转基因大豆定性检测方法介绍详解
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转基因大豆定性检测方法介绍
1、检测样品：
来自百度文库
豆粕，编号：sample 1、sample 2、sample 3、 sample 4
2、核酸提取： 各取5g样品，分别用研钵研磨至粉末状，再各取 0.5g作为实验材料，使用试剂盒提取基因组DNA（结果 见图1）。
3、检测方法: 转基因大豆定性PCR检测方法
图1 样品提取基因组DNA电泳图 Lane1: Sample 1 Lane3: Sample 3 M: λ-HindIII digest Lane2: Lane4: Sample 2 Sample 4
内源基因： Actin蛋白基因 1.4 反应体系及反应条件： 反应体系：GM-Soybean PCR Mixture 1: GM-Soybean PCR Mixture 2: 样品DNA（约50ng） or TEST template for GM-Soybean or dH2O 1 μI 20μI 5 μI 570bp 225bp
dH2O
24 μI
50μI
反应条件：
94℃ 94℃ 5min 30sec
60℃
72℃
72℃ 1、5 检测结果
30sec
1min
10min
40Cycles
Lane 1为未添加Template 的Negative Control;Lane2-6使用了各种 GMO混入率的商品化的对照样品；Lane7使用了试剂盒配备的TEST template for GM-soybean ，目的为检测试剂性能，扩增的两个目的 片段分别为1000bp（由重组基因引物扩增得到）及700bp（由内源基 因引物扩增得到）；Lane8-11为4个送检样品。
1、转基因大豆定性PCR检测方法 1、1 原理 采用PCR法，在同一个反应体系中同时加入扩增 Roundup Ready（CP4 EPSPS）大豆重组基因和内 源基因（Actin 蛋白基因）的引物，通过重组基因的是 否被扩增来判断样品是否为转基因大豆，通过内源基因 是否被扩增来监控PCR反应是否正常进行，从而防止 假阴性的结果。 此检测方法操作简单、成本低，可以对转基因大豆 进行定性分析，经大量实验结果证明，此方法的 GMO(genetically modified organism，转基因生物)混入率的检出界限 为0.1%。
Upper signal: GMO
Lower signal： Control
Lane M:100bp DNA Ladder Marker Lane 2: Non GMO Soybean Control Lane 4: GMO Soybean Control 1% Lane 6: GMO Soybean Control 100% Lane 8: Sample 1 Lane 10: Sample 1
1.2 仪器及试剂
仪器： TaKaRa PCR Thermal Cycler DICE (TaKaRa Code:TP600) (TaKaRa 试剂： PCR Screening Kit for GM Soybean Ver.2.0 Code:DRR201A) 1.3 扩增基因及片断长度 重组基因 ： CP4 EPSPS
Lane 1:Negative Control Lane 3: GMO Soybean Control 0.1% Lane 5: GMO Soybean Control 5% Lane 7: Positive Control Lane 9: Sample 2 Lane 11: Sample 2
1.6 结果分析 对以上的电泳结果分析可知，Negative Control、 Positive Control以及各种GMO混入率的对照样品均可得到 正常结果，送检的4个样品中Sample1、Sample2、 Sample3检测出重组基因， Sample4为检测出重组基因， 说明Sample1、Sample2、Sample3为转基因大豆， Sample4为非转基因大豆或GMO混入率低于0.1%的检出界 限。
1、检测样品：
来自百度文库
豆粕，编号：sample 1、sample 2、sample 3、 sample 4
2、核酸提取： 各取5g样品，分别用研钵研磨至粉末状，再各取 0.5g作为实验材料，使用试剂盒提取基因组DNA（结果 见图1）。
3、检测方法: 转基因大豆定性PCR检测方法
图1 样品提取基因组DNA电泳图 Lane1: Sample 1 Lane3: Sample 3 M: λ-HindIII digest Lane2: Lane4: Sample 2 Sample 4
内源基因： Actin蛋白基因 1.4 反应体系及反应条件： 反应体系：GM-Soybean PCR Mixture 1: GM-Soybean PCR Mixture 2: 样品DNA（约50ng） or TEST template for GM-Soybean or dH2O 1 μI 20μI 5 μI 570bp 225bp
dH2O
24 μI
50μI
反应条件：
94℃ 94℃ 5min 30sec
60℃
72℃
72℃ 1、5 检测结果
30sec
1min
10min
40Cycles
Lane 1为未添加Template 的Negative Control;Lane2-6使用了各种 GMO混入率的商品化的对照样品；Lane7使用了试剂盒配备的TEST template for GM-soybean ，目的为检测试剂性能，扩增的两个目的 片段分别为1000bp（由重组基因引物扩增得到）及700bp（由内源基 因引物扩增得到）；Lane8-11为4个送检样品。
1、转基因大豆定性PCR检测方法 1、1 原理 采用PCR法，在同一个反应体系中同时加入扩增 Roundup Ready（CP4 EPSPS）大豆重组基因和内 源基因（Actin 蛋白基因）的引物，通过重组基因的是 否被扩增来判断样品是否为转基因大豆，通过内源基因 是否被扩增来监控PCR反应是否正常进行，从而防止 假阴性的结果。 此检测方法操作简单、成本低，可以对转基因大豆 进行定性分析，经大量实验结果证明，此方法的 GMO(genetically modified organism，转基因生物)混入率的检出界限 为0.1%。
Upper signal: GMO
Lower signal： Control
Lane M:100bp DNA Ladder Marker Lane 2: Non GMO Soybean Control Lane 4: GMO Soybean Control 1% Lane 6: GMO Soybean Control 100% Lane 8: Sample 1 Lane 10: Sample 1
1.2 仪器及试剂
仪器： TaKaRa PCR Thermal Cycler DICE (TaKaRa Code:TP600) (TaKaRa 试剂： PCR Screening Kit for GM Soybean Ver.2.0 Code:DRR201A) 1.3 扩增基因及片断长度 重组基因 ： CP4 EPSPS
Lane 1:Negative Control Lane 3: GMO Soybean Control 0.1% Lane 5: GMO Soybean Control 5% Lane 7: Positive Control Lane 9: Sample 2 Lane 11: Sample 2
1.6 结果分析 对以上的电泳结果分析可知，Negative Control、 Positive Control以及各种GMO混入率的对照样品均可得到 正常结果，送检的4个样品中Sample1、Sample2、 Sample3检测出重组基因， Sample4为检测出重组基因， 说明Sample1、Sample2、Sample3为转基因大豆， Sample4为非转基因大豆或GMO混入率低于0.1%的检出界 限。