一种检测纳米材料细胞毒性的方法

一种检测纳米材料细胞毒性的方法

1 技术领域

本发明涉及一种检测纳米材料细胞毒性的方法，属于纳米材料安全性检测领域。

2 背景技术

纳米材料广泛应用于生活中的各个领域，人们在使用药品、食品添加剂、化妆品等时容易接触到纳米材料。有研究表明纳米材料可引起机体炎症反应、氧化应激、DNA损伤等。纳米材料对人类与环境具有一定的潜在威胁，目前纳米材料细胞毒性的检测方法操作复杂、价格昂贵、可重复性差等。

3 发明内容

在为解决背景技术中所存在的问题，本发明提供一种检测纳米材料细胞毒性的方法，通过检测纳米材料对Hela细胞线粒体形态与细胞色素C的分布的影响来衡量纳米材料的细胞毒性。

本发明的技术方案是，一种检测纳米材料细胞毒性的方法，其特征在于：包括如下步骤

（1）COX4-PEGFP-N2质粒的构建

（a）提取Hela细胞的RNA，并将其进行反转录操作，用合适的引物通过PCR扩增目的基因COX4并使其带有内切酶的黏性末端；

（b）酶切PEGFP-N2质粒与目的基因COX4，并将酶切产物纯化后进行酶连，得到重组质粒COX4-PEGFP-N2；

（c）将重组质粒COX4-PEGFP-N2用大肠杆菌DH-5α进行扩增，并通过基因测序鉴定重组质粒；

（2）COX4-PEGFP-N2质粒的转染与筛选

将重组质粒COX4-PEGFP-N2转染Hela细胞，并通过G418筛选稳定生长的Hela细胞株，筛选的Hela细胞株通过荧光显微镜观察验证其荧光稳定性；

（3）纳米材料细胞毒性的检测

将筛选的Hela细胞株培养于孔板中，第二天向孔板中加入纳米材料继续细胞培养，第三天通过荧光显微镜观察线粒体的形态与荧光强度来评价纳米材料的

细胞毒性。

本发明的有益效果是：以图像直观衡量纳米材料的细胞毒性，检测灵敏，重复性高。

4 具体实施方式

以下结合附图和具体实例来进一步说明本发明。

本发明提供了一种检测纳米材料细胞毒性的方法，其特征在于：包括如下步骤

（1）COX4-PEGFP-N2质粒的构建

（a）提取Hela细胞的RNA，并将其进行反转录操作，用合适的引物通过PCR扩增目的基因COX4并使其带有内切酶的黏性末端；

（b）酶切PEGFP-N2质粒与目的基因COX4，并将酶切产物纯化后进行酶连，得到重组质粒COX4-PEGFP-N2；

（c）将重组质粒COX4-PEGFP-N2用大肠杆菌DH-5α进行扩增，并通过基因测序鉴定重组质粒；

（2）COX4-PEGFP-N2质粒的转染与筛选

将重组质粒COX4-PEGFP-N2转染Hela细胞，并通过G418筛选稳定生长的Hela细胞株，筛选的Hela细胞株通过荧光显微镜观察验证其荧光稳定性；

（3）纳米材料细胞毒性的检测

将筛选的Hela细胞株培养于孔板中，第二天向孔板中加入纳米材料继续细胞培养，第三天通过荧光显微镜观察线粒体的形态与荧光强度来评价纳米材料的细胞毒性。

当纳米材料无细胞毒性时，得到的结果如图1所示，但纳米材料细胞毒性很强时，得到的结果如图2所示。