DNA限制性内切酶——酶切Buffer组分及其活性

DNA限制性内切酶——酶切Buffer组分及其活性
TaKaRa公司，为了方便限制酶的统一使用，采用了通用缓冲液(Universal Buffer) 测定限制酶活性的体系(5种通用缓冲液中，用标注的)，以此时的活性值作为100%。

并把在其它通用缓冲液中的相对活性表示如下表。

有( ) 标记的是易受Star活性影响的缓冲液，为了避免Star活性的影响，希望尽量使用或标注的缓冲液。

每种限制酶都有其自身的基本缓冲液(Basal Buffer)，其中AccⅢ、BalⅠ、BcnⅠ、BglⅠ、Bpu1102Ⅰ、Cfr10Ⅰ、Eam1105Ⅰ、Eco52Ⅰ、NruⅠ、Psh BⅠ、Sna BⅠ、SspⅠ、TaqⅠ、VpaK11B Ⅰ(共14种)由于没有十分合适的通用缓冲液，只能使用基本缓冲液(Basal Buffer)。

各种限制酶的基本缓冲液组成不同，相互之间不能通用。

各种限制酶在基本缓冲液中的相对活性也被列于下表，供参考。

限制酶在各种缓冲液中的相对活性
附带·活性测定用Buffer 推荐使用的Buffer
*1+0.01%BSA→100%:Afl II, Aor13H I, Eco O65 I, Fok I, Hin1 I, Mun I, Nco I, Pvu I, Sse8387 I, Xba I *2 +0.01%BSA+0.01%Triton X-100→100%:Not I
*3不加BSA
按Universal Buffer分类的限制酶
各Universal Buffer的组成
■ 使用注意事项
10×Buffer都为10倍浓度的缓冲液。

此外，10×T溶液中不含BSA，在使用时将BSA添加进去，使最终浓度为0.01%，有些限制酶(带有*1或*2标记)的反应体系中需加BSA或Triton X-100，添附的溶液是10倍浓度(0.1%) 的液体，使用时，请在反应体系中添加1/10量进行反应。

■ 保存
-20℃
反应停止液组份表
(10 × Loading Buffer)
1%SDS
60%Glycerol
0.05%Bromophenol
Blue
■ 使用方法
本公司的酶包装中全部附带有反应停止液。

使用时请添加反应液量的1/10，即可停止反应，进行电泳。

-20℃保存时，会出现SDS 沉淀，请于温水浴中溶解后使用。

在室温下保存时，SDS有时也会出现沉淀，此时同样请于温水浴中将其溶解后使用。

■ 保存
开封后室温保存。