最新现代分子生物学技术
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仅含有0.05μg的微
量DNA也可以被清晰 地检测出来。
_______________________________ ___________________
电泳操作基本程序
称样
溶解
加热
制板 _______________________________
___________________
倒胶
取样
点样
电泳
_______________________________ ___________________
检测
结果分析
_______________________________ ___________________
（二） 核酸的分子杂交
将带有互补的特定核苷酸序 列的单链DNA或RNA混合在一 起，其相应的同源区段就会 退火形成双链结构。如果退 火的核酸来自不同的生物有 机体，所形成的双链分子就 被称为杂种核酸分子。
_______________________________ ___________________
材料：尼龙滤膜 、硝酸纤维素滤膜 、二乙氨基乙基纤维素滤
膜（DEAE）
步骤： 第一，将分离的核酸样品转移到固体支持物滤膜上－核酸印 迹转移、电泳凝胶核酸印迹法、斑点和狭线印迹法、菌落和 噬菌斑印迹法; 第二，是将具有核酸印迹的滤膜与带有放射性或其它标记的 DNA或RNA探针进行杂交
Fra Baidu bibliotek
二、 DNA操作技术
（一） 核酸的凝胶电泳
基本原理：一种分子被放置到电场中，它就会以一 定的速度移向适当的电极，这种电泳分子在电场作用 下的迁移速度，叫做电泳的迁移率，它与电场强度和 电泳分子本身所携带的净电荷数成正比,与分子的摩 擦系数成反比
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☻凝胶浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强；反之浓 度降低，孔隙就增大，其分辨能力也就随之减弱。
凝胶类型及浓度 0.3%琼脂糖 0.7%琼脂糖 1.4%琼脂糖 4.0%聚丙烯酰胺 10.0%聚丙烯酰胺 20.0%聚丙烯酰胺
成像
3. 50年代末至60年代，相继提出了"中心法则"和操纵子学说, 成功地破译了遗传密码，充分认识了遗传信息的流动和表达。
Jacob and Monod
_______________________________ ___________________
（二）两大技术保证：
1.DNA的体外切割和连接
分离DNA片段的大小范围（bp） 50 000~1 000 20 000~1 000 6 000~300 1 000~100 500~25 50~1
_______________________________ ___________________
☻在紫外线的照射下 结合溴化乙锭（简称 EtBr）的DNA分子发 出荧光,每条DNA带中
_______________________________ ___________________
琼脂糖凝胶电泳
☎琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为0.2~50kb之间
_______________________________ ___________________
聚丙烯酰胺凝胶电泳
☎聚丙烯酰胺凝胶分辨范围为1到1000个碱基对之间
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一、发展历程及基础
（一）三大成就 ：
1、 40年代确定了遗传信息的携带者，即基 因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗 传的物质基础问题；
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1962年Arber 发现限制性核酸内切酶，1967Gellert发现了 DNA 连接酶
限制性酶 连接酶
_______________________________ ___________________
2. DNA的核苷酸序列分析技术
_______________________________ ___________________
阴极
DNA加样孔
阳极
大分子量的DNA 移动的慢
小分子量的DNA 移动的快
电泳缓冲液
DNA和RNA被称为多聚阴离子（polyanions），核酸分子放
置在电场当中，会向正电极的方向迁移。在一定的电场强
度下，DNA分子的迁移率，取决于核酸分子本身的大小和
构型。
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DNA/DNA 或DNA/RNA
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不同 温度 下DNA 的构 型变 化
在大多数核酸杂交反应中，经过凝胶电 泳分离的DNA或RNA分子，都必须通过毛细管 或电导作用被转移到滤膜上，而且是按其在 凝胶中的位置原封不动地“吸印”上去的， 因此，核酸杂交也被称为“印迹杂交”。
2. 50年代揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复 制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题；
Rosalind Franklin
X-ray 光源
DNA
1953- Franklin & Wilkins Maurice Wilk_i_n_s____________________________ ___________________
分子生物学研究方法
_______________________________ ___________________
基因操作
DNA分子的切割与连接 核酸分子杂交
凝胶电泳
细胞转化 核酸序列分析 基因的人工合成 基因的定点突变 PCR扩增等
核心技术
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量DNA也可以被清晰 地检测出来。
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电泳操作基本程序
称样
溶解
加热
制板 _______________________________
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倒胶
取样
点样
电泳
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检测
结果分析
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（二） 核酸的分子杂交
将带有互补的特定核苷酸序 列的单链DNA或RNA混合在一 起，其相应的同源区段就会 退火形成双链结构。如果退 火的核酸来自不同的生物有 机体，所形成的双链分子就 被称为杂种核酸分子。
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材料：尼龙滤膜 、硝酸纤维素滤膜 、二乙氨基乙基纤维素滤
膜（DEAE）
步骤： 第一，将分离的核酸样品转移到固体支持物滤膜上－核酸印 迹转移、电泳凝胶核酸印迹法、斑点和狭线印迹法、菌落和 噬菌斑印迹法; 第二，是将具有核酸印迹的滤膜与带有放射性或其它标记的 DNA或RNA探针进行杂交
Fra Baidu bibliotek
二、 DNA操作技术
（一） 核酸的凝胶电泳
基本原理：一种分子被放置到电场中，它就会以一 定的速度移向适当的电极，这种电泳分子在电场作用 下的迁移速度，叫做电泳的迁移率，它与电场强度和 电泳分子本身所携带的净电荷数成正比,与分子的摩 擦系数成反比
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☻凝胶浓度越高，孔隙越小，其分辨能力就越强；反之浓 度降低，孔隙就增大，其分辨能力也就随之减弱。
凝胶类型及浓度 0.3%琼脂糖 0.7%琼脂糖 1.4%琼脂糖 4.0%聚丙烯酰胺 10.0%聚丙烯酰胺 20.0%聚丙烯酰胺
成像
3. 50年代末至60年代，相继提出了"中心法则"和操纵子学说, 成功地破译了遗传密码，充分认识了遗传信息的流动和表达。
Jacob and Monod
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（二）两大技术保证：
1.DNA的体外切割和连接
分离DNA片段的大小范围（bp） 50 000~1 000 20 000~1 000 6 000~300 1 000~100 500~25 50~1
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☻在紫外线的照射下 结合溴化乙锭（简称 EtBr）的DNA分子发 出荧光,每条DNA带中
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琼脂糖凝胶电泳
☎琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为0.2~50kb之间
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聚丙烯酰胺凝胶电泳
☎聚丙烯酰胺凝胶分辨范围为1到1000个碱基对之间
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一、发展历程及基础
（一）三大成就 ：
1、 40年代确定了遗传信息的携带者，即基 因的分子载体是DNA而不是蛋白质，解决了遗 传的物质基础问题；
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1962年Arber 发现限制性核酸内切酶，1967Gellert发现了 DNA 连接酶
限制性酶 连接酶
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2. DNA的核苷酸序列分析技术
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阴极
DNA加样孔
阳极
大分子量的DNA 移动的慢
小分子量的DNA 移动的快
电泳缓冲液
DNA和RNA被称为多聚阴离子（polyanions），核酸分子放
置在电场当中，会向正电极的方向迁移。在一定的电场强
度下，DNA分子的迁移率，取决于核酸分子本身的大小和
构型。
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DNA/DNA 或DNA/RNA
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不同 温度 下DNA 的构 型变 化
在大多数核酸杂交反应中，经过凝胶电 泳分离的DNA或RNA分子，都必须通过毛细管 或电导作用被转移到滤膜上，而且是按其在 凝胶中的位置原封不动地“吸印”上去的， 因此，核酸杂交也被称为“印迹杂交”。
2. 50年代揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复 制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题；
Rosalind Franklin
X-ray 光源
DNA
1953- Franklin & Wilkins Maurice Wilk_i_n_s____________________________ ___________________
分子生物学研究方法
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基因操作
DNA分子的切割与连接 核酸分子杂交
凝胶电泳
细胞转化 核酸序列分析 基因的人工合成 基因的定点突变 PCR扩增等
核心技术
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