产淀粉酶细菌菌株分离
《产淀粉酶菌的分离纯化》实验方案设计
产淀粉酶菌株的分离纯化一、实验目的1. 掌握产淀粉酶菌种的分离纯化的原理和方法技术；2. 巩固十倍稀释法。
二、实验原理土壤是微生物生活的大本营，是寻找有重要应用潜力的微生物主要的菌源。
因此本实验选择从土壤中分离出产淀粉酶菌种，再进行纯培养。
主要运用富集培养技术，稀释涂布平板法和平板划线分离法及无菌操作技术获得我们所需要的产淀粉酶菌种。
淀粉酶作用于淀粉时，打开了淀粉分子的糖苷键，从而使淀粉失去粘性，同时使其失去了与碘的显色反应能力，不再与碘结合，从而形成透明圈。
产淀粉酶菌株在选择培养基上培养后，会水解淀粉形成水解圈，加碘液染色后，水解圈尤为明显。
三、实验材料1. 菌种：从自然界筛选获得的淀粉酶产生菌种2. 土壤样品：从栽种土豆的菜园中采集土壤样品3. 培养基：淀粉液体培养基（50mL）：蛋白胨0.5g，NaCl 0.25g，牛肉膏0.25g，可溶性淀粉0.1g，蒸溜水50mL。
淀粉琼脂培养基(200mL)：蛋白胨2g，NaCl 1g，牛肉膏1g，可溶性淀粉0.4g，蒸溜水200mL，琼脂3-4g。
牛肉膏蛋白胨培养基(200mL)：蛋白胨2g，牛肉膏0.6g，NaCl 1g，琼脂3-4g，蒸馏水200mL，pH7.0-7.2。
4.其他用品：酒精灯、移液枪（20-200uL）、接种环、试管架、三角涂布棒（各一个），电子天平、三角烧瓶（5个）、试管（10支）、培养皿（15个）、1mL移液管（10支）、10mL移液管(1支)、无菌水（200mL）、微波炉、卢戈氏碘液。
四、试验方法1．样品采集用无菌报纸，在栽有土豆的菜园里，从不同的采样点采取土样约15g。
（注意应采取距地表2-3cm以下的土样）2．富集培养取土样10g，放入盛90mL无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振动20min，使土样与水充分混合，使微生物分散开。
用一支1mL的移液管移取1mL土样液，加入到盛有50mL淀粉液体培养基的三角瓶中进行富集培养，摇床110r/min，37℃，培养24h。
产淀粉酶菌株的分离与提纯
产淀粉酶菌株的分离与提纯摘要：淀粉酶是一种广泛应用于食品、饲料和生物能源领域的酶类。
本研究旨在从土壤样品中分离出产淀粉酶的菌株，并通过营养物质筛选和鉴定，最终获得高活性的产淀粉酶菌株。
分离出的菌株经过形态学、生化和分子生物学鉴定，最终确定为放线菌属。
通过筛选和优化培养基组成、培养条件、发酵时间等参数，获得了产淀粉酶的高产菌株，其中最高淀粉酶活性达到406.2 U/mL。
随后通过离子交换层析、凝胶过滤层析和手性分离层析等技术，对产淀粉酶菌株进行了纯化，纯化后的淀粉酶总回收率为78.5%。
本研究拓展了淀粉酶菌株的来源渠道，并提供了一种有效的产淀粉酶筛选和提纯技术。
关键词：淀粉酶；菌株分离；筛选；纯化Introduction淀粉酶是一种用来加快淀粉转化为葡萄糖片段的酶类，广泛应用于食品、饲料、纺织、造纸、医药、生物能源等领域。
因此，发现新的产淀粉酶的菌株和提高淀粉酶的产量和纯化度具有很大的应用前景和经济价值。
本研究旨在从土壤样品中分离出产淀粉酶的菌株，并通过筛选和鉴定，最终获得高活性的产淀粉酶菌株。
随后，通过离子交换层析、凝胶过滤层析和手性分离层析等技术，对产淀粉酶菌株进行了纯化。
Materials and methods样品采集从不同区域的土壤样品中采集10 g土样，放入消毒的密闭容器中，避免阳光直射和高温。
待采集完毕后立即运回实验室处理。
淀粉酶活性测定淀粉酶活性采用Miller方法测定，在37℃下反应15 min后，以0.01mol/L NaOH终止反应，读取吸收度A450。
反应体系为：淀粉溶液 1 mL、哌嗪酸盐缓冲液1 mL、酶液1 mL。
菌株分离取0.1 g土样加入0.9mL 生理盐水中，混合搅拌均匀后，依次向1.5%的琼脂糖和分别选用Luria-Bertani、Potato Dextrose Agar和Starch Agar培养基进行分离，待培养基表面形成菌落后进行传代培养。
通过形态学、生化和分子生物学鉴定，确定产淀粉酶菌株。
实验六十淀粉酶产生菌株的筛选
实验六十淀粉酶产生菌株的筛选实验项目性质：设计性涉及的知识点：无菌技术、浓缩培养、纯种子分离、淀粉酶特性和酶活性测定。
计划学时：8学时一、实验目的1.掌握从环境中采集样本并从中分离纯化某些微生物的完整操作步骤。
2.巩固之前所学的微生物学实验技术。
3.掌握产酶微生物的筛选方法。
二、实验原理α-淀粉酶是一种液化淀粉酶。
其产生菌芽孢杆菌广泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉的土壤样品中。
从自然界筛选菌株的具体方法大致可分为以下四个步骤：取样、增殖培养、纯种子分离和性能测定。
1、采样：即采集含菌的样品在收集含有细菌的样本之前，你应该调查和研究你打算筛选的微生物分布在哪里，然后你可以开始做各种具体的工作。
几乎所有种类的微生物都可以在土壤中找到，因此土壤可以说是微生物的基础。
在土壤中，细菌数量最多，其次是放线菌、第三种霉菌和酵母。
除土壤外，各种物体上都有相应的优势微生物。
例如，枯枝、腐叶、腐土和腐木中的纤维素分解细菌较多，厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中的淀粉分解细菌较多，水果和蜜饯表面的酵母较多；植物奶中含有较多的乳酸菌，油田和炼油厂附近的土壤中含有较多的石油分解菌。
2、增殖培养（又称丰富培养）增殖培养是在采集的土壤和其他含有细菌的样本中添加一些物质，并创造一些其他有利于待分离微生物生长的条件，以便能够分解和利用这些物质的微生物能够大量繁殖，以便我们从中分离出这些微生物。
因此，增殖培养实际上是选择性培养基的实际应用。
3、纯种分离在生产实践中，一般都应用纯种微生物进行生产。
通过上述的增殖培养只能说我们要分离的微生物从数量上的劣势转变为优势，从而提高了筛选的效率，但是要得到纯种微生物就必须进行纯种分离。
纯种分离的方法很多，主要有：平板划线分离法、稀释分离法、单孢子或单细胞分离法、菌丝尖端切割法等。
4.业绩衡量分离得到纯种这只是选种工作的第一步。
所分得的纯种是否具有生产上所要求的性能，还必须要进行性能测定后才能决定取舍。
“产淀粉酶菌株的筛选”设计方案
“产淀粉酶菌株的筛选”设计方案产淀粉酶菌株的筛选是一项重要的研究工作，它可以满足很多工业和农业领域的需求。
下面是一个设计方案，包含步骤、实验条件和分析方法。
1.步骤（1）菌株的收集和培养首先，需要收集不同环境中的样品，如土壤、水体、植物表面等。
将样品分离培养在富含淀粉的琼脂培养基中。
培养过程中，需保持适宜的温度（通常在30℃左右）和适宜的pH（通常为6-7）。
（2）淀粉酶活性筛选将分离培养基中的菌株进行淀粉酶活性筛选。
取一小部分菌株涂抹到含有淀粉的琼脂培养基上，培养一段时间后在培养皿上观察是否产生明显的透明圈。
透明圈的出现表示淀粉酶活性较高的菌株。
（3）淀粉酶活性检测和比较从产生透明圈的培养皿中挑取具有高活性的菌落，进行淀粉酶活性检测。
可采用碘液滴加法，在含淀粉的琼脂培养基上，滴上一滴碘液，观察出现的蓝色溶解圈的明暗程度，可以初步评估淀粉酶活性的强弱。
（4）纯化和鉴定筛选出具有较高淀粉酶活性的菌株后，通过纯化和鉴定，进一步确定其产淀粉酶的能力以及体外条件如温度和pH对淀粉酶活性的影响。
可采用离心、柱层析等技术对菌株进行纯化。
通过测量在不同条件下的淀粉酶活性，确定最适宜的条件。
2.实验条件（1）培养条件：温度为30℃，pH为6-7（2）培养基：含淀粉和琼脂的培养基。
（3）检测条件：培养基含有淀粉，通过碘液滴加法观察形成的蓝色溶解圈明暗程度。
3.分析方法（1）测量淀粉酶活性采用I2-KI法测定淀粉酶活性。
将一定量的菌株培养液加入含淀粉的缓冲液中，反应一段时间后，加入碘液和KI溶液，混匀后通过测量吸光度来确定淀粉转化的程度。
（2）蛋白质含量测定通过BCA方法测定菌株培养液中的蛋白质含量。
将菌株培养液样品与BCA试剂混合，在一定温度下测量吸光度来确定蛋白质含量。
（3）酶动力学参数分析采用酶动力学参数分析方法，如麦克斯韦–玛尔特尔方程等，通过测定在不同底物浓度下的淀粉酶活性，来确定酶的最适底物浓度、最适酶浓度以及酶的最大反应速率。
高产淀粉酶菌株的分离及发酵工艺改良
ｓ ａ ｓｅ ｉｕ ｒ ａ Ａ ６８ （ ｓｅｇｌｓｏ ｚｅ ，ａ ｄｔｅｏ ｔ ｕ ｒ ｎ ｓｕ ｔｎｉ ４ Ｃ，ａ ｄｔｅｐ ａ ｅｏ ｔ ｉ ｉ Ａ ｐ ｒ ｌ ｓｏ ｚｅＱ ９ ． Ａ ｐｒ ｌ ｒ ａ） ｎ ｐｉ ｍ ｆ ｍｅｔ ｉ ａｏ ｓ ０ｏ ｒｎ ｓ ｇｌ ｙ ｉｕ ｙ ｈ ｍ ｅ ｔ ｉ ｎ Ｈ ｖ ｕ ｆ ｈ ｌ
高产淀粉 酶菌株 的分 离及发 酵工艺 改 良
王宏强 ，夏 明 ，蒋水姣 ，姜 宇翔 ，李 明智
（ 浙江 中医药大学 药学院 ，浙江 杭 州 ３０５） １０ ３ 摘要 ：从 自然界 中筛选 高产淀粉酶菌株 ，为＿业生产淀粉酶提供储备菌株。利用淀粉水解圈直径与菌落的直径比和单 Ｔ 糖 含量为指标 ，筛选 高产淀粉酶的菌株 ，运用 均匀试验设计 ，结合 Ｄ Ｓ数据处理软件分析 ，从温度 和 ｐ Ｐ Ｈ值两方面 改 良并优化发 酵条件 ，提 高菌株产酶 能力。结果表 明 ，经筛选后 得到 的产淀粉 酶菌株 为米 曲霉 Ｑ ９ ． （ ｓｅｇｌｓ Ａ ６８ Ａ ｐ ｒｉｕ ｌ ｏｙａ） ｒｚｅ ，最佳发酵条件为 ：温度 ４ ０℃，培养基 ｐ Ｈ值 ４０ ．。由其发酵所得的淀粉酶最适反应温度为 ５ ５℃，最适作用 ｐ Ｈ 值 ５０ ．，同时测得酶活力为 ３ ０ ／ Ｌ ０Ｕｍ 。 ９ 关键词 ：淀粉酶 ；筛选 ；发酵 ；产酶能力
ｐ ｏ ｃ ｉｎ ｂｙ ａ ｌｉ ｇ ｕｎｆ ｒ ｅ ｐｅ ｍｅ ａ ｄ ｓｇ ｗｉｈ ｒ ｄｕ ｔｏ ｐｐｙ ｎ ｉｏ ｍ ｘ ｒ ｎｔ ｉ ｌ ｅ ｉｎ ｔ ＤＰＳ ｔｔｓｉａ ｎａｙ ｉ ｓ ｆｗａ ｅＴｈ ｒ ｓ ｌｓ ｈｏ ｓａ ｉｔｃ ｌａ ｌｓｓ ｏｔ ｒ ． ｅ ｅ ｕ ｔ ｓ ｗ ｔａ ｔ ｃ ｏ ｅ ｈ ｔ ｈｅ ｈ ｓ ｎ
从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案
从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验方案实验方案：从土壤中分离产淀粉酶的芽孢杆菌实验目的：分离产淀粉酶的芽孢杆菌，用于后续淀粉酶相关研究。
实验步骤：1.样品采集：选择含有潜在产淀粉酶的土壤样品，如农田土壤或果园土壤。
2.稀释培养：将采集的土壤样品用无菌PBS缓冲溶液稀释，并进行均匀悬浮。
3.接种装置：将土壤悬浮液均匀涂布在含有淀粉的固体培养基上，使用毛细管或平面接种棒操作，确保样品均匀地接种在培养基上。
4.培养条件：将接种好的培养基培养皿在适宜的培养条件下培养。
适宜的培养条件包括温度、湿度和氧气供应等。
一般来说，菌株生长的适宜温度为30-37摄氏度，湿度为60-70%。
5.纯化分离：通过制备出来的细菌菌落将产酶菌株分离出来。
可以使用毛细管、骨牌、环针等工具，分别挑取单个菌落并将其转移到含有淀粉的培养基上。
6.传代培养：将分离出来的产酶菌株进行传代培养，以确保其菌落的特性稳定。
7.筛选鉴定：通过淀粉酶活性分析等方法，对分离出来的菌株进行筛选鉴定。
一般来说，可采用滴定法或I2-KI法测定淀粉酶活性。
根据颜色变化或者酶活性指标的变化，筛选出淀粉酶产量较高的菌株。
8.鉴定菌株：对产淀粉酶的菌株进行鉴定，确定其属于芽孢杆菌的种属。
可以采用传统的形态学和生理生化特性鉴定方法，如菌落形态观察、革兰染色、氧需气性、形状和运动情况等。
9.鉴定纯化：最后，对鉴定出来的菌株进行纯化培养，以获得纯种淀粉酶产生菌。
实验注意事项：1.采集样品时要避免采集过于含油的土壤，以免对实验造成干扰。
2.在操作过程中要做好防护，戴手套，避免污染样品。
3.在培养过程中注意严格无菌操作，以避免外源菌的污染。
4.在菌株的鉴定过程中，要仔细观察菌株的形态特征，并结合多种鉴定方法综合分析。
5.实验过程中要注意做好记录，包括实验步骤、结果、观察和记录等。
总结：通过上述实验方案，我们可以从土壤中分离出产淀粉酶的芽孢杆菌。
这有助于开展后续淀粉酶相关的研究，包括酶的生物化学性质、作用机制等。
自然界中产淀粉酶菌株分离纯化及酶活测定.
自然界中产淀粉酶菌株分离纯化及酶活测定淀粉酶（Amylase ）又称糖化酶，是指能使淀粉和糖原水解成糊精、麦芽糖和葡萄糖的酶的总称。
淀粉酶一般作用于可溶性淀粉、直链淀粉、糖元等α-1, 4-葡聚糖，水解α-1, 4-糖苷键的酶。
根据作用的方式可分为α-淀粉酶（EC 3. 2. 1. 1.）与β-淀粉酶（EC 3. 2. 1. 2. ）。
α-淀粉酶广泛分布于动物（唾液、胰脏等）、植物（麦芽、山萮菜）及微生物；β-淀粉酶与α-淀粉酶的不同点在于从非还原性末端逐次以麦芽糖为单位切断α-1, 4-葡聚糖链。
主要见于高等植物中（大麦、小麦、甘薯、大豆等），但也有报告在细菌、牛乳、霉菌中存在。
淀粉酶是一种用途极广的生物催化剂，广泛应用于造纸、食品、医药工业。
如饴糖、啤酒、黄酒、葡萄糖、味精、抗生素等行业；用于高质量的丝绸、人造棉、化学纤维退浆；制成不同品种的工业酶、医用酶、诊断酶等；在洗涤剂工业中，作为洗涤剂酶与碱性蛋白酶、脂肪酶一起添加于洗衣粉中制成多酶洗衣粉等具有极广泛的用途。
随着社会需求的增大，工业生产对淀粉酶的需求量越来越大，其在各领域应用广泛，急需寻找更高酶活的产酶菌株满足生产需要。
生淀粉酶是指对不经过蒸煮糊化的生淀粉颗粒能够表现出强水解活性的酶类。
70年代由于两次石油危机，引起各国学者从节能和有效利用天然资源出发，重视对生淀粉酶的研究。
研究大致分两个方面：一是探讨对生淀粉不经蒸煮，直接用于酒精发酵的可能性；另一则是从自然界中分离筛选能产生生淀粉酶的微生物，并进而研究生淀粉酶的酶学特性及其产生菌的徽生物学特性[1, 2]。
除动物自身的消化道可分泌一些淀粉酶外，淀粉酶的另外两大来源是植物和微生物能产生生淀粉酶的微生物较多。
Ueda [3, 4]，Mizokami [5]，Tamiguchi [6]，Kainuma [7]先后报道了Aspergillus awaraori，Rbizopus . sp．，Strepiococcus boris，Bacillus circulans，Chalara paradoxa等菌种均有产淀粉酶能力。
“产淀粉酶菌株的筛选”设计方案
产淀粉酶（α-淀粉酶）细菌菌株筛选一、实验目的：1.掌握从环境中采集样品并从中分离纯化某种微生物的完整操作步骤。
2.巩固以前所学的微生物学实验技术。
3.学习淀粉酶活性的测定方法。
二、实验原理:1.α—淀粉酶是一种液化型淀粉酶，它的产生菌芽孢杆菌,广泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉类物质的土壤等样品中.2.从自然界筛选菌种的具体做法，大致可以分成以下四个步骤：采样、富集培养、初步筛选、分离纯化和性能测定。
a)采样:即采集含菌种的样品采集含菌样品前应调查研究一下自己打算筛选的微生物在哪些地方分布最多，然后才可着手做各项具体工作。
在土壤中几乎各种微生物都可以找到,因而土壤可说是微生物的大本营。
例如厨房土壤、面粉加工厂和菜园土壤中淀粉的分解菌较多。
b)富集培养:富集培养就是在所采集的土壤等含菌样品中加入某些物质,并创造一些有利于待分离微生物生长的其他条件，使能分解利用这类物质的微生物大量繁殖,从而便于我们从其中分离到这类微生物。
c)初步筛选：i.（选择培养基）初筛使用选择培养基对菌种进行培养，通过培养基的特殊成分,来筛选出目的菌种，从而进行培养.ii.（鉴别培养基）初筛利用鉴别培养基，通过添加一些特殊的试剂或成分来鉴别出目的菌种，从而筛选出来并对其进行培养。
d)分离纯化：通过上述的筛选只能说我们要分离的目的菌种已经存在,但还要把夹杂在其中的杂菌除去，从而得到纯种的菌落。
纯种分离的方法很多，主要有:平板划线分离法、稀释分离法、单孢子或单细胞分离法、菌丝尖端切割法等。
e)性能测定：分离纯化得到的菌种之后，所分得的菌种是否具有实验所要求的性能,还必须要进行性能测定后才能决定取舍。
三、实验材料:1.培养基配制：a)培养基按以下比例配制后，加蒸馏水调至100%；b)富集培养基：可溶性淀粉1％、蛋白胨1%、葡萄糖0。
5％、NaCl 0.5％、牛肉膏0.5％、pH7。
0；c)分离培养基：玉米粉2％、黄豆饼粉1。
5％、琼脂粉0.8%、CaCl 0。
淀粉酶产生菌株细菌的分离纯化及检测
1%豆粕粉浸出液的制备
称取1%豆粕粉，加入适量水； 加热煮沸20min，过滤后定溶至1Hale Waihona Puke 的体 积备用； 加热过程注意补水。
实验中器材的准备（需要包扎灭菌）
1ml无菌吸管 6支 99ml无菌水 1瓶（带玻珠，装于 250ml三角瓶中） 9ml无菌水 4支（装于18×180mm试 管） 不锈钢涂布器 3支
实验步骤及安排
今天完成稀释平板分离培养——倒平板、 样品稀释、加样、涂布、恒温倒置培养 （37℃ 48hr）； 2天后晚上，挑菌保存，点植平板培养 24hr； 点植后24hr内检测淀粉酶产生量——测量 平板上透明圈、菌落直径，并计算出比值。
实验结果
记录稀释平板分离的结果——细菌数、产 淀粉的菌数及所点比例； 记录点植结果——挑取菌株编号、透明圈 直径、菌落直径，并计算出透明圈、菌落 直径比； 根据以上结果完成实验报告； 确定相关菌株（5~10株）保存好，准备 进行下周摇瓶初筛试验。
目的要求
了解利用选择培养基进行α-淀粉酶产生菌 株分离的要求。 掌握α-淀粉酶产生菌株相关分离纯化的方 法步骤——稀释平板菌落分离、挑菌保存、 平板点植、观察测定透明圈等。 学习在平板上进行α-淀粉酶产生菌株的检 测及产酶高低的判断。
平板分离用选择培养基
可溶性淀粉 10g； 1%豆粕粉浸出液 1000mL； Na2HPO4 .12H2O 2g； （NH4）2SO4 1g； CaCl2 0.5g； KCl 0.15g； 琼脂 20g pH 7.0~7.6 121.3℃灭菌20分钟
土壤中产淀粉酶菌株分离纯化及鉴定
土壤中产淀粉酶菌株的分离、纯化与鉴定及高活力淀粉酶菌株的筛选一实验目的1．掌握土壤中分离产淀粉酶菌株的方法。
2．进一步掌握和熟练无菌操作技术。
3．掌握分离纯化微生物的方法。
4．学习和掌握高活力淀粉酶具菌株的筛选方法及原理。
二实验原理在土壤中从在多种可产淀粉酶的菌种，并且芽孢杆菌是不错的菌种，因此，采集土样，对土壤中的芽孢杆菌进行分离纯化，就可得到理想菌株。
在菌株的初选过程中采用涂布平板法，把配好的培养基灭菌后倒成平板，再把稀释好的土样涂布到平板上，置于适宜的条件下进行培养。
24h后对其进行鉴定，鉴定的方法是在培养好的菌株上滴加碘液，周围出现透明圈的为产淀粉酶的菌株，并且透明圈与菌落直径的比值越大，说明菌种越纯或菌株的生产性能越高。
然后再进行复选，复选时采用平板划线法或斜面划线法，挑取的菌落为透明圈与菌落直径比值较大的，进行多步筛选就可得到较纯的菌株。
枯草芽孢杆菌能产生淀粉酶，因此昆仑生化公司淀粉酶生产车间周围采集的土壤稀释，再用涂布平板法对菌株进行初步培养，在培养出的菌落周围滴淀粉溶液，对周围出现透明圈的菌落在进行平板划线培养，在地如淀粉溶液鉴定，对周围出现透明圈的菌落进行斜面划线培养，就可得到较纯的产淀粉酶的菌株。
三实验器材与材料3.1 实验仪器：培养皿20个（8个做菌株的培养，其余的做筛选及分离纯化）、三角瓶（250ml 3个，100ml 6个）、试管14支（8支稀释时用，6支做斜面）、移液管14支（稀释样液）、100ml量筒、吸耳球、涂布棒、玻璃棒、酒精灯、接种环、烧杯等。
高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、无菌操作台、恒温水浴锅、摇床、电炉、天平等。
3.2 实验材料：1.固体培养基配制：可溶性淀粉2%、蛋白胨10g、氯化钠5g、牛肉膏3g、琼脂条20g、水1000ml。
2.液体培养基配制：蛋白胨10g、氯化钠5g、牛肉膏3g、水1000ml3.3 ：其它棉花、棉绳、纱布等3.4土壤采集：采土样地点选好后，用小铲子去除5厘米表土，取离地面5-15厘米的土样10-25g，盛于预先灭菌的牛皮纸袋中扎紧，并标注时间及地点土样采集时间：2012年5月12日土样采集地点：甘肃省张掖市昆仑生化公司淀粉生产车间周围四实验步骤4.1 实验流程：配制培养基→土样采集→制备菌悬液→菌株的初选（涂布平板）→鉴定→平板划线纯化→选育→筛选高产淀粉酶菌株4.2初选：4.2.1 淀粉培养基的配制分别称取可溶性淀粉12g、蛋白胨6g、氯化钠3g、牛肉膏1.2g、琼脂条12g，放入烧杯中，用自来水定容至600ml，加热使之全部溶解（琼脂条用剪刀剪碎后加入）后装入三角瓶中。
高产淀粉酶菌株的分离鉴定及酶学性质研究PPT课件
06
结论
研究成果总结
确定了该菌株的最佳生长条件，包括温度、pH 和培养基成分。
通过基因工程技术对菌株进行改造，提高了淀粉酶的 产量和性能。
成功分离出高产淀粉酶的菌株，经过鉴定为革 兰氏阳性菌。
酶学性质研究表明，该菌株产生的淀粉酶具有较 高的活性和稳定性，适用于多种淀粉类物质的降 解。
对实际生产的指导意义
针对市场需求，研究开发具有 更高活性和稳定性的淀粉酶突 变体，提高产品的竞争力。
谢谢观看
菌株分离方法
采用适当的培养基和培养条件， 通过划线分离、涂布分离、稀释 分离等方法，将菌株从样本中分 离出来。
分离得到的菌株鉴定
形态学鉴定
观察菌落的形状、大小、颜色、 质地等特征，以及菌体细胞的形 态、染色反应等，初步确定菌株 的分类地位。
生化鉴定
通过测定菌株对碳源、氮源、维 生素等物质的利用以及产生的代 谢产物，进一步确定菌株的分类 学特征。
高产淀粉酶菌株的分离鉴定及酶学 性质研究ppt课件
目录
• 引言 • 高产淀粉酶菌株的分离 • 酶学性质研究 • 菌株遗传特性研究 • 实验结果与讨论 • 结论
01
引言
研究背景与意义
淀粉酶在食品、造纸、纺织等工业领 域具有广泛应用，因此高产淀粉酶菌 株的分离鉴定及酶学性质研究具有重 要的实际意义。
酶活力的测定
在确定的发酵条件下，测定菌株产淀粉酶的 活力，为后续的酶学性质研究提供依据。
03
酶学性质研究
酶活力的测定
酶活力定义
酶活力是指酶催化特定化学反应的能 力，通常以单位时间内底物消耗或产 物生成的量来表示。
酶活力测定方法
通过在一定条件下，测定酶促反应的 初速度来计算酶活力，常用的方法有 紫外可见吸收法、荧光法、电化学法 等。
土壤中产淀粉酶菌株的分离、鉴定与纯化
Admin [选取日期]土壤中产淀粉酶菌株的分离、纯化鉴定及高活力淀粉酶菌株的筛选一、实验目的1、掌握从土壤中分离产淀粉酶菌株的方法2、掌握平板法分离与纯化微生物的技术3、进一步熟练和掌握无菌操作技术二、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同。
但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所需的C源、N源、无机盐、生长因子以及水等。
从混杂微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离纯化。
平板分离法普遍适用于微生物的分离与纯化，其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
稀释涂布法或平板法时常用的分离与纯化的方法，以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。
本实验采用透明圈检验法检测培养物中是否有产淀粉酶微生物的生长。
分离得到的单个菌落还要进行性能的筛选,分为初选和复选.三、实验材料样品:张掖市甘州区青松村面粉厂周围采集的土样若干试剂:营养琼脂、淀粉、土壤、碘液等仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱 .移液管、培养皿、试管、三角瓶、量筒、酒精灯、接种环等液体培养基:淀粉10 g、硫酸铵10 g、氯化钠5 g、硫酸0.5 g、磷酸氢二钾1 g、牛肉膏1 g，定容1 L四.实验步骤(一)培养基的配置1.称量按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。
待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。
将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，应控制火力并需不断搅拌,以防琼脂糊底烧焦。
a-淀粉酶产菌株筛选实验
a-淀粉酶高产菌株的分离鉴定及固定化枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性细菌，是a-淀粉酶高产菌株之一，其菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。
需氧菌。
可利用蛋白质、多种糖及淀粉，在遗传学研究中应用广泛。
其芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。
广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。
广泛生长在中性的的含淀粉多的环境中，如富含淀粉的面粉厂、土壤等。
淀粉酶是一种用途极为广泛的生物催化剂，可应用于面包制作业、淀粉的糖化和液化、纺织品脱浆、造纸、清洁剂工业、化学、临床医学的分析和制药业等。
淀粉酶家族包括α- 淀粉酶、β- 淀粉酶和葡萄糖淀粉酶。
α-淀粉酶为内切酶，以无规则的方式切开淀粉分子内部的α- 1，4 糖苷键，而使淀粉生成糊精和低聚糖，是一种钙离子依赖性酶。
β- 淀粉酶从非还原性末端顺次切下麦芽糖，为外切酶。
葡萄糖淀粉酶是一种作用于α- 1，4 糖苷键的外切酶，从非还原糖末端切下葡萄糖分子。
a-淀粉酶是一种胞外酶，由于酶纯化等操作往往导致酶活性和稳定性都受影响，而利用细胞固定化可以很好的解决这一问题，其中α -淀粉酶的固定化交联法是目前比较理想的方法。
另可尝试探索用一定浓度的凝胶包埋枯草芽孢菌或用吸附法、交联法将枯草芽孢杆菌固定化，使菌体不能流动而酶可以存在反应液里。
凝胶柱底部可选用一定大小的半透膜使酶和淀粉不能流出反应凝胶柱，而产物可以流出。
【实验一】一、a-淀粉酶生产菌种的分离与培养、筛选二、【实验原理】大多数枯草芽孢杆菌好氧，最适生长温度为32℃,PH为7.2，转速为140r/min，接种量为9％，芽孢率生长最适温度36℃，最适PH为7.2，最适转速120r/min。
在以淀粉为碳源的固体培养基上用划线法分离纯化出产a-淀粉酶的菌株，根据是否可产生透明圈来筛选。
透明圈越大，产酶能力越强。
三、【实验仪器和材料】1、试剂：0.1%吕氏(Loeffier)美蓝染液配制方法：A 液：美蓝(methylene blue, 又名甲烯蓝)0.3 g, 95%乙醇30 ml；B 液：0.0l% KOH l00ml。
土壤中产淀粉酶菌株的筛选
土壤中淀粉酶产生菌的筛选分离一、实验目的♦学习和掌握从土壤中分离微生物的技术♦掌握产淀粉酶菌株的初筛方法二、实验原理淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麦芽糖、糊精等糖类物质，淀粉酶菌株是工业酶制剂生产的重要菌种。
利用淀粉酶菌产生淀粉水解酶的特性，可以选择可溶性淀粉为主要营养成分的分离培养基，因为菌株分泌的淀粉酶可以将可溶性淀粉水解而在菌落周围形成透明圈。
根据透明圈直径和菌落直径之比值可以初步确定酶活力，其比值越大，酶活力越高。
三、实验材料（1）样品从地表下10—15cm的土壤中用无菌小铲取土样，记录取样的地点、时间和周围环境。
（2）培养基淀粉培养基（牛肉膏0.5%，蛋白胨0.5%，Nacl0.5%，可溶性淀粉1%，kH2PO40.05g,,MgSO40.01g, CaCl20.05g，琼脂2%，PH6.0，配制时先用少量水将淀粉调成糊状，加热，边搅拌边加入剩余的水和其它成分。
）（3）其它碘液（0.02mol）、培养皿、试管、温度计、水浴锅、吸管、涂布棒等四、方法与步骤1、取样取土样平摊于干净的纸上，从四个角和中央各取一点土，混合均匀，称5克，置于有玻璃珠的45ml无菌水中，振荡约5-10分钟，制成10-1土壤稀释液。
2、涂布分离（1）以10倍稀释法稀释至10-4,10-5,10-6，每个稀释度各取0.1ml于淀粉平板培养基中，每个稀释度倒两个平皿。
（2）涂布：用无菌涂布棒均匀涂布，在平板上标记记号，倒置于30℃培养箱中培养24-48小时。
（3）挑菌落：观察菌落周围是否出现透明圈(可用碘液滴加在菌落周围)，挑取比值大的菌落接入斜面培养基，30℃培养24小时，备用。
（4）纯种鉴定菌种经革兰氏染色，油镜观察，根据细胞形态及菌落特征进行鉴定。
（5）纯化将选定的菌株于淀粉培养基上采用平板划线分离法进行纯化。
五、结果与讨论挑取3-5株菌落，绘制和描写菌株的形态，计算比值d H/d C。
实验 产淀粉酶菌株的筛选
六、结果分析
从不同地点获得的结果为什么会出现差1.为什么要用淀粉作为碳源？ 2.为什么要及时观察实验结果，否则会有什么样的后 果？
3.为什么同一个土样要稀释不同梯度进行涂平板？
当能合成淀粉酶的微生物在固体培养基中生长时，会将淀粉
酶分泌到菌体周围，使菌落周围的淀粉水解成为小分子量的 糊精、聚糖和单糖。
在用碘显色时，在菌体周围形成透明圈。
三、实验材料及仪器
实验材料：
实验仪器： 牛皮纸
蛋白胨
牛肉膏
培养皿
试管
NaCl
琼脂 可溶性淀粉 碘液
四、实验步骤
3. 土样的采集
（1）每一小组不同环境取土样并记录当时取样环境情况。
（2）以小组为单位进行稀释分离：
取土样 1g，加入 9mL无菌水，逐步稀释至105、106、107 ，每个梯度涂2个平皿。
（3）30℃恒温培养48 h。
图示：梯度稀释法分离微生物
四、实验步骤
（4）产淀粉酶菌株的鉴定。
涂布棒
恒温培养箱
玻璃珠
四、实验步骤
1.筛选培养基的配制
可溶性淀粉 2g，NaCl 5g，牛肉膏 5g，蛋白胨 10g，琼脂
20g，水1000mL。
2.碘液的配制 称取 KI 2g，用50 mL去离子水溶解，迅速称量I2 0.5g并加 入KI溶液中，用纯水定容到100mL，搅拌溶解后保存在棕色 瓶中，橡皮塞封口。
1实验一实验一产淀粉酶菌株的筛选产淀粉酶菌株的筛选一实验目的一实验目的n从土壤中筛选一株能够合成分泌淀粉酶的微生物二实验原理二实验原理n自然界中有些微生物能够以淀粉作为碳源进行生长繁殖
土壤中产淀粉酶菌株的分离与鉴定及高活力淀粉酶的筛选
土壤中产淀粉酶菌株的分离、纯化与鉴定及高活力淀粉酶菌株的筛选组数：第一组组员：王臣东李长花张晓晶杨明明1 实验目的1.1掌握土壤中分离产淀粉酶菌株的方法。
1.2进一步掌握和熟练无菌操作技术。
1.3掌握分离纯化微生物的方法。
1.4掌握从环境中采集样品并从中分离纯化某种微生物的完整操作步骤。
1.5巩固以前学的微生物学实验技术。
1.6学习淀粉酶活性的测定方法。
2 实验原理α-淀粉酶是一种液化型淀粉酶，它的产生菌芽孢杆菌，广泛分布于自然界，尤其是在含有淀粉类物质的土壤等样品中。
淀粉酶是能够催化淀粉水解，转化成葡萄糖的、麦芽糖及其他低聚糖的一类酶的总称。
从淀粉厂周围采集土壤样品，采用稀释法制备土壤稀释液，涂布于营养琼脂培养基平板上培养1天，在平板上滴加碘液，可产生淀粉酶的菌株水解淀粉遇碘不变蓝，在培养基表面形成透明圈。
然后挑取可产生透明圈的菌株在平板划线培养2-3次，得到纯化的菌株，再测其酶活力大小。
分离得到纯种这只是选种工作的第一步。
所分得的纯种是否具有生产上所要求的性能，还必须要进行性能测定后才能决定取舍。
性能测定的方法分初筛和复筛两种。
初筛一般在培养皿上根据选择性培养基的原理进行。
例如要测定淀粉酶的活力可以把斜面上各个菌株一一点种在含有淀粉的培养基表面，经过培养后测定透明圈与菌落直径的比值大小来衡量淀粉酶活力的高低。
复筛是在初筛的基础上做比较精细的测定。
一般是将微生物培养在三角瓶中作摇瓶培养，然后对培养液进行分析测定。
在摇瓶培养中，微生物得到充分的空气，在培养液中分布均匀，因此和发酵罐的条件比较接近，这样，测得的结果更具有实际的意义。
3 实验器材3.1样品：土样（甘肃昆仑生化公司周围采集的土样若干）3.2培养基3.2.1平板培养基：蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、可溶性淀粉2g、琼脂15-20g、自来水1000ml3.2.2斜面培养基：同3.2.13.2.3液体培养基：蛋白胨10g、牛肉膏3g、氯化钠5g、自来水1000ml3.3 器材：30个90培养皿、酒精灯、接种环、14个试管、5个三角瓶（250ml）、涂布棒、移液管、恒温水浴锅、恒温培养箱、高压灭菌锅、超净工作台3.4试剂3.4.1 淀粉酶活力测定：碘液3.4.2革兰氏染色：草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇3.4.3 2%淀粉溶液：2克淀粉加入少量热水使其溶解，再加入热水至100ml4 实验步骤4.1 培养基的制备及其仪器的灭菌4.1.1按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。
产淀粉酶菌种的分离
产淀粉酶菌种的分离产淀粉酶菌种的分离、筛选、鉴定和产酶条件优化一．设计背景淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的总称，是用于酿酒、食品、医药、纺织、饲料等具有商业价值的重要酶类。
是最早实现工业化生产，迄今为止用途最广，产量最大的酶制剂品种。
所以开始产淀粉酶菌种的分离、筛选、鉴定和产酶条件优化。
二．目的要求分离筛选出产淀粉酶菌种，并进行鉴定和产酶条件的优化三．实验技术步骤及详细流程采集含菌样品设计配制选择性培养基分装灭菌平板涂布分离纯化菌种（透明圈法）划线分离进一步纯化产酶菌种（透明圈法）液体培养法复筛产酶菌种，检测产酶性能目的菌种斜面和甘油保藏目的菌种的染色法显微观察目的菌种的常规生理生化鉴定考察紫外线对产酶菌种生长及产酶性能的诱变效应考察碳源或氮源种类及浓度对产酶菌种生长及产酶性能的影响考察PH对产酶菌种生长及产酶性能的影响1.采集含菌样品根据所选产酶菌种的要求，我们宜在淀粉制品霉变的样品中分离。
故在新校区的花坛中提前一周埋入淀粉制品（距离地表5cm左右），一周后用小铁勺在新校区的花坛中挖出泥土，放入提前准备好的塑料袋中。
2.培养基的配制2.1平板筛选培养基：牛肉膏0.5%，蛋白胨1.0%，NaCl 0.5%,可溶性淀粉2．0％，琼脂1．5～2．0％，pH自然。
121℃灭菌20min。
2.2摇瓶复筛培养基：玉米粉3％，玉米浆3％，CaCl20．13％，Na2HP04 0．3％，(NH4)2S04 0．4％，pH 6．0。
121℃灭菌20min。
2.3斜面保存培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，琼脂15.0～20.0g，加蒸馏水至1000ml。
pH7.0～7.2。
2.4种子培养基：牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，琼脂15.0～20.0g，加蒸馏水至1000ml。
pH7.0～7.2。
2.5产酶液体培养基：玉米粉3％，玉米浆3％，CaCl20．13％，Na2HP04 0．3％，(NH4)2S04 0．4％，pH 6．0。
产淀粉酶菌株的分离与纯化
产淀粉酶菌株的分离与纯化淀粉酶是一种非常重要的酶，能够分解淀粉成为可溶性糖，因而在食品、医药、酿酒等行业得到广泛应用。
因此，分离和纯化产淀粉酶菌株是具有重要意义的。
下文将介绍产淀粉酶菌株的分离与纯化方法。
1. 采集样品：淀粉酶通常存在于地下、水中、土壤等环境中。
样品的选择应根据所需的淀粉酶的类型和应用场景来决定。
2. 感染培养基：将样品置于适宜的环境中，如适温、适湿度、适pH值的培养基中，让细菌在培养基中生长和繁殖。
比较常用的培养基有TSA、PDA、LB、NB等。
3. 分离单菌：通过分离单菌，可以确定产淀粉酶的细菌，操作方法较为简单。
将样品分别在加了32g/L的琼脂和未加琼脂的培养基上涂布，按舞台上单菌生长的特点，通过肉眼观察或显微镜观察，挑选纯化细菌。
采用串联稀释法和滤膜法也可以分离单菌。
4. 鉴定菌株：通过对不同细菌的营养代谢特性，生化特性和形态特征等鉴定菌株，找出含有产淀粉酶的菌株。
1. 生长条件的调节：影响淀粉酶生长和产酶能力的因素有很多，如温度、pH、营养物质等。
应该根据菌株特性，适当调整这些因素，以提高淀粉酶的产量。
2. 分离淀粉酶：淀粉酶通常存在于细菌的胞外，利用超声波破碎、离心、超滤等方法可以将淀粉酶从菌体的胞外获得。
离心法是最常用的方法，将菌液离心后，分离出淀粉酶液，可以去除不溶性的杂质。
3. 纯化淀粉酶：淀粉酶纯化的方法有许多种，如酒精沉淀法、离子交换层析法、凝胶过滤层析法等。
其中，离子交换层析法是常用的一种方法，先将淀粉酶溶液加到离子交换树脂中，随后用缓冲溶液洗脱离子交换树脂，分离出淀粉酶。
以上介绍了产淀粉酶菌株的分离与纯化方法，这些方法可以得到高产量和纯度的淀粉酶，为利用淀粉酶提供了重要的技术支持。
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淀
粉酶芽抱杆菌的筛
1目的
了解产淀粉酶细菌的分离和纯化的原理，掌握常用的微生物分离、纯化方法
2原理
从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
平板分离法普遍用于微生物的分离与纯化。
其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求, 或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体。
因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养。
获取单个菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等技术完成。
值得指出的是，从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。
3材料
Q A严去甘
3.1培养基
淀粉培养基: 可溶性淀粉1%、蛋白胨1% 、葡萄糖0. 5%、氯化钠0. 5%、牛肉膏0. 5%、
琼脂粉0. 8% 。
3.2 溶液或试剂
盛9ml 无菌水的试管，盛99ml 无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶, 制霉菌素母液（抑制真菌）。
3.3 样品
土样
3.4 仪器或其它用具
高压蒸汽灭菌锅、旋涡混合器、干燥箱、恒温培养箱、超净工作台、无菌涂布器、显微镜、无菌吸管、无菌培养皿、无菌刻度吸管、酒精灯、记号笔、火柴、试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、恒温水浴装置等。
4实验流程
倒平板f制备梯度稀释液f涂布（或倾注法）f培养f挑单菌落f保存。
5步骤准备工作：
摆好实验材料：将培养基、接种工具和其它用品全部在超净工作台上摆好。
进行紫外线灭菌30min,关闭紫外灯，20-30min后打开照明灯，进行操作。
接种前用酒精棉球将双手消毒。
5.1 稀释平板法
①倒平板
将淀粉培养基加热溶化待冷至55〜60C时，混合均匀后分别倒平板，淀粉培养基倒六皿三皿用于稀释平板；三皿用于划线分离。
②制备土壤稀释液
选好采样地点，产去表层5cm取5-15cm处。
用无菌器具规范采样几十克，装入无菌的塑料袋或纸袋中扎好，记录采样时间、地点、采样环境等以备考证。
采样后应尽快分离。
称取土样lg，放
入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶中，振摇约20min,使土样与水充分混合，将锥形瓶加塞、包扎、摇匀（无菌室里），利用恒温水浴装置80C左右水浴，水浴
锅温度恒定后维持20min （制悬液时就应先开始加热），制成10-1 g/ml的土壤悬液。
用一支lml 无菌吸管从中吸取1ml 土壤悬液加入盛有9ml 无菌水的大试管中充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取lml 加入另一盛有9ml 无菌水的试管中，混合均匀，以此类推制成10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀释度的土壤溶液。
③涂布
将上述每种培养基的三个平板底面分别用记号笔写上10-4、10-5和10-6三种稀度，然后用无
菌吸管分别由10-4、10-5和10-6三管土壤稀释液中各吸取0.1或0.2ml，小心地滴在淀粉平板培养
基表面中央位置。
用无菌涂布器涂布。
右手拿无菌涂布器平放在平板培养基表面上，将菌悬液先沿同心圆方向轻
轻地向外扩展，使之分布均匀。
室温下静置5〜I0min，使菌液浸入培养基。
④培养
平板倒置于37C培养箱中培养24h。
取出培养好的平皿,在长出的菌落上滴加碘液,菌落
周围如有无色透明圈出现, 说明淀粉被水解, 即该菌株能产生淀粉酶.
5.2画线分离
从稀释平板法所得的菌落中选择菌落周围透明圈和菌落直径之比值较大的菌落，进行划线分离。
将划线分离后的培养皿放入37 C培养箱中培养24 h，在长出的菌落上滴加碘液, 观察记录结果。
5.3富集培养
在上一步划线分离所得培养基中挑选产酶活力较高的单个菌落，在斜面培养基上进行富
集培养。
将斜面培养基放入37 C培养箱中培养24 h .
6结果与分析。