雷公藤化学成分研究.d

雷公藤化学成分研究严振1，田洋2 ，马跃平3，傅晓春1，张振学2，王金辉3（1．广东食品药品职业学院，广东，广州510520；2．沈阳化工学院化学工程学院，辽宁，沈阳 110142 ；3．沈阳药科大学中药学院，辽宁，沈阳110016 ）[摘要]目的：研究雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f .）根的化学成分。

方法：利用各种色谱方法进行分离纯化，根据理化性质和谱学数据对分离得到的化合物进行结构研究。

结果：从雷公藤根乙醇提取物中分离得到6个化合物，分别鉴定为5α-豆甾烷-3,6-二酮(5α-stigmast-3,6-dione,1)，6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮(6β-hydroxystigmast-4-en-3-one,2)，邻苯二甲酸二丁酯(phthalic acid dibutyl ester,3)，秦皮素(fraxetin,4)，β-谷甾醇（β-sitosterol,5），胡萝卜苷（daucosterol,6）。

结论：化合物1、3、4为首次从卫矛科植物中分离得到；化合物2为首次从本属植物中分离得到。

[关键词] 雷公藤；化学成分；结构鉴定雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook. f.）系卫矛科雷公藤属植物。

广泛分布于浙江、江西、安徽、湖南、广东、福建、台湾等地。

其性苦、寒，有大毒，具有杀虫、消炎、活血通络、解毒的功效。

现代临床广泛用于多种免疫系统异常而致的疾病，获得了良好的疗效。

大量药理及临床已证明其提取物和某些成分具有免疫调节、抗炎、抗肿瘤和男性抗生育作用[1]。

通过对雷公藤根的化学成分的研究，得到6个化合物并分别鉴定，为其药用资源的开发利用提供有益参考。

1 材料与仪器Bruker ARX-300和Bruker AV-600型核磁共振波谱仪（TMS内标，瑞士Bruker公司）；N2000型日立高效液相色谱仪；制备型色谱柱为YWC C18反相柱（5μm,10 mm×250mm）；MP-S3型显微熔点测定仪（温度计未校正，日本Yanaco公司）；Sephadex LH-20（美国Pharmacia 公司），柱色谱和薄层色谱硅胶（青岛海洋化工厂有限公司）；所用试剂为色谱纯和分析纯。

雷公藤（市售）经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为Tripterygium wilfordii Hook. f .的根。

2 提取与分离方法取雷公藤根20 kg，用体积分数为90%乙醇煮沸提取，合并滤液，减压浓缩后得浸膏900 g，将浸膏加适量水稀释，依次用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。

石油醚层和氯仿层提取物（71.5 g）进行硅胶柱色谱分离，以石油醚-丙酮系统（100：1～1：1）梯度洗脱。

得到的流份（Fr.37～63）经重结晶处理后得化合物5；流份（Fr.88～96）经重结晶处理后得到化合物1；流份（Fr.143～169）经重结晶处理后得到化合物2；流份（Fr.213～256）经硅胶吸附柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱后，所得到的流份用高效液相色谱分离，最后得到化合物3；流份（Fr.506～554）经石油醚-丙酮反复洗脱，Sephadex LH-20柱色谱得到化合物6；乙酸乙酯萃取物（27.7g）经硅胶吸附柱柱色谱，以三氯甲烷-甲醇系统（200：1～1：1）梯度洗脱，得到的流份（Fr.27～35）经重结晶处理后得到化合物4。

3结果与讨论3．1 化合物1无色针状结晶（甲醇），与10%硫酸乙醇试剂显紫色；与Libermann-Burchard反应阳性，示为甾体或三萜类化合物。

1H-NMR（300MHz，CDCl3）谱中，高场区给出6个典型的甲基质子信号：δ：0.69 (3H，s，H-18)，0.96 (3H，s，H-19)，0.93 (3H，d，J= 6.2 Hz, H-21)，0.84 (3H，d，J = 6.6 Hz，H-26)，0.81 (3H，d，J= 6.8 Hz，H-27)，0.85 (3H, t，J= 7.0 Hz，H-29)；13C-NMR（75MHz, CDCl3）谱中，给出29个碳信号（数据如表1），提示该化合物有可能是29C甾类化合物；13C-NMR谱中δ209.2、211.7二个碳信号提示该化合物中有2个酮羰基信号。

其数据与文献[2]中谱学数据基本一致，故鉴定其为5α-豆甾烷-3,6-二酮（5α-stigmast-3,6-dione），为卫矛科植物中首次分离得到。

3．2 化合物2无色针状结晶（石油醚-乙酸乙酯），mp208～210℃；与10%硫酸乙醇试剂显紫色；与Libermann-Burchard反应阳性，示为甾体或三萜类化合物。

1H-NMR（300MHz，CDCl3）谱中，高场区给出6个典型的甲基质子信号：δ 0.74(3H，s，H-18)，1.37(3H，s，H-19)，0.92(3H，d，J =6.4H Z，H-21)，0.84 (3H，d，J=6.6H Z，H-26)，0.82 (3H，d，J =6.6H Z，H-27)，0.85 (3H，t，J=7.0 H Z，H-29)；另外给出一个烯烃质子信号δ5.82（1H，s）及一个与连氧碳相连碳的质子信号δ4.35(1H，d，J =3 Hz)。

13C-NMR （75MHz，CDCl3）谱中，给出29个碳信号（数据如表1），因此进一步推断该化合物为豆甾类化合物，δ200.4、168.44、126.35示结构中具有不饱和碳信号；δ73.30为6位连氧碳信号；此外低场区无其他碳信号，其数据与文献[3]中谱学数据基本一致，故鉴定其为6β-羟基-豆甾-4-烯-3-酮（6β-hydroxystigmast-4-en-3-one），为本属植物中首次分离得到。

Table 1 13C-NMR Chemical Shifts of Compounds1 、2No. Compound 1(CDCl3) Compound 2(CDCl3) No. Compound 1(CDCl3 ) Compound 2(CDCl3)1 38.037.016 28.029.02 39.334.217 56.556.03 209.2200.518 12.512.04 36.9126.319 11.919.85 57.5168.420 36.036.16 211.3773.321 18.618.77 46.638.522 33.733.88 37.329.723 26.126.09 53.453.524 45.745.710 41.238.125 29.029.711 21.620.926 19.819.812 38.039.527 19.019.013 42.942.428 23.023.114 55.955.829 12.012.015 24.024.13．3 化合物3棕红色油状物（甲醇），ESI-MS[M+H]+ 279.1。

1H-NMR（300MHz，CDCl3）谱中，δ 7.72（1H，m，H-4），7.54（1H，m，H-3），4.32（2H，m，H-5），1.70（2H，m，H-6），0.97（3H，m，H-7）；13C-NMR(75MHz，CDCl3)谱中，共给出8个碳信号，δ167.6 (C-1)，132.4 (C-2)，130. 8 (C-3)，128.8(C-4)，65.5 (C-5)，30.5 (C-6)，19.1 (C-7)，13.7 (C-8)；其数据与文献[4]中谱学数据基本一致，故鉴定其为邻苯二甲酸二丁酯（phthalic acid dibutyl ester），为卫矛科植物中首次分离得到。

3．4 化合物4黄色针状结晶（甲醇），与三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，示有酚羟基存在。

1H-NMR（300MHz，Pyr-d5）谱中，δ：7.67(1H，dd，J=9.32Hz，H-4)，6.29(1H，dd，J=9.32Hz，H-3)，6.68(1H，s，H-5)、3.78（3H，s，OCH3）；13C-NMR(75MHz，Pyr-d5)谱中，δ：161.6(C-2)，146.6 (C-6)，145.0 (C-4)，141.6 (C-9)，140.8 (C-7)，135.9 (C-8)，112.2 (C-3)，110.9 (C-10)，100.49(C-5)，与文献[5]报道的秦皮素基本一致，故鉴定其为秦皮素(fraxetin) ，为卫矛科植物中首次分离得到。

3．5 化合物5白色针晶（石油醚），mp136～137℃，与10%硫酸乙醇试剂显紫色；与Libermann-Burchard反应阳性，与已知标准品β-谷甾醇共薄层，用三种不同溶剂系统展开，R f值均一致，与β-谷甾醇混合后的熔点不下降，故鉴定其为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

3．6 化合物6白色颗粒状结晶（甲醇-三氯甲烷），mp294～296℃，Libermann-Burchard反应阳性，10%硫酸乙醇显紫色。

与已知标准品胡萝卜苷共薄层，用三种不同的溶剂系统展开，R f值均一致，与胡萝卜苷混合后的熔点不下降，故鉴定其为胡萝卜苷(daucosterol)。

参考文献[1] 李卫东，王承华．雷公藤根的化学成分研究[J ].沈阳药科大学学报，2010,09(27):715-183.[2] Chun-Chao Zhao,J ian-Hua Shao,Xian Li etal.Antimicrobial Constituents from Fruits of Ailanthus altissimaSwingle.Arch Pharm Res 2005,28(10):1147-1151.[3]Xiao-Bai Sum,Pei-Hua Zang , Yang-Jun X u .Chemistry of Natural Compounds. 2007,43(5): 563-566.[4] 张蕴晖.邻苯二甲酸二丁酷研究进展[J ]，卫生研究，2003, 32(4):407-408.[5] 许旭东，胡晓茹，袁经权，等.草珊瑚中香豆素化学成分研究[J ].中国中药杂志，2006, 8（33）: 900-902.Studies on the Chemical Constituents of Tripterygium wilfordiiYan Zhen1, Tian Yang2，3,Ma Yueping3, Fu Xiaochun1,Zhang Zhenxue2,Wang J inhui3（1.Guang Dong Food and Drug V ocational College , Guangzhou 510520 , China ;2. School of Chemical Engineering , Shenyang University Of Chemical Technology , Shenyang Liaoning 110142 , China ;3. School Of Triditional Chinese Materica Medica , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang Liaoning 110016 , China）[ Abstract ] Objective：To study the chemical constituents of the Tripterygium wilfordii HOOK.f. . Methods：The constituents were isolated by chromatography methods such as silica gel , SephadexLH-20 and HPLC . Physico-chemical properties and spectroscopic analysis were employed for the structural identification. Results：Seven compounds were obtained and their structure were identified as5α-stigmast-3, 6-dione (1) , 6β -hydroxystigmast-4-en-3-one（2）, phthalic acid dibutyl ester（3）, fraxetin （4）, β-sitosterol（5）, daucosterol （6）. Conclusion：Among the compounds, compounds 1, 3 and 4 were isolated from Celastraceae for the first time, and compound 2 was isolated from genus Tripterygium for the first time .[Keywords]：Tripterygium wilfordii ;Chemical constituent ;Structural identification。