透析和超滤

可分几类： 离子交换纤维素：在纤维素分子结构上，连接
一定的离子交换基团生成的离子交换纤维素。 如DEAE-纤维素(二乙基氨乙基纤维素，OCH2CH2N+H（C2H5）2)、羧甲基(CM)纤 维素
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离子交换树脂：以不溶性的人工合成高分子为 母体的离子交换树脂，如聚苯乙烯树脂等。
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1．按固定相和流动相所处的状态分类：可以分为液 相层析和气相层析。
2．按层析原理分类 ： (1)吸附层析(Adsorption Chromatography) (2)分配层析(Partition Chromatography) (3)离子交换层析(Ion Exchanger Chromatography) (4)凝胶层析(Gel Chromatography) (5)亲和层析(Affinity Chromatography)
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离子交换柱层析法分离蛋白质
层析技术常用。 层析系统包括两个相，一为固定相，一为流动相。当
以流动相流过加有样品的固定相时，由于样品各组分 的理化性质（吸附力、分子形状和大小、分子极性、 分子亲和力、分配系数等）的差异，受固定相的阻力 与流动相的推力的影响不同，因而各组分在固定相与 流动相之间的分配也不同，从而使各组分以不同的速 度移动而达到分离的目的。
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4透析方法： 使用时，先检查透析袋是否完好无损？ 装量：通常要留三分之一至一半的空间，以防
透析过程中，透析的小分子量较大时，袋外的 水和缓冲液过量进入袋内 将袋涨破。 为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还 可使用磁子搅拌。透析的容器要大一些， 可以 使用大烧杯、大量筒和塑料桶。 检查透析效果的方法是：用1％ BaCl2检查 (NH4)2SO4，用1％ AgNO3 检查NaCl、KCl等。
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超过滤
1.超滤法是利用具有一定大小孔径的微孔滤膜， 对生物大分子溶液进行过滤（常压、加压或减 压），使大分子保留在超滤膜上面的溶液中， 小分子物质及水过滤出去，从而达到脱盐、更 换缓冲液或浓缩的目的。这种利用超滤膜过滤 分离大分子和小分子物质的方法叫做超滤法
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3．按操作方式不同分类 (1)纸层析(Paper Chromatography) (2)薄层层析(Thin Layer Chromatography) 。 (3)柱层析(colunm Chromatography)
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4 离子交换柱层析 是利用离子交换剂对各种离子有不同的亲和力，
来分离混合物中各种离子的层析技术。
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离子交换剂是由不溶于水的基质和共价结合在 基质（母体）上的带电功能基团组成。带电功 能基团上还结合有可以移动的、与功能基团带 相反电荷的反离子。反离子可以被带同种电荷 的其他离子取代而发生可逆的离子交换，这个 过程中基质的性质不发生改变。
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透析用的半透膜很多，玻璃纸、棉胶、动物膜、 皮纸等都可用来制作半透膜。
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2．透析膜的种类：可用动物膜和玻璃纸等， 但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜， 截留分子量MwCO（即留在透析袋内的生物大 分子的最小分子量，缩写为MwCO）通常为1 万左右。
商品透析袋制成管状，为防干裂，出厂时都用 10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物 (0.1%)、重金属和一些具有紫外吸收的杂质， 用前必须除去。
离子交换凝胶：以凝胶为母体，如葡聚糖，结 合一定的离子基团生成的离子交换葡聚糖凝胶； 琼脂糖等。如DEAE-Sephadex A25、A50， CM--Sephadex C25。
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离子交换剂的作用原理如下： 阳离子交换剂分子中具有酸性基团，能和流动
相中的阳离子进行交换。 R—S03- H+ + Na+ == R—S03- Na+ + H+ 阴离子交换剂分子中具有碱性基团，能和流动
合溶液或0．5mol／L HCI溶液处理(室温下处 理30分钟)。
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2.装柱：测流速 3.样品上柱、洗脱和收集 上样？mL。记录出峰时间。OD值的改变。 4.结束
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平衡透析：也是常用的透析方法之一。方法是 将装有生物大分子的透析袋装入盛有一定浓度 的盐溶液或缓冲液的大容器中，经过透析，袋 内外的盐浓度（或缓冲液pH）一致，从而有 控制地改变被透析溶液的盐浓度（或pH）。
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反透析：将透析袋放入高浓度吸水性强的多聚物溶 液中，透析袋内溶液中的水便迅速被袋外多聚物所 吸收，从而达到袋内液体浓缩的目的。这种方法称 为“反透析”。可用做反透析的多聚物有聚乙二醇 （Polyethylene glycol, PEG）、聚乙烯吡咯烷酮 （Polyvinyl Pyrrolidone, PVP）、右旋糖、蔗糖 等。
透析和超滤 (Dialysis and Ultrafiltration)
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透析Байду номын сангаас
1．透析是利用蛋白质等生物大分子不能透过半 透膜而进行纯化的一种方法。有以下几种方法：
脱盐透析：将含盐的生物大分子溶液装入透析袋内。 并将袋口扎好放入装有蒸馏水的大容器中，用搅拌方 法使蒸馏水不断流动经过一段时间后，透析袋内除大 分子外，小分子盐类透过半透膜进入蒸馏水中，使膜 内外盐浓度达到平衡。如在透析过程中更换几次大容 器中的液体，可以使透析袋内的溶液达到脱盐的目的。 脱盐透析是应用最广泛的一种透析方法。
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3． 透析袋的处理： 方法一：可先用50％乙醇煮沸1小时，再依次用50％乙醇、
0.01 mol/L碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA溶液洗涤，最后 用蒸馏水冲洗即可使用。（50％乙醇处理对除去具有紫外 吸收的杂质特别有效。） 方法二：也可用蒸馏水将透析袋煮沸15分钟，用蒸馏水彻 底清洗后即可使用。 从此 时起取用透析袋必须戴手套（或洗干净手）。 使用后的透析袋洗净后可存于4℃蒸馏水中，确保透析袋 始终浸没在溶液内。用时必须仔细检查，不漏时方可重复 使用。 若长时间不用，可加少量NaN3，以防长菌。
相中的阴离子进行交换。 R—N+ (CH3)30H- + Cl-==R—
N+( CH3)3C1- + OH-
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离子交换剂的选择
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操作要点
1．交换剂的预处理、再生和转型 酸－碱－酸；或碱－酸－碱 用0．5mol／L NaOH和0．5mol／L NaCl混