菠菜中色素的提取与分离
实验2-菠菜中色素的提取和分离
实验2■菠菜中色素的提取和分离实验2菠菜中色素的提取和分离扬州大学化学化工学院张磊091301223一.实验目的：1 •了解分离与提纯过程在科学研究和生产生活中的应用；2.掌握分离与提纯实验设计的一般思路和方法;3.掌握菠菜中色素提取的原理，步骤和影响因素；二•实验原理：1.叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂中，所以用石油醚、乙醇等能提取色素。
2.本实验选用的是吸附色谱，氧化铝作为吸附剂（极性），色素提取液为吸附液，色素提取液中各成分极性大小为：叶绿素 b （黄绿色）＞叶绿素a （蓝绿色）＞叶黄素（黄色）＞3■类胡萝卜素（橙色）。
3.柱层析法的分离原理是根据物质在氧化铝上的吸附力不同而使各组分分离。
一般情况下极性较大的物质易被吸附，极性较弱的物质不易被吸附，所以由上到下为：叶绿素 b （黄绿色），叶绿素a （蓝绿色），叶黄素（黄色），伕类胡萝卜素（橙色）。
三、实验材料：仪器：研钵、分液漏斗、层析柱（20 x 10 cm），表面皿，普通漏斗，量筒试剂：石油醚、乙醇（95%）、菠菜叶、丙酮（化学纯）、中性氧化铝，无水硫酸钠四、实验步骤与内容【探究：菠菜（或青菜）的I I处理方式】（1）小组讨论处理菠菜的各种方式，然后按照“手撕”，“划几刀，再手撕”，“剪成丁状”，“剪碎后稍加研磨”，“研磨成浆”共五种方式分为五组进行实验，最后确定控制菠菜叶取25克，加入有机溶剂15mL （9mL石油醚+6mL乙醚），浸泡时间取25min为统一条件；（2）开始分组实验，各自处理好各组的菠菜，放置在烧杯中，加入15mL有机溶剂并盖上表面皿浸泡25min。
（3）在浸泡的时间内开始装柱，首先在滴管下口装上橡皮管并夹上弹簧夹（夹紧），在管的出口处放入一小撮棉花，在棉花上放置已剪好的和滴管内径一般大小的圆形滤纸，然后用普通漏斗往里面装入中性氧化铝，最后在氧化铝上再加上和滴管内径一般大小的圆形滤纸，夹在铁架台上备用。
菠菜色素的提取和分离实验报告
菠菜色素的提取和分离实验报告
一、实验目的：
本次实验的主要目的是学习和掌握菠菜色素的提取和分离技术，了解菠菜中色素的提取和分离原理以及实验操作过程。
二、实验方法：
1、制备样品：将新鲜的菠菜叶片洗净晾干，切碎成小块备用；
2、提取菠菜色素：将切碎的菠菜叶片加入适量无水乙醇，研
磨成泥状物，过滤后取得浸提液；
3、进一步提取：将浸提液过滤并再次提取，过滤得到过滤液；
4、分离：将过滤液使用氯仿进行分离，水相和氯仿相层的色
素分离；
5、测定：将得到的色素溶于适量乙醇，测定菠菜色素的吸光度。
三、实验结果：
经过提取和分离，得到了深绿色的液体，与纯菠菜色素溶液比
较后发现两者颜色相似。
测定得到吸光度为0.54。
四、实验分析：
本次实验成功提取和分离了菠菜色素，并得到了较为准确的测定值。
在实验中，氯仿和无水乙醇是常用的有机溶剂，主要是因为在这些溶剂中菠菜色素的溶解度较高。
但是，在实验操作过程中需要注意保持实验环境的卫生和安全，氯仿是一种易挥发的有机物，需要注意防火和防烟。
五、实验结论：
通过本次实验，我们成功地提取和分离了菠菜色素，并且得到了较为准确的测定值。
同时，我们也了解了菠菜中色素的提取和分离原理以及实验操作过程。
本次实验的成功对于今后相关实验研究以及实际应用具有一定的指导意义。
菠菜色素的提取和分离实验报告
菠菜色素的提取和分离实验报告菠菜色素的提取和分离实验报告引言：菠菜是一种常见的绿叶蔬菜，富含多种营养物质，其中包括一种被称为菠菜色素的成分。
菠菜色素是一类天然的色素，具有良好的生物活性和抗氧化性质。
本实验旨在通过提取和分离的方法，研究菠菜色素的性质和应用。
实验材料和方法：材料：新鲜菠菜叶片、无水乙醇、丙酮、石油醚、二氯甲烷、硅胶G柱、色谱柱、色谱试纸等。
方法：1. 取适量新鲜菠菜叶片，洗净并切碎成细末状。
2. 将菠菜末置于研钵中，加入适量无水乙醇，浸泡30分钟，搅拌均匀。
3. 将菠菜浸提液过滤，收集滤液。
4. 取少量滤液，加入石油醚，振荡混合，使菠菜色素溶于石油醚中。
5. 将石油醚层收集，加入少量无水乙醇，使溶液变为淡绿色。
6. 将淡绿色溶液倒入色谱柱中，以无水乙醇为洗脱剂，收集洗脱液。
7. 将洗脱液浓缩，得到菠菜色素。
实验结果和讨论：通过以上实验步骤，我们成功地从菠菜中提取和分离出了菠菜色素。
在实验过程中，我们使用了无水乙醇作为提取剂，因为乙醇能够有效溶解菠菜中的色素成分。
同时，我们使用石油醚作为分离剂，因为石油醚能够与菠菜色素发生亲和作用，使其溶于石油醚中。
在分离过程中，我们使用了色谱柱和色谱试纸进行分离和检测。
色谱柱是一种常见的分离工具，通过其内部填充的固定相材料，能够将混合物中的成分按照其亲和性和分子大小进行分离。
我们选择了硅胶G柱作为固定相材料，因为硅胶G柱对菠菜色素具有较好的亲和性。
通过使用无水乙醇作为洗脱剂，我们成功地将菠菜色素从硅胶G柱中洗脱出来。
在实验中，我们观察到菠菜色素呈现淡绿色。
这是因为菠菜色素主要由叶绿素和类胡萝卜素等成分组成，这些成分赋予了菠菜独特的颜色。
叶绿素是一种绿色的色素，具有光合作用的功能。
类胡萝卜素则是一类黄、橙、红等颜色的色素，具有抗氧化和免疫调节等作用。
菠菜色素不仅在食品工业中有广泛应用，还在医药和化妆品等领域发挥着重要作用。
菠菜色素富含抗氧化物质，能够有效清除自由基，延缓衰老和预防疾病。
菠菜中色素的提取分离和鉴定（有机化学实验）[终稿]
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菠菜中的色素提取、分离及鉴定一、实验目的1.进一步熟悉和掌握薄层色谱的原理及应用2.了解菠菜中主要色素的基本性质，通过菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法及原理3.掌握用紫外光谱和荧光光谱鉴别菠菜中色素的原理及方法二、菠菜中的色素简介菠菜叶中富含多种色素成分,如叶绿素（绿色）、胡萝卜素（橙黄色）和叶黄素（黄色）等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素 a(C 55 H 72O 5N 4Mg) 和叶绿素 b(C 55H 7O 6N 4Mg)，结构见图1。
二者差别仅是 a 中一个甲基被 b 中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a 的含量通常是b 的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但分子中大的烷基结构使它易溶于丙酮,乙醇,乙醚,石油醚等有机溶剂。
胡萝卜素（ C 40H 56 ）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即 α-, β - 和γ - 胡萝卜素，其中β - 异构体含量最多，也最重要。
在生物体内，β - 体受酶催化氧化即形成维生素 A 。
目前β - 胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素 A 使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（ C40H56O2 ）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与β - 胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
根据这些色素在有机溶剂中的溶解性,可将它们提取出来。
N N NNH 3CCHCH 2RCH 2CH 3CH 3H 3C OCO 2CH 3CH 2CH 2OOCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3Mg叶绿素a 和叶绿素b 的结构（叶绿素a ：R=CH 3， 叶绿素b ：R=CHO ）H 3C CH 3RCH 3H 3CRH 3CCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3β-胡萝卜素和叶黄素的结构（β-胡萝卜素:R =H ， 叶黄素: R = OH ）菠菜中各色素的理化性质绿色植物中的叶绿体色素在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。
菠菜叶中色素的提取实验报告
菠菜叶中色素的提取实验报告一、实验目的1、了解菠菜叶中所含色素的种类和化学性质。
2、掌握从菠菜叶中提取和分离色素的实验方法。
3、学习使用分光光度计测定色素溶液的吸光度。
二、实验原理菠菜叶中含有多种色素，如叶绿素 a、叶绿素 b、叶黄素和胡萝卜素等。
这些色素在有机溶剂中的溶解度不同，因此可以通过萃取的方法将它们分离出来。
叶绿素 a 和叶绿素 b 为吡咯衍生物，可溶于有机溶剂，如乙醇、丙酮等。
叶绿素 a 为蓝绿色，叶绿素 b 为黄绿色。
叶黄素和胡萝卜素属于类胡萝卜素，叶黄素为黄色，胡萝卜素为橙黄色，它们也能溶于有机溶剂。
根据不同色素在层析液中的溶解度不同，在层析过程中，溶解度大的色素随层析液在滤纸上扩散得快；溶解度小的色素扩散得慢，从而将不同的色素分离开来。
三、实验材料与仪器1、材料：新鲜菠菜叶2、仪器：研钵、漏斗、玻璃棒、分液漏斗、容量瓶、分光光度计、滤纸、脱脂棉等。
3、试剂：无水乙醇、石油醚、丙酮、层析液（石油醚：丙酮＝9:1）四、实验步骤1、提取色素称取 5g 新鲜菠菜叶，剪碎后放入研钵中，加入 5mL 无水乙醇、少许碳酸钙和石英砂，充分研磨成匀浆。
将研磨好的匀浆用漏斗过滤到分液漏斗中，用 5mL 无水乙醇冲洗研钵和漏斗，将滤液合并到分液漏斗中。
轻轻振摇分液漏斗，静置分层，放出下层的水相，保留有机相。
2、制备色素溶液将有机相转移到容量瓶中，用无水乙醇定容至 25mL，得到色素提取液。
3、色素的分离取一块干燥的滤纸，剪成 15cm×3cm 的长条，在一端剪去两角，在距离剪角一端 1cm 处用铅笔轻轻画一条横线。
用毛细吸管吸取少量色素提取液，在铅笔线处点样，每次点样后吹干，重复多次，使点样处形成一条细而直的色素线。
将点样好的滤纸放入装有层析液的层析缸中，层析液液面不能超过滤纸的铅笔线。
盖上盖子，进行层析。
当层析液前沿接近滤纸的上端边缘时，取出滤纸，用铅笔标记出色素带的位置。
4、色素的鉴定用分光光度计分别测定叶绿素 a、叶绿素 b、叶黄素和胡萝卜素溶液在不同波长下的吸光度，绘制吸光度波长曲线，确定最大吸收波长。
色素提取和分离实验报告
色素提取和分离实验报告色素提取和分离实验报告引言：色素是一类广泛存在于自然界中的有机化合物，具有丰富的颜色和多样的功能。
色素提取和分离是一项重要的实验技术，可以帮助我们深入了解色素的性质和应用。
本实验旨在通过提取和分离植物中的色素，探究其在不同溶剂中的溶解性和分离效果。
实验材料和方法：材料：鲜菠菜叶片、无水乙醇、丙酮、二氯甲烷、石油醚、氯化钠溶液、滤纸、试管等。
方法：1. 将鲜菠菜叶片切碎，放入试管中。
2. 加入适量的无水乙醇，用玻璃棒搅拌均匀。
3. 将悬浊液过滤，收集滤液。
4. 将滤液分成几份，分别加入丙酮、二氯甲烷和石油醚中，摇匀。
5. 观察不同溶剂中的色素溶解情况和分离效果。
结果和讨论：通过实验观察和记录，我们得到了以下结果和结论：1. 无水乙醇提取：将鲜菠菜叶片与无水乙醇混合后，溶液呈现出深绿色。
这是因为无水乙醇可以有效提取鲜菠菜叶片中的叶绿素，叶绿素是一种绿色的植物色素。
2. 不同溶剂中的色素溶解情况：在实验中，我们用丙酮、二氯甲烷和石油醚分别与提取得到的无水乙醇溶液混合，并观察其溶解情况。
结果显示，丙酮溶液呈现出深绿色，二氯甲烷溶液呈现出橙黄色，而石油醚溶液呈现出淡黄色。
这说明不同溶剂对色素的溶解性有所差异。
3. 色素的分离效果：在实验中，我们通过观察不同溶剂中的色素溶液，发现色素在不同溶剂中有不同的分离效果。
丙酮溶液中的色素分离效果最好，可以清晰地观察到绿色和黄色两个色带。
而二氯甲烷溶液中的色素分离效果较差，只能看到一个橙黄色的色带。
石油醚溶液中的色素分离效果最差，只能观察到一个淡黄色的色带。
这说明不同溶剂对色素的分离效果也有所差异。
结论：通过本实验，我们得出了以下结论：1. 无水乙醇可以有效提取鲜菠菜叶片中的叶绿素。
2. 不同溶剂对色素的溶解性有所差异，丙酮溶液中的色素溶解性最好。
3. 不同溶剂对色素的分离效果也有所差异，丙酮溶液中的色素分离效果最好。
实验的局限性和改进方向：本实验中我们只使用了鲜菠菜叶片作为色素的来源，未涉及其他植物材料。
菠菜色素的提取与分离(实验方案)
菠菜色素的提取与分离(实验方案)
菠菜色素是一种天然的色素，在食品、药品和化妆品等领域得到广泛应用。
本实验旨在通过提取和分离菠菜中的色素，探索其化学结构和性质。
实验步骤：
1.新鲜的菠菜叶子切碎后加入乙醇中，浸泡过夜。
2.过滤得到菠菜浸液，加5%的NaCl，搅拌均匀，沉淀后过滤，收集菠菜蛋白，保留上清液。
3.将上清液进行浓缩，得到浓缩液。
4.将浓缩液加入正己烷中，振荡后离心，得到两层液体，上层为绿色菠菜色素，下层为无色的正己烷。
5.倒出上层菠菜色素液，用NaOH溶液调整其PH值，得到纯净的菠菜色素。
实验原理：
菠菜色素是一种叶绿素和类胡萝卜素的混合物，其中叶绿素是绿色的，未成熟的植物中含量较高，而类胡萝卜素是黄色的，成熟的植物中含量较高。
为了提取出纯净的菠菜色素，需要将其与其他杂质分离开来。
在实验中，我们选择了乙醇作为提取菠菜中色素的溶剂，乙醇对叶绿素和类胡萝卜素有较好的溶解作用。
随着浸泡时间的延长，色素的溶解度不断增加。
在分离紫胡萝卜素和叶绿素时，利用了两种色素溶解度不同的特性。
正己烷是一种非极性溶剂，对叶绿素有良好的溶解度，而对紫胡萝卜素的溶解度较差。
因此，在将浓缩菠菜色素液加入正己烷中时，不同色素会分层，方便分离纯净的菠菜色素。
实验注意事项：
1.实验中使用的器材和试剂要洁净干燥，避免杂质污染。
2.提取菠菜中的色素时，要控制乙醇的浓度和浸泡时间，避免色素的损失。
3.在调整菠菜色素液的PH值时，要逐渐加入NaOH溶液，避免PH值过高导致色素分解。
4.实验过程中如有任何异常情况，应及时停止实验并处理。
叶绿体色素的提取与分离实验
3、用纸层析法将色素进行分离，在滤纸条上出现最宽旳一 条色素带旳颜色是（ ） A、橙黄色 B、黄色 C、蓝绿色 D、黄绿色
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能旳色素和构造
（一）捕获光能旳色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占1/4
吸收可见 旳太阳光
类胡萝卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素旳提取和分离试验中在滤纸条上扩散速度 最快旳色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色旳溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表达加，“—”表达不加。
处理
二氧化硅（少许） 碳酸钙（少许）
95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（1）A处理得到旳溶液颜色是 黄绿色 ，原因是__叶__绿__素_被__破__坏__________
（6）色素分离旳成果：相邻色素带间距最宽旳是 他们旳颜色是 橙黄色 和 黄色 ，主要吸收 蓝紫
胡萝卜素 和 叶黄素 ， 光。
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
菠菜色素提取实验报告
菠菜中色素的提取和色素分离绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg))，差别仅是a中一个甲基被b中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂，也是食用的绿色色素，可用于糕点、饮料水等中，添加于胶姆糖中还可消除口臭。
植物中a的含量通常是b的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于石油醚等一些非极性溶剂。
胡萝卜素（C40H56）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体α—，β—,和γ—胡萝卜素，其中β—异构体含量最多，也最重要。
生长期较长的绿色植物中，异构体中β—的含量多达90％。
β—具有维生素A的生理活性，其结构是两分子维生素A在链端失去两分子水结合而成。
生物体内，β—体受酶催化氧化即形成维生素A。
目前，β—体可作为维生素A使用，也可作为食品工业的色素，β一胡萝卜素还有防癌功能。
叶黄素（C40H56O2）是胡萝卜素的羟基衍生物，在光合作用中能起收集光能的作用。
在绿叶中通常是胡萝卜素的两倍。
较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
由此可见，叶绿素等天然色素有广泛的用途，对于色素的提取与分离就显得很重要了．本实验就提取和分离做了相关的研究。
1 实验部分1.1 仪器与试剂仪器：研钵、分液漏斗、显微载玻片、毛细管、层析柱(20×10 cm)、UV-240紫外分光光度计试剂：石油醚、乙醇(95%)、菠菜叶、丙酮(化学纯)、乙酸乙酯(化学纯)、无水硫酸钠、硅胶G、中性氧化铝(150目～160目)1.2 提取与分离1.2.1 浸泡法提取色素在研钵中放入20 g新鲜的菠菜叶，加入20 mL3：2(体积比)石油醚—乙醇混合液，适当研磨(不要研成糊状，否则会给分离造成困难)，用倾析法将提取液转移到分液漏斗中，每次用10ml水洗涤两次,以除去萃取液中的乙醇。
菠菜中色素的提取分离和鉴定(有机化学实验)
菠菜中的色素提取、分离及鉴定一、实验目的1.进一步熟悉和掌握薄层色谱的原理及应用2.了解菠菜中主要色素的基本性质，通过菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法及原理3.掌握用紫外光谱和荧光光谱鉴别菠菜中色素的原理及方法二、菠菜中的色素简介菠菜叶中富含多种色素成分,如叶绿素（绿色）、胡萝卜素（橙黄色）和叶黄素（黄色）等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素 a(C 55 H 72O 5N 4Mg) 和叶绿素 b(C 55H 7O 6N 4Mg)，结构见图1。
二者差别仅是 a 中一个甲基被 b 中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a 的含量通常是b 的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但分子中大的烷基结构使它易溶于丙酮,乙醇,乙醚,石油醚等有机溶剂。
胡萝卜素（ C 40H 56 ）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即 α-, β - 和γ - 胡萝卜素，其中β - 异构体含量最多，也最重要。
在生物体内，β - 体受酶催化氧化即形成维生素 A 。
目前β - 胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素 A 使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（ C40H56O2 ）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与β - 胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
根据这些色素在有机溶剂中的溶解性,可将它们提取出来。
N N NNH 3CCHCH 2RCH 2CH 3CH 3H 3C OCO 2CH 3CH 2CH 2OOCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3Mg叶绿素a 和叶绿素b 的结构（叶绿素a ：R=CH 3， 叶绿素b ：R=CHO ）H 3C CH 3RCH 3H 3CRH 3CCH 3CH 3CH 3CH 3CH 3β-胡萝卜素和叶黄素的结构（β-胡萝卜素:R =H ， 叶黄素: R = OH ） 菠菜中各色素的理化性质绿色植物中的叶绿体色素在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。
菠菜中色素的提取
菠菜中色素的提取及分离赵涛食品科学一实验目的1 通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法2 了解薄层色谱的基本原理，掌握薄层色谱的基本操作3 了解柱层析的基本原理，掌握柱层析的基本操作二实验原理菠菜的叶片中含有叶绿素（包括叶绿素a和叶绿素b）、叶黄素及胡萝卜素等天然色素。
叶绿素是绿色植物的主要色素，分子由脱镁叶绿素母环、叶绿酸、叶绿醇、甲醇、二价镁离子等部分构成。
高等植物中有两种叶绿素即叶绿素a和叶绿素b 共存，它们的含量约3：1，叶绿素a为一蓝黑色固体粉末，在乙醇溶液中为蓝绿色，并有深红色荧光，而叶绿素b为暗绿色固体粉末，其乙醇溶液为黄绿色，并有红色荧光。
叶绿素不溶于水，易溶于有机溶剂，常可用极性有机溶剂（例如丙酮、乙醇、乙酸乙酯等）从植物匀浆中提取它。
叶绿素存在于植物细胞的叶绿体中，与类胡萝卜素、类脂物质及脂蛋白复合在一起，分布在叶绿体内的蝶形体的片层膜上。
叶绿素a和叶绿素b及衍生物在600~700mm（红光）和400~500mm （蓝光）有尖锐的吸收峰，可借助这一特性来鉴定它们。
游离叶绿素很不稳定，对光和热都较敏感。
胡萝卜素是一种橙色的天然色素，属于四萜，为一长链共轭多烯，有α、β、γ三种异构体，，其中β异构体最多。
在植物组织中，它们可能以固态微粒或者以与蛋白质、脂质、或者糖类复合的形式存在，特别是在有色体中存在。
其为典型的脂溶性色素，易溶于石油醚，、乙醚而难溶于乙醇。
如遇氧化条件，易受氧化和光化学氧化形成加氧产物或者进一步分解为更小的分子，在受强热时可分解为多种挥发性小分子化合物。
叶黄素是一种黄色色素，与叶绿素同存在与植物体内，是胡萝卜素的羟基衍生物，较易溶于乙醇，在石油醚中溶解度较小。
色素所呈现的颜色和在叶绿体中的含量见下表：高等植物体内叶绿体色素的种类、颜色及含量比例项目叶绿素类胡萝卜素叶绿素a 叶绿素b β-胡萝卜素叶黄素颜色蓝绿色黄绿色橙黄色黄叶绿体内各色素的含量56 19 17 8色谱法的基本原理是利用混合物中各组分在某一物质中的吸附或溶解性能的不同，或和其它亲和作用性能的差异，使混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附或分配等作用，从而将各组份分开。
菠菜色素的提取和分离实验报告
菠菜色素的提取和分离实验报告菠菜色素的提取和分离实验报告引言：菠菜是一种常见的食材，它不仅味道鲜美，而且富含多种营养物质。
其中，菠菜叶中的色素成分具有重要的生物学和营养学意义。
本实验旨在通过提取和分离菠菜叶中的色素，探究其组成和结构。
一、实验材料与方法：1. 实验材料：菠菜叶、无水乙醇、正己烷、醋酸乙酯、石油醚、氯仿、硅胶薄层色谱板。
2. 实验步骤：（1）菠菜叶的提取：将菠菜叶洗净并切碎，加入适量的无水乙醇中，浸泡30分钟，使色素充分溶解。
然后用滤纸过滤，收集菠菜叶提取液。
（2）色素的分离：将菠菜叶提取液与正己烷进行液液分配，重复3次，使色素分配到正己烷层中。
然后将正己烷层收集，蒸发溶剂，得到色素提取物。
（3）色素的纯化：将色素提取物溶解于醋酸乙酯中，进行液液分配，重复3次，使色素分配到醋酸乙酯层中。
然后将醋酸乙酯层收集，蒸发溶剂，得到纯化后的色素。
（4）色素的分离：将纯化后的色素溶解于石油醚中，进行液液分配，重复3次，使色素分配到石油醚层中。
然后将石油醚层收集，蒸发溶剂，得到分离后的色素。
（5）色素的鉴定：将分离后的色素溶解于氯仿中，进行薄层色谱分析。
将硅胶薄层色谱板浸泡于氯仿中，然后将色素溶液滴于色谱板上，放入色谱槽中，进行上升式开发。
开发完毕后，用紫外灯照射，观察色谱板上的色素带。
二、实验结果与分析：经过提取、分离和纯化，成功地从菠菜叶中提取到了色素。
通过薄层色谱分析，我们观察到了色谱板上的色素带，根据色素带的位置和颜色，可以初步判断菠菜叶中含有叶绿素、类胡萝卜素等多种色素成分。
三、实验总结与思考：通过本次实验，我们成功地提取和分离了菠菜叶中的色素。
然而，我们只能初步判断色素成分的种类，对于具体的结构和含量还需要进一步的分析和研究。
此外，本实验采用的是传统的提取和分离方法，还可以尝试其他更先进的技术，如高效液相色谱等，以提高分离效果和准确性。
结语：菠菜色素的提取和分离实验为我们了解菠菜叶中的色素成分提供了基础。
菠菜色素的提取与分离
菠菜色素的提取与分离
实验材料：
1.菠菜叶：新鲜的菠菜叶作为原料。
2.无水乙醇：用于菠菜色素的提取。
3.正己烷：用于菠菜色素的分离。
实验步骤：
1.准备新鲜的菠菜叶，将其洗净并切碎成小段。
2.将切碎的菠菜叶放入一个绞肉机或搅拌机中，加入适量的无水乙醇。
搅拌均匀，使菠菜叶完全浸泡在乙醇中。
3.将浸泡好的菠菜浆放入玻璃烧杯中，放置在室温下浸泡一段时间
（通常为2-3小时），以充分提取菠菜色素。
4.将浸泡好的菠菜浆过滤，将提取得到的菠菜色素溶液收集起来，并
将其保存在一个干净的容器中。
5.取一定量的菠菜色素溶液，并用正己烷进行萃取。
将菠菜色素溶液
与正己烷按照1:1的比例混合，充分摇匀。
6.静置一段时间后，菠菜色素会分为两层，上层是正己烷层，下层是
菠菜色素层。
分离这两层，可以使用分液漏斗或者一些特殊的仪器设备来
完成。
7.分离得到的菠菜色素层即为所需的产品。
可以将其保存在一个干净
的容器中，或者对菠菜色素进行进一步的实验研究。
实验注意事项：
1.在实验过程中，应注意安全操作，避免乙醇和正己烷的接触和吸入。
2.密闭容器中的溶剂切勿满溢，以免发生外溢和溅出。
3.实验前应检查实验器材的完整性和密封性，确保实验过程的准确性
和安全性。
4.菠菜叶应该选择新鲜、无病虫害的叶片，并保持充分的洗净。
5.实验操作时要注意从装置的出口处向连接装置的玻璃瓶中逸出瓶道
的紫外光辐射。
6.实验后要及时清洗实验仪器和容器，避免菠菜色素的残留和污染。
有机化学实验课件24菠菜色素的提取和色素分离
讲义中的表格更改如下：
色素名称 颜色 含量 分子量 溶解度 扩散速度 位置
➢思考题
1.研磨时要使叶绿素能够提取出来，要破坏多少 层膜？ 2.滤纸剪角的目的是什么？ 3.到了秋天叶色变黄、变红的原因是什么？
注意：收集好的研磨液及时用 棉塞塞紧。
➢实验步骤
分离：
铅笔画线，剪角
用毛细吸管吸取少量滤液 ，画线，重复2-3次
烧杯中倒入层析液（不要没过滤液线），将滤纸条轻 轻插入，培养皿盖住小烧杯Βιβλιοθήκη ➢实验结果➢实验报告
（西安交通大学实验报告纸） （写清姓名、班级、实验名称、日期等） 一、实验目的 二、实验原理 三、实验记录 1.讲义中的表格（改动见下页） 2.画图 四、讨论及思考题 1.谈谈你在实验过程中的成功经验，或失败的教训 2.思考题
叶绿体中 的色素
➢实验步骤
提取：
用天平称取5克菠菜叶，剪碎
研钵
注意防止丙酮挥发。
• 二氧化硅：为 了使研磨充分；
• 碳酸钙：保护 色素免受破坏；
少许二氧化硅、碳酸钙+5ml丙酮
迅速、充分地进行研磨
取单层尼龙布折叠，放入漏斗， 把漏斗放入试管，架到试管架上
• 丙酮：色素的 溶剂。
将研磨好的菠菜叶加到漏斗中过滤
菠菜色素的提取和色素分离
➢实验目的
掌握提取和分离叶绿体色素的方法，探究叶绿体中 色素的种类。
➢实验材料
➢ 菠菜
➢实验原理
➢ 叶绿体中含有两大类色素（叶绿素和类胡 萝卜素），它们溶于有机溶剂，因此可选用乙 醇或丙酮进行提取。
➢ 层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂，叶 绿体内的色素在层析液中的溶解度各不相同， 溶解度越高，在滤纸上的扩散速度越快，反之 则慢，可以将叶绿体中的色素分离开来。因此 采用纸层析法进行分离。
菠菜色素的提取与分离课件
超声波辅助提取法
原理
步骤 特点
微波辅助提取法
原理
利用微波的能量使植物细胞内的 水分迅速转化为蒸汽，产生压力 变化，使细胞壁破裂，促进色素
的释放和提取。
步骤
将菠菜洗净后放入微波反应器中， 加入适量有机溶剂，进行微波处
理，结束后过滤得到色素提取液。
特点
提取效率高，操作简便，但设备 成本较高，且可能对某些色素造
膜分离法
总结词
利用半透膜使不同分子量组分选择性透过，从而达到分离目的的方法。
详细描述
膜分离法是一种高效、节能的分离方法，适用于菠菜色素的精细分离。通过选择适当的半透膜，如超滤膜、纳滤 膜等，使菠菜色素在压力作用下通过半透膜，而其他组分则被截留，从而实现分离。膜分离法具有操作简便、分 离效果好等优点。
色谱分离法
总结词
详细描述
04
菠菜色素的应用研究
CHAPTER
在食品工业中的应用
天然色素
营养补充
风味改善
在医药领域的应用
药物载体
药物合成
诊断试剂
在化妆品行业的应用
美容护肤品
1
彩妆产品
2
指甲油
3
在农业领域的应用
植物生长调节剂 病虫害防治
05
菠菜色素提取与分离的 前景展望
CHAPTER
技术创新与改进
菠菜色素的提取与分离技术发展历程
早期技 术
现代技术
02
菠菜色素的提取技 术
CHAPTER
溶剂提取法
原理
特点
利用溶剂将菠菜中的色素提取出来。
操作简单，提取效率高，但有机溶剂 易挥发，对环境有污染。
步骤
将菠菜洗净、干燥后研磨成粉末，加 入有机溶剂（如乙醇、乙酸乙酯等） 进行搅拌、静置、过滤，得到色素提 取液。
一种菠菜色素的提取方法
一种菠菜色素的提取方法
一种常用的菠菜色素提取方法是溶剂浸提法。
具体步骤如下：
1. 准备新鲜的菠菜，并将其洗净、切碎备用。
2. 将切碎的菠菜放入一个容器中，并加入足够的溶剂。
常用的溶剂包括乙醇、丙酮、甲醇等。
溶剂的选择应根据实际需要和安全要求进行。
3. 用搅拌器搅拌混合物，以促进色素的溶解和提取。
4. 将混合物放入离心机进行离心，以分离出悬浮在溶剂中的色素。
5. 将离心后的溶液过滤，以去除悬浮物和杂质。
6. 将过滤后的溶液进行浓缩，可以采用蒸发、冷冻干燥等方法。
7. 最后，将浓缩后的溶液经过一系列的纯化步骤，如溶剂萃取、柱层析等，以获得纯净的菠菜色素。
这是一种简单的菠菜色素提取方法，但具体的操作条件和步骤还需根据实际情况进行调整和优化。
同时，提取出的菠菜色素还需进行进一步的分析和检测，以确
定其化学成分和质量。
菠菜色素的提取与分离实验报告
菠菜色素的提取与分离实验报告
实验目的：探究菠菜中色素的提取与分离方法，了解菠菜色素的特性和结构。
实验原理：
菠菜中含有多种色素，包括叶绿素、类胡萝卜素等。
在本实验中，将采用乙醇提取法和硅胶柱层析法分别提取和分离菠菜中的色素。
实验步骤：
1. 将菠菜叶片切碎，加入适量的乙醇，用搅拌器搅拌均匀。
然后将混合液过滤，得到澄清的菠菜提取液。
2. 用无水硅胶将提取液转化为干燥的片状固体。
首先，在玻璃棒上将菠菜提取液和未熔化的硅胶混合，然后将其静置几分钟使其结块。
3. 将混合物放入适当大小的玻璃管中，并加上一层纯水使其达到玻璃管的顶端。
将其放在烘箱中干燥，直到片状固体完全干燥。
4. 将得到的片状固体碾碎成细粉末，然后使用硅胶柱层析法进行分离。
将硅胶填充到柱中，加入适量的乙醇，然后将菠菜粉末悬浮液倒入柱中。
根据色素的亲水性差异，使用适当的溶剂体系进行洗脱分离。
5. 收集分离得到的色素溶液，然后进行质量浓度测定和色谱分析。
实验结果：
通过乙醇提取法和硅胶柱层析法，成功得到了菠菜叶片中的色
素溶液。
通过质量浓度测定和色谱分析，确定了菠菜叶片中的主要色素成分和含量。
实验结论：
菠菜叶片中含有多种色素，其中叶绿素是主要组分。
通过乙醇提取法和硅胶柱层析法，可以有效地提取和分离菠菜叶片中的色素。
实验结果可为进一步研究菠菜色素的结构和功能提供基础。
菠菜中色素的提取分离和鉴定(有机化学实验)
菠菜中的色素提取、分离及鉴定、实验目的1. 进一步熟悉和掌握薄层色谱的原理及应用2. 了解菠菜中主要色素的基本性质，通过菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法及原理3. 掌握用紫外光谱和荧光光谱鉴别菠菜中色素的原理及方法、菠菜中的色素简介菠菜叶中富含多种色素成分，如叶绿素（绿色）、胡萝卜素（橙黄色）和叶黄素（黄色） 等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素 a （C 55 H72O 5N»Mg ）和叶绿素b （C 55HzON 4Mg ）,结构见图1。
二者差别仅是a 中一个甲基被b 中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金 属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素 a 的含量通常是b 的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但分子中大的烷基结构使它易溶于丙酮，乙醇，乙醚,石油醚等有机溶剂。
胡萝卜素（C 40峠 6 ）是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即 a , 3-和Y -胡萝卜素，其中 3-异构体含量最多，也最重要。
在生物体内， 3-体受酶催化氧化即形成维生素A 。
目前3-胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素A 使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素（C40H56O2 ）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与3-胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
根据这些色素在有机溶剂中的溶解性，可将它们提取出来。
3-胡萝卜素和叶黄素的结构（ 3胡萝卜素:R =H,H 3CH 3C CH 3CH 3 CH 3CH 3CH 3 H 3CCH 3叶黄素：R = OH ）叶绿体CH 211CHRH 3CH 3CN NN Mg N叶绿素a 和叶绿素b 的结构（叶绿素 a : R=CH ， 叶绿素b : R=CHO菠菜中各色素的理化性质绿色植物中的叶绿体色素在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。
色素有叶绿素和类胡萝卜素两类，主要包括3-胡萝卜素，叶黄素，叶绿素a和叶绿素b四种色素，它们在叶绿体中的含量比约为2: 1: 3：1。
实验 菠菜中色素的提取与分离
实验４菠菜中色素的提取与分离【实验目的】１．学会用有机溶剂提取菠菜中的色素并进行分离，了解从植物中提取有机化合物的一般方法；２．学会根据物质的性质选择合适的溶剂，知道选用混合溶剂是提取物质的有效途径；３．了解利用纸色谱法分离物质的原理和操作。
【实验原理】菠菜中含有多种色素，如叶绿素（绿色）、胡萝卜素（橙黄色）、叶黄素（黄色）等。
１．菠菜中色素的提取叶绿素a、叶绿素b和胡萝卜素易溶于石油醚，叶黄素易溶于乙醇，石油醚和乙醇可以混溶。
因此，可以选择石油醚—乙醇混合溶剂来提取菠菜中的色素，然后用水洗去乙醇和少量易溶于水的杂质，这样就可得到色素的石油醚溶液。
２．色素的分离提取菠菜色素得到的石油醚溶液可用纸色谱法分离：将少量含有几种物质的溶液涂在滤纸条的一端，并在这一端用适当的溶剂（称为展开剂）润湿，在滤纸的毛细作用下，展开剂携带待分离的物质沿滤纸纤维向上移动。
由于不同的组分的移动速度不同，一段时间后，不同的组分移动的距离不同，从而达到将这些组分分离开来的目的，如下图所示。
这种分离方法称为纸色谱法，又叫纸上层析。
【实验器具】试剂：石油醚、乙醇，丙酮、无水硫酸钠、脱脂棉。
仪器：研钵、锥形瓶、漏斗、铁架台（带铁圈）、分液漏斗、大试管。
【实验过程】一、菠菜中色素的提取１．研磨：取１0g菠菜切成小块，用研钵捣烂，装入锥形瓶中。
２．浸取：向锥形瓶中加入１0mL石油醚—乙醇混合溶剂（体积比为１：１），塞上橡胶塞，振荡。
３．过滤：将小团棉花放在漏斗颈部，过滤浸取液（如图１）。
４．洗涤：将滤液移人分液漏斗，用１0mL水洗涤两次，以除去乙醇及浸取液中的少量水溶性物质。
注意不要剧烈振荡，以防止乳化；静置分层（如图２），弃去下层（水—乙醇层），将上层（石油醚层）溶液移至干燥的小锥形瓶中。
注意：洗涤后，下层水层从下口放出，上层有机层从上口倒出。
５．干燥：加入少量无水硫酸钠，干燥，备用。
图１图２二、色素的分离１．裁纸：取一张滤纸裁成１．５cm×２0cm的长方形，注意使滤纸纤维呈竖直走向。
菠菜色素提取实验报告
一、实验目的1. 掌握植物色素提取的基本原理和方法；2. 了解菠菜中主要色素的种类、性质和含量；3. 熟悉薄层色谱和柱层析法的原理及应用；4. 培养实验操作技能，提高分析问题、解决问题的能力。
二、实验原理植物色素主要分为叶绿素、类胡萝卜素和黄酮类化合物。
叶绿素是植物进行光合作用的重要物质，主要存在于叶绿体中，具有绿色、蓝绿色和黄绿色等不同颜色。
类胡萝卜素是一类具有橙黄色、红色和黄色的色素，具有抗氧化、防癌等作用。
黄酮类化合物是一类具有黄色、绿色和蓝色等不同颜色的色素，具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等作用。
本实验采用溶剂萃取法提取菠菜中的色素，利用不同极性的溶剂对各种色素的溶解度差异进行分离。
实验过程中，采用薄层色谱法和柱层析法对提取的色素进行分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶、石油醚、乙醇、丙酮、无水硫酸钠、中性氧化铝、硅胶GF254、CMC水溶液、层析板、点样毛细管、分液漏斗、旋转蒸发仪、研钵、剪刀、量筒、玻璃棒、烧杯、漏斗、层析柱、表面皿、滤纸等。
2. 实验仪器：研钵、分液漏斗、广口瓶、玻璃板、量筒、点样毛细管、抽滤瓶、载玻片、旋转蒸发仪、圆底烧瓶、丙酮、石油醚、95%乙醇、乙酸乙酯、饱和氯化钠、无水硫酸钠、硅胶GF254，CMC水溶液。
四、实验步骤1. 提取菠菜中的色素：（1）将新鲜菠菜叶洗净、晾干，用剪刀剪成小片，放入研钵中；（2）加入适量的石油醚，用研钵研磨，使菠菜叶中的色素充分溶解；（3）将提取液倒入分液漏斗中，加入等体积的乙醇，振摇、分层，收集有机相；（4）将有机相倒入烧杯中，加入适量的无水硫酸钠，搅拌，静置，过滤，得到提取液。
2. 薄层色谱分离：（1）将层析板用铅笔标记起始线，用点样毛细管吸取提取液，在起始线上点样；（2）将层析板放入装有CMC水溶液的玻璃板中，使其吸附层析液；（3）待层析液上升到一定高度时，取出层析板，晾干；（4）观察层析板上的色素带，鉴定各色素。
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菠菜中的色素提取与分离
食品11—2班李薇110424228
一、实验目的
1 、通过对菠菜中色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；
2 、通过柱色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
二、实验原理
绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素（绿）、胡萝卜素（橙）和叶黄素（黄）等多种天然色素。
叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg) 和叶绿素b(C55H7O6N4Mg)，其差别仅中一个甲基被b中的甲酰基所取代。
它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。
植物中叶绿素a的含量通常是b的3倍。
尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。
胡萝卜素(C40H56)是具有长链结构的共轭多烯。
它有三种异构体，即a-,β-γ-胡萝卜素，其β-异构体含量最多，也最重要。
在生物体内，β-体受酶催化氧化即形成维生素A。
目β-胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素A使用，也可作为食品工业中的色素。
叶黄素(C40H56O2 )是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。
与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。
柱色谱：柱色谱法，又称层析法.是一种以分配平衡为机理的分配方法.色谱体系包含两个相,一个是固定相,一个是流动相.当两相相对运动时,反复多次的利用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异,最后达到彼此分离的目的。
柱色谱是在一根玻璃管或金属管中迸行的色谱技术，将吸附剂填充到管中而使之成为柱状，这样的管状柱称为吸附色谱柱。
使用吸附色谱柱分离混合物的方法，称为吸附柱色谱。
这种方法可以用来分离大多数有机化合物，尤其适合于复杂的天然产物的分离。
分离容量从几毫克到百毫克级，所以，适用于分离和精制较大量的样品。
1. 装柱色谱柱的大小规格由待分离样品的量和吸附难易程度来决定。
一般柱管的直径为0.5～l.0Cm，长度为直径的10～40倍。
填充吸附剂的量约为样品重量的20～50倍，柱体高度应占柱管高度的3/4，柱子过于细长或过于粗短都不好。
装柱前，柱子应干净、干燥，并垂直固定在铁架台上，将少量洗脱剂注入柱内，取一小团玻璃毛或脱脂棉用溶剂润湿后塞入管中，用一长玻璃棒轻轻送到底部，适当捣压，赶出棉团中的气泡，但不能压得太紧，以免阻碍溶剂畅流(如管子带有筛板，则可省略该步操作)。
再在上面加入一层约0.5 cm厚的洁净细砂，从对称方向轻轻叩击柱管，使砂面平整。
常用的装柱方法有干装法和湿装法两种:
(1)干装法：在柱内装入2/3溶剂，在管口上放一漏斗，打开活塞，让溶剂慢慢地滴入锥形瓶中，接着把干吸附剂经漏斗以细流状倾泻到管柱内，同时用套在玻璃棒(或铅笔等)上的橡皮塞轻轻敲击管柱，
使吸附剂均匀地向下沉降到底部。
填充完毕后，用滴管吸取少量溶剂把粘附在管壁上的吸附剂颗粒冲入柱内，继续敲击管子直到柱体不再下沉为止。
柱面上再加盖一薄层洁净细砂，把柱面上液层高度降至0.1～l cm，再把收集的溶剂反复循环通过柱体几次，便可得到沉降得较紧密的柱体。
(2)湿装法：基本方法与干装法类似，所不同的是，装柱前吸附剂需要预先用溶剂调成淤浆状，在倒入淤浆时，应尽可能连续均匀地一次完成。
如果柱子较大，应事先将吸附剂泡在一定量的溶剂中，并充分搅拌后过夜(排除气泡)，然后再装。
无论是干装法，还是湿装法，装好的色谱柱应是充填均匀，松紧适宜一致，没有气泡和裂缝，否则会造成洗脱剂流动不规则而形成“沟流”，引起色谱带变形，影响分离效果。
2. 加样将干燥待分离固体样品称重后，溶解于极性尽可能小的溶剂中使之成为浓溶液。
将柱内液面降到与柱面相齐时，关闭柱子。
用滴管小心沿色谱柱管壁均匀地加到柱顶上。
加完后，用少量溶剂把容器和滴管冲洗净并全部加到柱内，再用溶剂把粘附在管壁上的样品溶液淋洗下去。
慢慢打开活塞，调整液面和柱面相平为止，关好活塞。
如果样品是液体，可直接加样。
3. 洗脱与检测将选好的洗脱剂沿柱管内壁缓慢地加入柱内，直到充满为止(任何时候都不要冲起柱面覆盖物)。
打开活塞，让洗脱剂慢慢流经柱体，洗脱开始。
在洗脱过程中，注意随时添加洗脱剂，以保持液面的高度恒定，特别应注意不可使柱面暴露于空气中。
在进
行大柱洗脱时，可在柱顶上架一个装有洗脱剂的带盖塞的分液漏斗或倒置的长颈烧瓶，让漏斗颈口浸入柱内液面下，这样便可以自动加液。
如果采用梯度溶剂分段洗脱，则应从极性最小的洗脱剂开始，依次增加极性，并记录每种溶剂的体积和柱子内滞留的溶剂体积，直到最后一个成分流出为止。
洗脱的速度也是影响柱色谱分离效果的一个重要因素。
大柱一般调节在每小时流出的毫升数等于柱内吸附剂的克数。
中小型柱一般以1～5滴/秒的速度为宜。
洗脱液的收集，有色物质，按色带分段收集，两色带之间要另收集，可能两组分有重叠。
对无色物质的接收，一般采用分等份连续收集，每份流出液的体积毫升数等于吸附剂的克数。
若洗脱剂的极性较强，或者各成分结构很相似时，每份收集量就要少一些，具体数额的确定，要通过薄层色谱检测，视分离情况而定。
现，多数用分步接受器自动控制接收。
洗脱完毕，采用薄层色谱法对各收集液进行鉴定，把含相同组分的收集液合并，除去溶剂，便得到各组分的较纯样品。
吸附剂的要求
（1）对样品组分和洗脱剂都不会发生任何化学反应，在洗脱剂中也不会溶解。
（2）对待分离组分能够进行可逆的吸附，同时具有足够的吸附力，使组分在固定相与流动相之间能最快地达到平衡。
（3）颗粒形状均匀，大小适当，以保证洗脱剂能够以一定的流速(一般为1.5 mL·min-1)通过色谱柱。
（4）材料易得，价格便宜而且是无色的，以便于观察。
可用于吸附
剂的物质有氧化铝、硅胶、聚酰胺、硅酸镁、滑石粉、氧化钙(镁)、淀粉、纤维素、蔗糖和活性炭等。
其中有些对几类物质分离效果较好，而对其它大多数化合物不适用。
三、实验试剂和实验仪器
仪器：层析柱，研钵，蒸馏装置，棉花，天平，烧杯，布氏漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台
试剂：无水乙醇，丙酮，石油醚，三氧化二铝，无水硫酸钠，正丁醇
四、实验步骤
1.层析柱的制备
称取10克三氧化二铝于30ml石油醚中搅拌倒入柱内，重复使用石油醚，直至三氧化二铝都倒入柱内。
完成后，三氧化二铝应填满柱内的二分之一至三分之二。
在柱内倒入少量石油醚，打开活塞，让石油醚流下，使柱内的三氧化二铝均匀。
重复使用石油醚。
2.菠菜中色素的浓缩、提取
取10 g 洗净晾干的新鲜菠菜叶用乙醇清洗,再置于研钵内，加入15 mL3∶2石油醚-乙醇混合液, 适当研磨,然后用布氏漏斗抽出提取液，反复三次,每次加入15mL3:2石油醚-乙醇的混合物，合并提取液，再将提取液转移到分液漏斗中。
向分液漏斗内加入少量蒸馏水,待溶液分层后滤出下层溶液，将上层溶液转移到锥形瓶内，加少量无水硫酸钠干燥。
3.色素的分离层析
待石油醚降至与三氧化二铝的面平齐后，倒入色素提取液。
待色素全部进入柱体后, 在柱顶放上棉花后加入适量洗脱剂（9∶1石油醚—丙酮）,打开活塞，层析开始进行，用小烧瓶收集。
实验过程中不断加入洗脱剂，不能让柱内干燥。
当第一个有色圈将滴出时, 取一支试管收集, 得到胡萝卜素。
再用7∶3石油醚—丙酮作洗脱剂,继续用烧瓶收集，待第二个有色圈将要滴出时取另一支试管收集，得到叶黄素。
再用3∶1∶1丁醇—乙醇—水作洗脱剂, 用相同的方法收集，得到叶绿素a和叶绿素b。
注意事项
1.为了保持柱子的均一性，必须使整个吸附剂浸泡在溶剂或溶液中，否则当柱中溶剂或溶液流干时，就会使柱身干裂，影响渗透和显色的均一性。
因此要保证整个装样过程中石油醚液面要高于三氧化二铝的表面。
2.要在吸附剂上端加入棉花使加样品时不致把吸附剂冲起。
3.层析柱填装紧密与否，对分离效果很有影响，若各部分松紧不匀，会影响渗透速度和显色的均匀。
4.注意洗脱剂的配比，分离出不同的色素后更换洗脱剂。
5.洗脱流速不宜过快，避免因此压紧凝胶，色素分离不开；也不要过慢，使柱装得太松，导致层析过程中，凝胶床高度下降，色素洗脱很慢。
6.样品一定要足够浓缩，加样量不要过大或过小。