肿瘤细胞中长春新碱的高效液相色谱法测定

肿瘤细胞中长春新碱的高效液相色谱法测定Ξ

黎丹戎 涂文升 李 力 唐东平 黄 薇

广西肿瘤防治研究所 南宁

提 要 长春新碱 为重要和常用抗肿瘤药物之一∀肿瘤细胞耐药性是导致化疗失败的主要原因∀为了筛选耐药细胞的逆转剂 建立了测定肿瘤细胞内 浓度的高效液相色谱法 色谱条件为 反相柱 ≅ 流动相 Ù Β Β ςÙς 流速 Ù 检测波长 ∀方法简单 快速 选择性好 在 ∗ Ù 范围内 浓度 峰高呈良好的线性关系 ρ 仪器灵敏度为 ∀所建立的方法适合于 的血药浓度测定及 在肿瘤细胞 组织中的代谢 分布 排泄 蓄积等研究∀

关键词 高效液相色谱法 长春新碱 肿瘤细胞

分类号 Ù

前言

肿瘤患者反复用药产生的耐药性 是治疗失败的重要原因∀研究如何克服耐药性是提高化疗效果的关键∀长春新碱 是常用的化疗药物 长期使用会产生耐药性 ∀因此 深入开展逆转多药抗药性 药物的实验和临床研究 探讨耐药机制 寻找疗效好 毒性低的逆转剂 是国内外十分活跃的课题 ∀监测细胞内的 浓度 可直接观察到细胞内对药物的摄入和外流量 从而筛选出耐药细胞的逆转剂∀为此 参照药品中 含量的检测方法 我们建立了一种检测肿瘤细胞内 浓度的高效液相色谱法∀

材料与方法

仪器 日本岛津 色谱仪 紫外检测器∀

药品 甲醇 磷酸氢二钾 磷酸均为分析纯 注射用硫酸长春新碱 广州明兴制药厂出品 批号 ∀

标准液 用流动相配成 Ù 备用∀

样品处理 培养卵巢上皮癌 和耐 的 Ù 两种细胞株于 孔培养板上 它们对 的半数致死量分别为 Ù 每孔 万个细胞 每株 孔 后 加入半数致死量 Λ 及各种逆转剂 再培养 ∀取 孔贴壁细胞 用生理盐水洗涤 ∗ 次后 取细胞外洗涤液 经浓缩处理 用本实验方法测定 直至无 吸收峰为止∀在所得细胞中加入蒸馏水 在 ε下冻存 反复冻融 次 离心 取上清液即为细胞内液供 分析∀

色谱条件 反相柱 ≅ 流动相 Ù Β Β ςÙς 流速 Ù 柱温 ε 检测波长 量程 数据处理机∀

计算 采用两点校正曲线法 也称绝对校正曲线法 以峰高定量∀取浓度不同的两种标准试样 分别测出标准 峰高和标准 峰高 经计算得校正系数∀所测组分含量为

校正系数 ≅峰高 校正系数

试样量

≅

而样品中 的含量 Ù细胞 为

ς Χ≅ Ù ς ≅细胞量

式中ς 为样品处理后总体积 ς 为注入 的样液体积 Χ为数据处理机显示ς体积含有 的量 ∀

结果

标准曲线 在上述的色谱条件下 用 Ù 标准液分别注入

第 卷第 期色 谱 年 月

Ξ本课题获广西壮族自治区科委攻关项目资助

本文收稿日期 修回日期

Λ 其含量分别为 ∀数

据处理机打出的相应峰高值为

Λ ∀结果浓度 峰高呈现出良好的线性关

系 标准曲线如图 所示

∀

图 标准曲线图

Φιγ ΧαλιβρατιονχυρϖεοφςΧΡβψΗΠΛΧ

重复性检测 在同一份阳性样品中 按本方

法检测 连续做 次平行试验 结果见表 ∀

分离效果 空白细胞色谱图见图 ∀ 出

峰时间为 峰形陡尖 对称 细胞中杂质峰不干扰测定 见图 ∀ 最低检出限为 标准曲线的线性范围为 ∗ 线性良好 ρ

∀

图 空白细胞色谱图

Φιγ Χηρο ατογρα οφβλανκχελλ

表 本法重复性检测结果

Ταβλε Ρεχοϖερψοφτηε ετηοδ

测定序号

τ Ù

峰高 Λ

均值

Χς

对于耐药细胞株 Ù 其细胞内的 的浓度未能检测到 若该株与环孢菌素 他莫

西芬 黄体酮共同培养后 均能检测到细胞内 的浓度 每微升细胞提取液中 的平均含量分别为

∀

图 肿瘤细胞中ςΧΡ 峰 色谱图

Φιγ Χηρο ατογρα οφςΧΡ εακ ιντυ ορχελλ

讨论

在确定流动相前 我们还分别对比了不同比

例的流动相的分离效果 例如选取磷酸盐缓冲液与甲醇的比例分别为 Β Β Β Β

∀我们发现 选择第一个组成时 杂质与主成分得

到较好的分离∀而随着水含量的增加 的出峰时间提前 不利于与杂质分离∀ 在所选的流动相中于 处有最强吸收∀

采用本方法测定了卵巢上皮癌细胞株 及 耐 药株与 共同孵育后

细胞中 的浓度∀结果发现 耐药株细胞内的

的浓度明显低于非耐药株∀而加入环孢菌素 他莫西芬及黄体酮等逆转剂后 细胞内 积

蓄明显提高∀

肿瘤细胞中 浓度的 检测方法

在国内尚未见文献报道∀本文建立的分析方法快速 灵敏 稳定 为临床研究 的耐药机制 寻找新的逆转剂提供了较好的方法∀

参考文献

徐积恩 药学进展 ∗

刘树人 张 雁 陆汉明等 中华医学杂志

∗

蔡 勇 刘向东 刘志强 浙江医科大学学报

∗

期 黎丹戎等 肿瘤细胞中长春新碱的高效液相色谱法测定

∆ετερ ινατιονοφςινχριστινιΣυλφασινΤυ ορΧελλσβψΗιγηΠερφορ ανχεΛιθυιδΧηρο ατογρα ηψ

ΓυανγξιΧανχερΙνστιτυτε Ναννινγ

Αβστραχτ ≅ Λ Ù Β ςÙς Ù Ù Ù

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卷