细胞工程习题

细胞培养技术习题（含答案）

第一章动物细胞培养概述

一、名词解释

细胞培养：是指将动物活体体内取出的组织用机械或消化的方法分散成单细胞悬浮液，然后放在类似于体内生存环境中，进行孵育培养，使其生存、生长并维持其结构与功

能的方法。

组织培养：从生物体内取出活的组织在体外进行培养的方法。

器官培养：将活体内的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基取出，在体外培养的方法。

二、填空题

1.体外培养（或组织培养）主要包括_细胞培养_，_组织培养_，和_器官培养_ 三种类型。

2._Harrison_的实验开创了动物组织和细胞培养的先河，他建立了_盖玻片悬滴_培养法

3.在卡氏瓶原理的启发下，出现了用试管培养，继而又出现了多种类型的_培养瓶、_培养

皿和_多孔培养板_的培养。从20世纪40年代开始，大多数培养工作都过渡到用_瓶子_培养

4.在动物细胞培养方法的发展过程中，具有历史意义的培养方法有盖玻片悬滴培养法，_

旋转管培养的方法_，_灌注小室培养法_，和目前普遍应用的单层细胞培养法

5.早期细胞培养采用_天然_培养基，现在广泛采用添加___血清_____的_人工合成培养基，

近二十年来，动物细胞培养朝着无血清_培养基的方向发展。

三问答题

1、动物细胞培养技术现已应用到那些领域？请举例说明。

动物细胞培养技术几乎已应用到生物、医学研究的各个领域。这门技术自创立至今，已在多个学科领域乃至生产实践中均发挥了巨大的作用。

一、在生物学领域的基础研究中的应用

离体培养的动物细胞具有培养条件可人为控制且便于观察检测的特点，因而可广泛应用于生物学领域的基础研究中。

1．在细胞生物学上的应用

2．在遗传学上的应用

除了可用培养的动物细胞进行染色体分析外，还可结合细胞融合技术建立细胞遗传学，进行遗传分析和杂交育种。

3．在胚胎学上的应用

通过体外培养卵母细胞，并进行体外受精、技术而应用于家畜的繁殖生产中。

4．在病毒学上的应用胚胎分割和移植己发展成了一种较成熟的

在制备减毒活疫苗和诊断用抗原时，离不开细胞这一病毒增殖的场所。另外，在病毒学研究中，用培养的动物细胞代替试验动物做斑点分析．

5.在药理学领域的应用

二、在临床医学上的应用

1．用于遗传疾病和先天畸型的产前诊断

目前，人们已经能够用羊膜穿刺技术获得脱落于羊水中的胎儿细胞，经培养后进行染色体分析或甲胎蛋白检测即可诊断出胎儿是否患有遗传性疾病或先天畸型。

2．用于癌症的早期诊断和预防

我国的科学工作者通过培养淋巴细胞，病人，以便进行及早的预防和治疗。

3．用于临床治疗并对其染色体进行对比分析检测出易患癌症的

4．用于药物效应的检测

检测治疗肝病的药物可选用肝细胞、检测抗癌药物可选用癌细胞。

三、在动物育种上的应用

四、在生物制品生产上的应用

2、动物细胞培养有哪些要求和那些方法？

动物细胞培养工作的基本要求：

1.培养前准备

2．操作间消毒

3．洗手和着装

4．火焰消毒

5．实验中的操作要求

动物细胞培养工作的工作方法：

细胞培养是一种操作程序比较复杂、需求条件多而严格的实验性工作，工作时必须注意一定的方法，主要有以下几点予以重视。

①将所有操作程序如洗刷、配液、消毒等，制定出统一的规范和要求，并在一定时间内保持相对稳定和要求人人遵守。

③各种用液(培养液、胰蛋白酶、Hanks液、NaHCO2、抗生素液)均应由专人负责配制，并保证做到制备浓度精确、灭菌可靠。所有制备好的溶液和试剂瓶上都要有标签，注上名称、浓度、消毒与否和制备日期。

③一切培养用品都要有固定的存放地点，其中尤为重要的是，培养用品与非培养用品应严格分开，已消毒与末消毒品应严格分开存放。

以上一切措施都是为了避免各种杂质混入细胞生存环境、防止微生物感染和细胞“污染”。所谓细胞污染，是指不同细胞之间因操作不当造成的相互混杂，使细胞群体不纯的现象。近年来世界上不少实验室都出现过这种事故，应引起注意。

第二章动物细胞培养的基本知识

一、名词解释

贴壁依赖性细胞：细胞必须贴附于支持物表面才能生长，因此又称为贴壁型细胞。

非贴壁依赖性细胞：细胞在体外生长时不需要贴附于支持物表面，可以悬浮状态在培养液中生长，这种细胞又称为悬浮型细胞。

接触抑制：是指体外培养的细胞在贴附底物上连接成片、相互接触后失去运动的现象，这是某些贴附生长型细胞的特征之一。

无限细胞系：由于某种因素的影响，细胞可能发生自发转化，即细胞获得持久性增殖能力，这样的细胞群体称为连续细胞系。

脱分化：指的是细胞在体外不可逆地失去它们原有的特性。

二、填空

1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要贴壁生长和悬浮生长两种，分别称为贴壁型细胞和悬浮型细胞。体外培养的动物细胞其生长方式以贴附生长为主。

2. 贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为成纤维细胞型、

上皮细胞型、游走细胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。

3. 细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是贴附生长、接触抑制和密度依赖性。

4. 培养细胞生命期可分为原代培养期、传代培养期、衰退期三个阶段。

三、问答题

1. 什么是培养细胞的一代生存期？培养细胞的一代生存期可分为哪几个阶段？各有何特点？

答：a，细胞的一代生存期指从细胞接种到下一次再传代接种的一段时间。

b，培养细胞的一代生存期分为潜伏期、指数生长期、停滞期三个阶段。

C，潜伏期：又分为悬浮期，细胞质回缩，胞体呈球形；贴壁期，细胞开始附着或贴附于底物表面上，并逐渐伸展；潜伏期，细胞可有运动活动，基本无增殖，少见分裂相。

指数生长期：是细胞一代中活动最好的时期，培养物中的细胞数量呈指数生长，在接种适宜的情况下，指数生长期持续一段时间后，随细胞数量不断增多，生长空间渐趋减少，最后细胞相互接触汇合成片。

停滞期：细胞数量达到饱和密度，细胞停止增殖，但仍有细胞代谢活动，接着培养液中营养渐趋耗尽，代谢产物积累，PH降低。

2. 培养细胞需要哪些营养？它需要在什么样的环境下生长？这些环境如何获得？

答：A.营养需要：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素、促生长因子及一些生长必须的钾、钠、铁等元素。

B.生存环境：培养用水充足，培养温度及PH适宜，气体条件及渗透压适宜，还有无毒

无菌无污染的培养环境。

C.环境的获得：

3. 培养细胞需要哪些主要仪器？在使用时需要注意什么？

第三章动物细胞培养的准备工作

一、填空题

1、玻璃器皿的清洗程序主要包括＿浸泡＿、刷洗、＿浸酸、和＿＿冲洗。

2、目前大多数实验室采用的浸酸酸液的主要成分是＿浓硫酸＿＿和重鉻酸钾＿＿。

3、细胞培养用品的包装主要包括＿局部包装＿＿和＿＿＿全包装＿＿两种类型，如前者适宜的器皿有＿烧杯＿＿、＿容量瓶＿＿等，后者适宜的器皿有＿＿注射器、＿胶塞＿＿等。细胞培养中塑料制品中主要采用＿射线消毒＿方法进行灭菌，人工合成培养基和酶液采用＿＿＿过滤消毒＿＿＿方式进行灭菌。

细胞培养实验前实验者的皮肤主要用＿＿75%的酒精＿或＿＿新洁尔灭＿＿＿来消毒灭菌，实验室地面采用＿来苏儿＿＿定期拖洗消毒，培养室空气可以用紫外线＿或＿乳酸蒸汽＿＿消毒。

BSS中文名称为＿＿平衡盐溶液＿，具有维持渗透压、稳定PH等作用，常用作洗涤组织和细胞以及配置各种培养用液的基础溶液。

动物细胞培养基中常用的消化液有＿胰蛋白酶消化液＿、＿胶原酶消化液和＿EDTA—2Na ＿三种，常在＿贴附型细胞原代＿培养或＿传代培养中用来离散细胞。