凡纳滨对虾抗传染性皮下及造血组织坏死病毒感染的初步研究

１ ２ 方 法 ．
１ ２ １ 实验 动物 分 组 试 验 于 广 西水 产 研 究 所水 ．
２ Ｏ℃保 存 备用 。
族 馆 中进 行 。水 族 馆 中现有 ６组 试 验水 槽 ， 规格 其 是 ５ｃ ０ ｍ×４ ｃ ０ ｍ×８ ｃ 配备水 循环 消毒 、 滤 和充 ０ ｍ， 过 气装 置 系统 ， 验分 ４批 进行 ， 试 每次试 验分 试验 组 和
毒选 育工 作提供 基础 。
４ ０ ｇ ｍＬ ， 分 混 匀后 放 入 ５ ０ ／ ） 充 ６℃水 浴 锅 中 温浴
５ｈ 取 出冷却 至 室温 ， 入 ３ ０ Ｌ ６ｍｏ／ ； 加 ０ ｌＬ氯化 钠
溶液 ， 振荡 混匀 ２ｒｉ ，００ ０ｒｍｉ离心 １ ｉ ， ｎ １ ０ ／ ｎ ａ ５ｒ ｎ 取 ａ
引起 对 虾 的 产 量 降 低 、 济 效 益 下 降 ， 对 虾 的 养 殖 业 危 害严 重 。本 试 验 通 过 于 第 ３腹 节 肌 肉注 射 经 对 １０／ ／ ＨＨＮＶ 的方 法对 不 同家 系的对 虾 攻毒 ， 合 应 用 Ｐ Ｒ和 组 织病 理 学检 测 并鉴 定 病 毒 。结 果发 ０ ， ｇＩ Ｌ 联 Ｃ
Ｃｏ ｔ ｘ ｏ ｔ ｅ ｓ ｉ ｄｕ ｅ ｐｒ ｓ ｉ ｎ ｉ ｔ ｒ ｅ ｆ Ｓ ｒ ｓ －ｎ ｃ ｄ Ｄｅ ｅ ｓ ｏ ｎ Ｒａ
Ａ Ｎ ｎｇ ｌ ， Ｎ ｈｕ ｃ ｅ ｇ。 Ｆｅ —ｉ Ａ Ｓ —ｈ ｎ
（ ． ｐａ ｔ ｎ ｆ Ｅｎ ｉｏ ｍｅ ｔａ ｄ Ｌｉ ｃｅ ｃ Ｗ ｅｎ ｎ Ｔｅ ｃ ｒ ｖ ｒｉｙ， ｅｎ ｎ， ａ ｎ 。 ４ ０ Ｃｈ ｎ １ Ｄｅ ｒｍｅ ｔｏ ｖｒ ｎ ｎ ｎ ｆｅＳ ｉｎｅ， ｉａ ａ ｈｅｓＵｎｉｅｓｔ Ｗ ｉ ａ Ｓｈ ａ ｘｉ７１ ０ ０， ｉａｌ
的检 测 手 段 。
关键 词 ： 纳滨 对虾 ； 染性 皮 下及 造血 组 织坏死病 毒 ； 凡 传 聚合 酶链反 应
中 图分 类 号 ： ８ ２ ６ ； ９ ５ ４ ￥ ５ ． ５ ￥ ４ ． 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７ ５ ３ （ ０ ０ １ — ０ ４０ １ ０—０ ８ ２ １ ）００ ５—４
该 病毒不 能 引起 南 美 白对 虾 大 量 的 死亡 ， 引 起对 只 虾 生长缓 慢 ， 成 巨大 的 经 济 损 失 。Ｉ 造 ＨＨＮＶ 粒 子 直 径为 ２ ｍ， ２ｎ 无囊 膜 ， Ｏ面 体 ， 性 单 链 Ｄ ２ 线 ＮＡ， 长 度 为 ４ １ｋ ， ． ｂ 根据 形 态 学及 生 物化 学等 特 性将 其 分 类 为细小 病毒科 病毒 ＿ 。 ２ ］
告 的 甲壳类 其他 重要 疾病 之一 ［ 。其 病原 为对 虾 传 １ ］ 染性 皮下及 造血 组 织 坏死 病毒 （ｎ ｅｔ ｕ ｙ ｏ ｅ— Ｉｆｃｉ ｓｈ ｐ ｄ ｒ ｏ
ｅ ｌａ ｄ ｈ ｅ ｔ ｐ ｉｔｃ ｎ ｃ ｏ ｉ ｉｕ ，Ｉ ＨＮＶ ） ｒ ａ ｎ ａ ｍａ ｏ ｏｅｉ ｅ ｒ ｓｓ ｖｒ ｓ Ｈ ，
动 物 医 学 进 展 。 ０ ０， １ １ ） ５ — ７ ２ １ ３ （ ｏ ：４ ５
Ｐｒ ｇ ｅ ｓ ｉ ｅ ｅ ｉ ｒ ｅ ｉｉ ｏ ｒ ｓ ｎ Ｖ ｔ ｒｎａ ｙ Ｍ ｄ ｃｎｅ
凡 纳 滨对 虾 抗传 染性 皮 下及 造 血 组 织坏 死 病 毒 感 染 的初 步 研 究
对 照 组 ， 照 组 设 置 １组 ， 验 组 设 置 ５组 ， 组 设 对 试 每
赵 永 贞 等 ： 纳滨 对 虾 抗 传 染 性 皮 下 及 造 血 组 织 坏 死病 毒 感 染 的 初 步 研究 凡
５ ５
同个体对 该病 毒 的抵抗 性 。该研究 将对 于 常规 而简
碎 后 加 入 １ Ｌ ２ ／ ２ ０ｍｇ ｍＬ蛋 白 酶 Ｋ （ 浓 度 终
单 的检测 Ｉ ＨＨＮＶ 提供 一 个试 验 依 据 ， 同时 也 为 提 早 发现和 确定对 虾 是否感 染病 毒 ， 时采 取措 施 ， 及 减 少 不必要 的经 济损 失 提供 技 术 支 持 ； 同时 也 为 抗病
上清 至 另 一 离 心 管 。加 入 等 体 积 预 冷 异 丙 醇 ， 在
一
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
８ Ｏ℃ 放 置 １ ｉ 。 随 后 １ ０ ／ ｉ 离 心 ５ｒｎ ａ ４ ０ ０ ｒｒ ｎ ａ
５ｒｉ， 淀用 ７ ０ｍＬ Ｌ洗 涤２次 ～３ ； ｎ沉 ａ ０ ／ 次 自然 干燥 后 ， 入 １ ０ Ｌ灭 菌 ｄ Ｈ２ 加 人 １ Ｌ １ ／ 加 ０ ｄ Ｏ， ０ｍｇ ｍＬ 胰 ＲＮＡ酶 ３ ７℃水 浴 ３ ｉ， ／ ０ｒ ｎ ８ｇ Ｌ的琼 脂 糖凝 胶 ａ 电泳检 测基 因 组 ＤＮＡ 的纯 度 ， 紫 外 分 光 光 度 计 用
状 ， 使病原 由携 带者传 播 给健康 虾 ， 并 导致 疾病 的 流
行 及感 染 程 度 的加 重 ［ 。研 究 发 现 ， 染 Ｉ ３ ］ 感 ＨＨＮＶ 或患病 后存 活下来 的细 角滨对 虾 和凡 纳滨 对虾 会终 生带毒 ， 并可通 过垂 直 和水 平传 播 方 式 把 病 毒传 给
随着养 殖水 体 中养 殖密 度 的不 断扩 大而 造成 的
下一 代 和其 他 种 群Ｌ ］ ４ 。源自文库 究 者 已经 采 用 抑 制 性 消
减杂 交 的方法 寻 找差 异 表 达 基 因 ， 这将 为进 一 步探 讨致 病机理 提供 了参 考［ 。 ６ ］
本研 究 通 过 室 内 水 族 箱 攻 毒 试 验 ， 合 应 用 联
２ Ｓ ｈ ｏ ｆＬ ｆ ｃｅ ｃ ， ａ ｚ ｏ ｎ ｖ ｒ ｉ Ｌ ｎ ｈ ｕ ， ａ ｓ ， ３ ０ ０ Ｃ ｉ ａ ． ｃｏ ｌ ｏ ｉ ｅＳ ｉｎ ｅ Ｌ ｎ ｈ ｕＵ ｉ ｅ ｓ ｙ， ａ ｚ ｏ Ｇ ｎ ｕ ７ ０ ０ ， ｈ ｎ ： ｔ
３ Ｃ ｌｅ ｅ ｆ Ｌｉ ｅＳ ｉ ｃ ，Ｓ ａ ｎ ｉ ｒ ａ ｎ ｖ ｒ ｉ Ｘ ， ｈ ａ ｘ ， １ ０ ２ Ｃ ｉ ａ ． ｏｌｇ ｆ ｃｅ ｅ ｈ ａ ｘ ｏ ｎ Ｎｏ ｍ ｌＵ ｉｅ ｓ ｙ， ｔ Ｓ ａ ｎ ｉ７ ０ ６ ， ｈ ｎ ）
Ｐ Ｒ方法 和组 织病 理学 方 法 鉴 定 Ｉ Ｃ ＨＨＮＶ， 目的是
探 讨 该病 毒在 体 内 大量 复制 的最 初 时 间 ， 并探 讨 不
收 稿 日期 ：０ ０ ０ — ４ ２ １—５２ 基 金项 目 ： 家科 技 支撑 计 划项 目（ ０ ７ ＡＤ ９ Ｏ ） 广 西应 用 基 础 研 究 专 项 （ 科 基 ０ ３ ０ ８ 桂 科 基 ０ ３ ０ ４ 国 ２０ Ｂ ２Ｂ １ ； 桂 ８ ６２ ； ７１３）
法估 计 含 量， 释 Ｄ 稀 ＮＡ 样 品 至 ５ ｇ ｕ 置 ０ｎ ／ Ｌ，
一
健 康 的南美 白对 虾来 自广西 水产 研究所 广 西 国 家级南 美 白对 虾 育 种 中 心 ， 选 体 重 为 １ ３ ～ 筛 ． ５ｇ
１ ５ ，０个家 系 ８ ０尾对 虾为试 验所 需对 虾 。 ． ５ｇ ２ ４
现 １ ４个家 系的对虾 未感 染 Ｉ ＨＨＮＶ 的 比率 ７ ． ～９ ． ； 合 两种 方 法可 快速 、 ９３ ６７ 联 灵敏 、 异地 检 测 出对 特
虾 感染 Ｉ ＨＨＮＶ 的状 况。试验 结果 为对虾 流行病 调 查 、 康 养 殖及 无特 定病 原 （ Ｐ ） 群 选 育提供 了有 效 健 ＳＦ种
Ａｂ ｔ ａ ｔ ０ｒ ｉ ｆ ｏ ｔ ｌｃ ｒ ｅ ｓ ｃ ｏ ｅｙ ｒ ｌ ｔ ｄ ｔ ｒ ｉ ｍｏ ｉ ｎ Ｔｈ ｅ ｅ ｒ ｈ ｐ ｏ ｕ ｅ ｅ ｒ ｓ ｉ ｎ ｒ ｔ ｓｒ ｃ ： ｂ ｔ ｒ ｎ ａ ｏ ｔ ｘ ｉ ｌ ｓ ｌ ｅ ａ ｅ Ｏ ｂ ａｎ ｅ ｔ ． ｏ ｏ ｅ ｒ ｓ ａ ｃ ｒ ｄ ｃ ｄ ｄ ｐ ｅ ｓｏ ａ ｍｏ ｅ ｈ ｏ ｇ ｗｉ ｍｉ ｇ ｍ ａｎ ｙ ｆ ｒ ｅ ｎ ｂ ｅ ｖ ｄ Ｆｏ ｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｉ Ｃ ａ ｄ ｏ ｈ ｒ ｂ ａｎ ａ ｅ ｓ ｂ ｍ— ｄ ｌ ｒｕ ｈｓ ｍ ｔ ｎ ｉ ｌ ｏ ｃ ｄ ａ ｄ ｏ ｓ ｒ ｅ ｓ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｎ ＯＦ ｎ ｔ ｅ ｒ ｉ ｒ ａ ｙ ｉ ｍｕ ｏ ｉｔ ｃ ｅ ｓ ｒ ｅ ｈ ｄ Ｉ ｒ ａ ｉ ｉ ｅ ｏ ｒ ｖ ａ ｈ ｕ ｃ ｉ ｎ ｏ Ｃ ａ ｅ ｎ ｔ ｅ ｐ ｔ ｏ ｏ ｙ ｏ ｎ ｈ ｓ ｏ ｈ ｍｉ ｔ ｙ ｍ ｔ ｏ ． ｔ ｐ ｉ ｒ ｙ ａ ｍ ｄ ｔ ｅ ｅ ｌ ｔ ｅ ｆ ｎ ｔ ｆ ＯＦ ｒ ａ ｉ ｈ ａ ｈ ｌ ｇ ｆ ｍ ｌ ｏ
赵 永 贞 陈 秀荔 ， 文伦 ， 春 玲 彭 敏 陈 晓汉 ¨ ， 辛 杨 ， ，
（．广 西壮 族 自治 区水 产 研 究 所 ， 西南 宁 ５ ０ ２ ；． 西 大 学 ， 西 南 宁 ５０ ２ ） １ 广 ３０１２广 广 ３ ０ １
摘
要： 对虾 传 染性皮 下及 造血组 织坏 死病毒 （ＨＨＮＶ） Ｉ 可导致凡 纳滨 对虾 罹 患慢 性矮 小残缺 综 合征 ，
ｓ ｒ ｓ —ｎｄｕ ｅ ｐｒ ｓ ｉ ｎ． ｅ ｒ ｓ ｌｓ ｓ ｗｅ ｈ ｔａ ｔ ｒｆ ｒ ｅ ｗｉ ｔｅｓ ｉ ｃ ｄ ｄｅ ｅ ｓｏ Ｔｈ ｅ ｕ ｔ ｈｏ ｄ ｔ ａ ｆｅ ｏ ｃ ｄ ｓ ｍｍｉ ｎｇ， ｈｅ ｓ ｒ ｓ ｅ ａ ｓ ｈ ｒ ｓ－ ｔ ｔ ｅ ｓ ｄ ｒ ｔ ａｄ ｍｏ ｅｐｏ ｉ ｔｖｅ ｅ ｐｒ ｓ ｉ ｎ ｏ ｉ ｘ ｅ ｓｏ ｆ Ｆｏｓｉ ｎ ＯＦＣ， ｐ ｏｃ ｍｐｕｓ ＰＶＮ ｎ Ｅ ｏ ａ ｅ ｔ ｏ ｒ ａ ｓ ｈｉ ｐ ａ ， ａ ｄＭ ｃ ｍｐ ｒ ｄ ｗｉｈ ｃ ｎｔｏｌｒ ｔ ．Ｔｈｅ ｒ ｓ ｔ ｎｄ ｅ — ｅ ｕｌｓ ｉ ｉａ ｔｄ ｔ ａ ｅ ｈ ｔＯＦＣ ｓ ａ ｔｖ ｔ ｄ ｄ ｉ ｇ ｓ ｒ ｓ ｅ ｐ ｎｓ ｉ ｃ ｉ ａ ｅ ｕｒｎ ｔ ｅ ｓ ｒ ｓ ｏ ｅ，ｉ ｉ ｅａ ｅ Ｏ ｓ ｒ ｓ —ｎ ｃ ｄ ａ ｉ ｔ ｓ ｒ ｌ ｔ ｄ ｔ ｔ ｅ ｓ ｉ ｄｕ ｅ ｎ ｍａ１ｄｅ ｅ ｓｏ ｐｒ ｓ ｉ ｎ． Ｋｅ ｒ ｓ ｏｒ ｔ ｆ ｏ ａ ｏｒｅ ｙ ｗｏ ｄ ： ｂｉｏ ｒ ｎｔ ｌｃ ｔ ｘ；ｓ ｒ ｓ ｐ ｅ ｓｏ ｉ ｍｕｎ ｉ ｔ ｅ ｅ ｓ ｒ ｆ ｃ ｄ ｓ ｍｍ ｉ ｔ ｅ ｓｄｅ ｒ ｓ ｉ ｎ；ｍ ０ｈ ｓ ｏ ｈ ｍｉ ｔ ｙ；ｏｒ ｅ ｗｉ ｎｇ； ａ ｒｔ
对虾 传染 性 皮下 及 造 血 组 织 坏 死病 ， 称慢 性 也 矮 小 残 缺 综 合 征 （ ｕ ｔ ｅｏｍｉ ｓｎ ｒｍｅ Ｒ ｎ— ｆｒ ｔ ｙ ｄｏ ， ｄ ｙ
Ｒ Ｓ 。水生 动物疾 病 诊 断 手 册 中将 该 病 定 为 须 报 Ｄ ）
水质 恶化 ， 产 生低溶 氧 、 会 高水温 、 氨 氮 、 硝酸 盐 高 高 等情 况 ， 发低 水 平 感染 Ｉ 激 ＨＨＮＶ 的对 虾 表 现 出症
作 者 简 介 ： 永 贞（９ ８ ） 男 ， 肃 张 掖 人 ， 士 ， 要 从 事 对 虾 的 遗 传 育种 工 作 。 ＊通 讯 作 者 赵 １７一 ， 甘 博 主
料 料 豢 ｛
Ｖａ ｉ ｔｏ ｆ ＦｏＳ Ｅｘ ｒ ｓｏ ｎ ０ｒ ｉｏ ｒ ｎ ａ ｒａ ｉ ｎ ０ ｐ ｅｉｎ ｉ ｂｔｆｏ ｔ ｌ