医学免疫学CDC实验报告

CDC实验

一.实验原理

细胞表面抗原与相应的抗体（IgG1~3或IgM）特异性结合形成的免疫复合物，可通过经典途径激活补体形成攻膜复合体而导致细胞膜穿孔。因此，水溶性染料如台盼蓝可进入受损细胞，染成蓝色，为阳性反应；不带抗原的细胞，未损伤，不染色，为阴性反应。

二. 实验步骤

1.胸腺细胞悬液制备

颈椎脱臼法处死小鼠

↓

暴露胸腔，分离出胸腺

↓

镊子夹住胸腺反复轻轻研磨

↓

单个细胞

PBS洗２次，1000rpm，10min

↓

加入5%小牛血清PBS制备细胞悬液

调节细胞浓度至3-4×107/ml

三.结果判断

①细胞膜穿孔的细胞呈蓝色，细胞膜完整的活细胞不着色。

②细胞毒性作用的判断标准如下：

阴性反应( －) 死细胞占0-10%

可疑阳性反应( ±) 死细胞占11-20%

弱阳性反应( + ) 死细胞占21-50%

阳性反应( ++ ) 死细胞占51-80%

强阳性反应(+++ ) 死细胞占81-100%

四.结果记录

1.表格记录

2.照片展示

五.讨论

①.第①组成阳性的原因：实验中加入抗原、抗体、补体、LC 。抗原抗体能形成抗原抗体免疫复合物，通过经典途径激活补体，形成攻膜复合物，从而导致细胞膜穿孔，细胞受损，台盼蓝进入细胞，染成蓝色，呈阳性反应。说明CDC 实验必须要有抗原、抗体、补体共同参与。

②.第②组成阴性的原因：实验中加入抗体、LC。因为无抗原和补体，不能形成抗原抗体免疫复合物，也无补体，因此不能形成攻膜复合物，不能使细胞膜穿孔，细胞无损伤，台盼蓝无法进入细胞，不能被染成蓝色，呈阴性反应。说明CDC实验必须要有补体的参与。

③.第③组呈阴性的原因：试验中加入LC和补体，因为无抗原抗体，所以没有抗原抗体免疫复合物的形成，补体不能被激活，不能形成攻膜复合物，细胞无受损，台盼蓝不能进入而不被染色，呈阴性反应。说明CDC实验必须要有抗原、抗体的参与。

④.第④组呈阴性的原因：实验中只加入LC，既无抗原抗体免疫复合物的形成，也无补体，细胞无受损，台盼蓝不能进入而不被染色，呈阴性反应。说明CDC实验必须要有抗原、抗体、补体的共同参与。