed.The hepatocyte proliferation rates in 25mm ol ΠL DMF group with exposure time for 6h and 12h were higher than other groups.In same dose groups ,cell proliferation rates am ong different exposure time groups had statistically significant difference (P <0101),of which exposure for 24h was lowest.Conclusions C om pared with control group ,DMF has inhibitory effect on cell proliferation.H owever ,a dose 2dependent relationship between cell proliferation and DMF concentration is not obvious.Cell proliferation rate declines with the prolongation of exposure time to DMF ,and time 2effect relationship exists.

【K ey Words 】N ,N 2dimethylformamide ;Hepatotoxicity ;M ethylthiaz oltetraz olium assay

浙江省医药卫生科学研究基金;编号:2005B019作者单位: 1.浙江大学医学院劳动卫生与环境卫生研究所; 2.浙江省疾病预防控制中心 3通讯作者

二甲基甲酰胺(N ,N 2dimethylformamide ,DMF )是无色带有鱼腥味的液体,一种用途广泛的化工原料和溶剂,被广泛应用于萃取、有机合成、染料、纤维、皮革、制药等工业。随着现代化工业的发展,DMF 的应用范围不断扩大,

但最近几年不断有接触DMF 导致中毒的报道[1、2]。

DMF 对作业人群职业安全存在很大的隐患。国内外对DMF 致职业人群健康影响的流行病学调查已有较多报道,

但是目前DMF 致肝细胞抗毒的抗剂尚未见报道,本实验以正常人体外培养肝细胞为观察对象,研究不同DMF 染毒剂量及不同染毒时间对肝细胞生长变化的影响,探讨DMF 致肝细胞损伤机制。

材料与方法

1　试剂和仪器　二甲基甲酰胺(DMF ),AMRESC O 公司;

新生牛血清(F BS ),杭州四季青生物工程材料有限公司;

胰蛋白酶,AMRESC O 公司;噻唑蓝(MTT ),AMRESC O 公司;二甲基亚砜(DMS O ),浙江杭州双林化工试剂厂;谷氨酰胺,AMRESC O 公司;丙酮酸钠,上海康捷生物科技发展有限公司;RP Ml 1640培养基,美国GI BC O 公司;Olympus