从牛奶中提取酪蛋白

实验二从牛奶中提取酪蛋白
一、实验目的要求
1.学习从牛乳中制备酪蛋白的方法。

2.了解从牛奶中制取酪蛋白的原理。

二、实验原理
牛乳中的主要蛋白质是酪蛋白，含量约为3.5g/100ml。

酪蛋白是含磷蛋白质的混合物，相对密度1.25-1.31，不溶于水、醇、有机溶剂，等电点为4.7.利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH值调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。

用乙醇洗涤沉淀物，除去脂质杂质后便可得到纯的酪蛋白。

三、原料与器材
鲜牛奶、恒温水浴锅、台式离心机、抽滤装置。

四、试剂
1.95%乙醇
2.无水乙醚
3.0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液
A液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取NaAc.3H2O54.44g，定容至2000ml。

B液（0.2mol/l的醋酸-醋酸钠溶液）：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g，定容至1000ml。

取A液1770ml与B液1230ml混合即得pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液3000ml。

4.乙醇-乙醚混合液
乙醇：乙醚=1：1（体积比）。

五、操作步骤
1.将5ml牛奶置试管或小烧杯中，在水浴中加热至40℃，在搅拌下漫漫加入预热至40℃（应注意两种液体都应先预热至40℃再用），pH4.7的醋酸-醋酸钠缓冲液5ml，用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液进行调整)。

观察牛奶开始有絮状沉淀出现后，保温一定时间使沉淀完全。

将上述悬浮液冷却至室温。

离心分离8min（8000r/min）或15min（2000r/min），弃去上清液，得到酪蛋白粗制品。

2.用蒸馏水洗涤沉淀3次（洗涤时将沉淀颗粒用干净吸管吹开或用毛细管的封闭一端搅开，充分洗涤），离心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），弃去上清液。

3.在沉淀中加入3ml95%的乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。

用乙醇-乙醚混合液洗涤沉淀2次，最后用乙醚洗涤沉淀2次，抽干。

4.将沉淀摊开在表面皿上，风干，得酪蛋白精制品。

5.称取所获酪蛋白的质量（g）。

六、计算含量和得率：
酪蛋白含量（g/ml）=酪蛋白（g）/50m l×100%；
得率=测得含量/理论含量×100%。

七、实验注意事项：
1.离心管中装入样品后必须严格配平，否则对离心机损坏严重；
2.离心管装入样品后必须盖严，并擦干表面的水分和污物后方可放入离心机。

3.离心机用完后应拔下电源，然后检查离心腔中有无水迹和污物，擦除干净后才能盖上盖子放好保存，以免生锈和损坏。

八、思考题：
1.为什么调整溶液的pH可以将酪蛋白沉淀出来？
2.试设计一个利用蛋白质其他性质提取蛋白质的实验。

实验准备（每小组用量）
1.试剂：
（1）鲜牛奶10ml；
（2）0.2mol/l的醋酸-醋酸钠缓冲液10ml；
（3）95%的乙醇6ml；
（4）乙醇-乙醚混合液（乙醇：乙醚=1：1<体积比>）6ml；
（5）乙醚4ml；
（6）蒸馏水若干。

2.器材：
（1）恒温水浴锅；
（2）台式离心机；
（3）抽滤装置（循环水抽滤泵）；
（4）精密pH试纸（2条）或酸度计；
（5）表面皿；
（6）纱布或滤纸；
（7）剪刀；
（8）毛细管或细口吸管；
（9）离心管（1.5ml，或与离心机配套）若干，总容积应大于10ml，本实验中用1.5ml离心管约10个/小组。