菠菜色素的提取与分离
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小心滴加到层析柱顶部。加完 后打开下端活塞，让液面下降 到柱面以下1mm左右，关闭活 塞。加数滴石油醚，打开活塞， 使液面下降经过几次反复，使 色素全部进入柱体。
柱层析
3、洗脱 从柱顶加入石油醚-丙酮溶
液（9:1），层析即开始进行， 用锥形瓶收集。当第一个有色 成分即将滴出时，取另一锥形 瓶收集。接收完后用石油醚丙酮溶液（ 7:3 ）洗脱，换锥 形瓶接收。
菠菜色素的提取与分离
实验目的
1、学习从植物中提取色素的方法。 2、学习薄层色谱和柱色谱的原理及其操
作方法。
实验原理
绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿 色) 、胡萝卜素(橙黄色)和叶黄素(黄色)等 多种天然色素。
通过柱色谱和薄层色谱对菠菜叶中的上 述几种色素进行分离。
实验原理
薄层色谱，常用TLC表示，属于固－液吸 附色谱。化合物在薄层板上的吸附剂（固定 相）和溶剂展开剂（流动相）之间进行分离， 由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展 开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从 而达到分离的目的。也就是在反复的吸附解 析吸附过程中，吸附能力较弱的溶质，首先 被展开剂解析下来，随展开剂推向前去；而 吸附能力强的溶质解析较慢，被展开剂推移 不愿，从而达到分离的目的。
实验原理
实验装置
实验步骤
1、菠菜色素的提取 2、薄层层析
3、柱层析
菠菜色素的提取
1、研磨 在研钵中放入10 g新鲜并剪
碎的菠菜叶，加入15 mL3： 2(体积比)石油醚一乙醇混合 液，适当研磨(不要研成糊状， 否则会给分离造成困难)，将 提取液用滴管转移到分液漏斗 中。反复三次，合并提取液。
注意事项
1、点样不能戳破薄层板面，各样点间距11.5cm，样点直径应不超过2mm。
2、展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。 否则，无法确定展开剂上升高度，即无法 求得Rf 值和准确判断粗产物中各组分在薄 层板上的相对位置。
3、层析柱中氧化铝表面任何时候都不得露出 液面，以防有空气进入。
4、待色素全部进入柱体后，方可进行洗脱， 以防有拖尾影响分离效果。
溶剂的洗脱能力按下列次序递增：
石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、 氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、 甲醇、水、吡啶、乙酸。
实验原理
前沿线 色斑 起始线
实验原理
薄层色谱的用途：
1、化合物的定性检验 2、快速分离少量物质 3、跟踪反应进程 4、化合物纯度的检验
实验原理
柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱 柱内装有固体吸附剂(固定相)如氧化铝或硅胶。 液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时， 由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不 同而按一定的顺序吸附。然后从柱顶加入洗 脱剂(流动相)，样品中的各组分随洗脱剂按一 定的顺序从色谱柱下端流出，根据不同颜色 分段收集。
薄层层析结果
溶剂前沿
色素种类
展a 开 剂1 b
胡萝卜素
叶黄素
叶绿素a 叶绿素b
展开后斑点
b
a
样点
Rf
展a 开 剂2 b
Rf
柱层析
1、装柱 在层析柱中加入60mL石油
醚，称取30g中性氧化铝缓缓 加入层析柱中。打开下端活 塞，放出溶剂，直至氧化铝 表面剩下1~2mm高，关闭活 塞。
柱层析
2、过柱 将菠菜色素的浓缩液用滴管
实验原理
展开前
展开后
ຫໍສະໝຸດ Baidu
吸附—解析—吸附—解析
实验原理
在色谱法中，展开剂移动的速率与溶质移动 的速率的比值，常用比移值Rf来表示:
溶剂前沿
展开后斑点
b
a
样点
实验原理
吸附剂
常用吸附剂有氧化铝、硅胶等。吸附剂对 化合物的吸附能力与分子的极性有关，极性 越强，吸附能力越大，分子中含有极性较大 的基团，其吸附能力也越强。
思考题
P125 2,3,4 P134 2
菠菜色素的提取
2、洗涤和干燥
向提取液中加入l0 mL 饱和NaC1溶液，弃去水层， 再用l0 mL蒸馏水洗涤两次。 将有机层转入干燥的小锥 形瓶中，加无水硫酸钠干 燥半小时。
菠菜色素的提取
3、蒸馏
将干燥后的液体过滤 至圆底烧瓶中，进行蒸馏， 直至烧瓶中浓缩液1mL左 右。
薄层层析
1、点样
先用铅笔在距薄层板一端1cm 处轻轻划一横线作为起始线， 然后用毛细管吸取样品，在起 始线上小心点样，斑点直径一 般不超过2mm。若在同一板 上点几个样，样点间距离应为 1-1.5cm。
薄层层析
2、展开
在层析缸中加入配好的展开剂， 使其高度不超过1cm。将点好的 薄层板小心放入层析缸中，点样 一端朝下，浸入展开剂中。盖好 瓶盖，观察展开剂前沿上升到一 定高度时取出，尽快在板上标上 展开剂前沿位置。
薄层层析
展开剂：（1）石油醚-丙酮，体积比为4:1 （2）石油醚-乙酸乙酯，体积比为3:2
柱层析
3、洗脱 从柱顶加入石油醚-丙酮溶
液（9:1），层析即开始进行， 用锥形瓶收集。当第一个有色 成分即将滴出时，取另一锥形 瓶收集。接收完后用石油醚丙酮溶液（ 7:3 ）洗脱，换锥 形瓶接收。
菠菜色素的提取与分离
实验目的
1、学习从植物中提取色素的方法。 2、学习薄层色谱和柱色谱的原理及其操
作方法。
实验原理
绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素(绿 色) 、胡萝卜素(橙黄色)和叶黄素(黄色)等 多种天然色素。
通过柱色谱和薄层色谱对菠菜叶中的上 述几种色素进行分离。
实验原理
薄层色谱，常用TLC表示，属于固－液吸 附色谱。化合物在薄层板上的吸附剂（固定 相）和溶剂展开剂（流动相）之间进行分离， 由于各种化合物的吸附能力各不相同，在展 开剂上移时，它们进行不同程度的解吸，从 而达到分离的目的。也就是在反复的吸附解 析吸附过程中，吸附能力较弱的溶质，首先 被展开剂解析下来，随展开剂推向前去；而 吸附能力强的溶质解析较慢，被展开剂推移 不愿，从而达到分离的目的。
实验原理
实验装置
实验步骤
1、菠菜色素的提取 2、薄层层析
3、柱层析
菠菜色素的提取
1、研磨 在研钵中放入10 g新鲜并剪
碎的菠菜叶，加入15 mL3： 2(体积比)石油醚一乙醇混合 液，适当研磨(不要研成糊状， 否则会给分离造成困难)，将 提取液用滴管转移到分液漏斗 中。反复三次，合并提取液。
注意事项
1、点样不能戳破薄层板面，各样点间距11.5cm，样点直径应不超过2mm。
2、展开时，不要让展开剂前沿上升至底线。 否则，无法确定展开剂上升高度，即无法 求得Rf 值和准确判断粗产物中各组分在薄 层板上的相对位置。
3、层析柱中氧化铝表面任何时候都不得露出 液面，以防有空气进入。
4、待色素全部进入柱体后，方可进行洗脱， 以防有拖尾影响分离效果。
溶剂的洗脱能力按下列次序递增：
石油醚、四氯化碳、甲苯、苯、二氯甲烷、 氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、丙醇、乙醇、 甲醇、水、吡啶、乙酸。
实验原理
前沿线 色斑 起始线
实验原理
薄层色谱的用途：
1、化合物的定性检验 2、快速分离少量物质 3、跟踪反应进程 4、化合物纯度的检验
实验原理
柱色谱是通过色谱柱来实现分离的。在色谱 柱内装有固体吸附剂(固定相)如氧化铝或硅胶。 液体样品从柱顶加入，当液体流经吸附剂时， 由于吸附剂表面对液体中各组分吸附能力不 同而按一定的顺序吸附。然后从柱顶加入洗 脱剂(流动相)，样品中的各组分随洗脱剂按一 定的顺序从色谱柱下端流出，根据不同颜色 分段收集。
薄层层析结果
溶剂前沿
色素种类
展a 开 剂1 b
胡萝卜素
叶黄素
叶绿素a 叶绿素b
展开后斑点
b
a
样点
Rf
展a 开 剂2 b
Rf
柱层析
1、装柱 在层析柱中加入60mL石油
醚，称取30g中性氧化铝缓缓 加入层析柱中。打开下端活 塞，放出溶剂，直至氧化铝 表面剩下1~2mm高，关闭活 塞。
柱层析
2、过柱 将菠菜色素的浓缩液用滴管
实验原理
展开前
展开后
ຫໍສະໝຸດ Baidu
吸附—解析—吸附—解析
实验原理
在色谱法中，展开剂移动的速率与溶质移动 的速率的比值，常用比移值Rf来表示:
溶剂前沿
展开后斑点
b
a
样点
实验原理
吸附剂
常用吸附剂有氧化铝、硅胶等。吸附剂对 化合物的吸附能力与分子的极性有关，极性 越强，吸附能力越大，分子中含有极性较大 的基团，其吸附能力也越强。
思考题
P125 2,3,4 P134 2
菠菜色素的提取
2、洗涤和干燥
向提取液中加入l0 mL 饱和NaC1溶液，弃去水层， 再用l0 mL蒸馏水洗涤两次。 将有机层转入干燥的小锥 形瓶中，加无水硫酸钠干 燥半小时。
菠菜色素的提取
3、蒸馏
将干燥后的液体过滤 至圆底烧瓶中，进行蒸馏， 直至烧瓶中浓缩液1mL左 右。
薄层层析
1、点样
先用铅笔在距薄层板一端1cm 处轻轻划一横线作为起始线， 然后用毛细管吸取样品，在起 始线上小心点样，斑点直径一 般不超过2mm。若在同一板 上点几个样，样点间距离应为 1-1.5cm。
薄层层析
2、展开
在层析缸中加入配好的展开剂， 使其高度不超过1cm。将点好的 薄层板小心放入层析缸中，点样 一端朝下，浸入展开剂中。盖好 瓶盖，观察展开剂前沿上升到一 定高度时取出，尽快在板上标上 展开剂前沿位置。
薄层层析
展开剂：（1）石油醚-丙酮，体积比为4:1 （2）石油醚-乙酸乙酯，体积比为3:2