生物技术实验凝集反应

1
2
孕妇尿
正常尿
【注意事项】
1．试验所用诊断试剂用前应充分 摇匀，而且应在有效期内使用。
2．加样用的滴管及混匀用的牙签 不能共用。
3．加样不宜太多，玻片应始终保 持水平，以防两格之反应液相混。
【实验思考】
1．记录血型鉴定试验、乳胶妊娠诊断 试验的材料、方法及结果判定（可用图示 或表格方式表示）。
孕妇尿中绒毛膜促性腺激素（HCG）含量明显增 高。HCG与抗HCG抗体先作用后，再加入HCG致敏的乳 胶颗粒，不出现凝集反应，此为妊娠试验阳性；非 孕妇尿中HCG含量不足以消耗掉抗HCG抗体，抗体与 后加入的HCG致敏乳胶结合呈现凝集现象，则妊娠试 验阴性。
待测抗原
已知抗体
＋
特异 结合
NS
间接凝集抑制试验
B
抗B
3．用酒精棉签消毒被检者手指尖端，以采血针 刺破皮肤，稍加挤压，使血液流出。用另一载玻片 一端取适量血液加入抗抗A分型试剂，并混匀；用另 一端再取适量血液加入抗抗B分型试剂，并混匀。用 干棉签止血。
4．观察红细胞有无凝集发生。如有凝集，可见 红细胞凝集成块；无凝集，红细胞呈均匀分散。判 定结果后把玻片放入消毒液中。
结合
பைடு நூலகம்
凝集反应是一种定性的检测方法，也 可以进行半定量检测。由于凝集反应方法 简便，目前在临床检验中仍被广泛应用。
凝集反应可分为直接凝集反应和间接凝 集反应。
一、直接凝集反应
细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解 质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集， 称为直接凝集反应 。
常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。
2．直接凝集试验与间接凝集试验有何 不同？
3．在各凝集试验中都设有相应对照， 有何意义？若对照出现异常如何分析及解 决？
生物技术实验—凝集反应
免疫学教研室 刘平
凝集反应
【实验目的】 1．了解凝集反应的原理、基本类型及其
临床意义。 2．掌握玻片凝集实验、间接凝集实验的
实验方法和结果分析。
【概述】
在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗 原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集 块，称为凝集反应。
＋
电解质
抗原
特异性抗体 特异 抗原抗体复合物
无凝集颗粒
阳性
抗 原 抗 体 复 合 物 致敏颗粒
待测抗原
已知抗体
＋
无结合
NS
间接凝集抑制试验
有凝集颗粒
阴性
抗 原 抗 体 分 散 致敏颗粒
【实验材料】 1．妊娠诊断试剂盒：内含抗血清
（抗HCG）、乳胶抗原（HCG致敏） 各一支 2． 1号尿、 2号尿。 3．有格玻片和毛细吸管等。
【实验方法】
【实验原理】
人类ABO血型抗原主要有A和B两种，根 据红细胞表面这两种抗原的有无可把血型分 为四种。据此，将抗A和抗B抗体分别与待测 红细胞混合，抗A或（和）抗B抗体与红细胞 表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集， 据其凝集情况便可判定出受试者的血型。
ABO血型的划分
红细胞表面Ag
血清中Ab
A型
A
【实验结果】
二、间接凝集反应
将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小 的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关）， 然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质 存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集 反应。
根据载体的不同可将间接凝集反应分为： 间接血细胞凝集试验、间接乳胶凝集试验（及 间接乳胶凝集抑制试验）和金黄色葡萄球菌协 同凝集试验等。
原理 载体 可溶性抗原
致敏
致 敏 颗 粒
NS
凝 集 颗 粒
载体种类及其处理方法
红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一
般先醛化后应用。
聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学
活性基团的颗粒
间接凝集抑制试验——妊娠试验
【实验原理】
可溶性抗原致敏的乳胶颗粒与相应抗体作用可 使乳胶颗粒凝集，此为间接乳胶凝集试验。若使抗 体先与可溶性抗原作用，再加入该抗原致敏的乳胶 颗粒，则乳胶凝集被抑制，此为间接乳胶凝集抑制 试验。
玻片凝集试验——ABO血型鉴定
玻片凝集试验为定性试验，一般用 已知抗体作为诊断血清，与受检颗粒抗 原，如菌液或红细胞抗原各加一滴在玻 片上，混匀，数分钟后即可用肉眼观察 凝集结果，出现凝集颗粒的为阳性。
此法简便，快速，适用于从病人标 本中分离得到的菌种的诊断或分型，也 可用于红细胞ABO血型的鉴定。
抗B
B型
B
抗A
AB型
A、B
—、—
O型
—、—
抗A、抗B
【实验材料】
1．ABO血型鉴定试剂盒 内含抗A 分型试剂和抗B分型试剂各1支。
2．一次性采血针1枚、洁净玻片2 块、75％酒精、灭菌棉签。
【实验方法】 1．取洁净载玻片1块，并标记（如图）
A
2．将抗A、B分型试剂分别加 抗A 1滴于标记有A、B的玻片两侧。
1．在玻片的第1、第2内分别加1滴1号 尿、 2号尿。
2．每格内加入妊娠诊断试剂抗血清1 滴。轻轻摇动1~2 min使其充分混匀。
3．每格加入乳胶抗原1滴，轻轻摇动 玻片3~5 min后观察结果，记录各标本有无 凝集现象。
【实验结果】
孕妇尿格呈均匀浑浊乳状液，无凝集， 妊娠试验阳性；正常尿格出现白色细小凝集 物，随时间延长凝集物变成小块状，妊娠试 验阴性。待检尿若为乳状液，妊娠试验阳性； 若出现凝集，则妊娠试验阴性。