细胞生物学实验技术介绍(精)

Training Center for Laboratory Techniques of Life Sciences
生命科学实验教学中心
细胞生物学实验技术介绍
活细胞实时摄影（L源自文库ve Cell Real-Time Imaging)
活细胞实时摄影：把细胞培养在置于倒置 显微镜载物台上的培养皿中，维持细胞的 正常生理状态，用照相机定时记录细胞的 分裂过程、分裂结果和运动轨迹等。 活细胞实时摄影系统的组成：1)全自动倒 置荧光显微镜，2)细胞培养室（包括温度、 湿度和CO2控制系统)，3)高速高敏感冷 CCD照像机，4)全自动载物台，5)可驱动 显微镜及其外围设备的软件，6)高速、大 容量的计算机。 活细胞标记方法： 1) 活细 胞荧光染料如Hoechst 33342, Syto系列染料 （Molecular Probes)
2) 绿色荧光蛋白（GFP)及其各种突变体 蛋白如RFP、BFP、CFP和YFP是目前应用 最广的活细胞标记物 3) 量子点(Quantum dots)
活细胞实时摄影的优势： 1) 在细胞 整体水平，可以对细胞的运动状态 和轨迹进行追踪，对细胞的命运、 分裂过程及分裂结果进行跟踪记录； 2) 在亚细胞水平，能够观察细胞器 如线粒体、细胞核、内质网、高尔 基体和染色体等在细胞周期及细胞 执行生理功能中的动态变化； 3)在 分子水平，能够直接观察单个蛋白 质分子在细胞内的动态定位和代谢 过程（TIRMF单分子荧光检测)，追 踪细胞内蛋白质的合成、转运和降 解（ FRAP 荧光淬灭恢复检测 ) ，测 定蛋白质－蛋白质间的相互作用 （FRET荧光共振能量转移）。 活细胞实时摄影的关键：Keep cells HAPPY not just alive under microscope! 活细胞实时摄影记录 HeLa细胞正常有丝分 裂（a)和双核细胞形成 的4种途径(b-e)。所用 HeLa细胞是表达绿色 荧光蛋白和组蛋白H2B 融合蛋白的稳定细胞株， 因此细胞核和染色体在 荧光显微镜下呈绿色； 细胞轮廓以DIC （Differential interference contrast)显 示。图左上角数字表示 时间(小时:分 钟)(Qinghua Shi & RW King, Nature 437:10381042, 2005)