多肽

多肽的合成-当氨基酸难以连
接时
Edman降解法
Edman降解（Edmandegradation）：是测 定蛋白质一级结构的方法，主要是从蛋白质 或多肽氨基末端进行分析。由埃德曼 （P．Edman）在上世纪50年代所创立。分 为耦合、切割、萃取、转化、鉴定等几个步 骤。
测序要求
●1 样品必需纯（>97%以上） ●2 知道多肽的分子量； ●3 知道多肽由几个亚基组成； ●4 测定多肽的氨基酸组成；并根据分子 量计算每种氨基酸的个数。 ●5 测定水解液中的氨量，计算酰胺的含 量。
DIEA
• • • • • • • • N,N-二异丙基乙胺 分子量:129.25 无色透明液体, 密度0.782g/ml(20°C) 沸点127°C 熔点:-46°C 无色透明液体 溶于醇、醚等有机溶剂， 呈碱性，易燃，易挥发， 具有胺的气味，有刺激 性。
• • • • •
问题：氨基酸与氨基酸之间难以连接时-脱水缩合反应停滞 解决方法：借助外力、进行催化 外力-TBTU（偶联试剂）：将氨基与羧基连接在一起 催化-DIEA（催化剂）：使氨基与羧基溶胀？？？ DIC：在碱性条件下反应会有副产物的产生，进而影响反 应的进行
实验过程
1.偶联
1）.定义：
是由两个有机化学单位(moiety) 进行某种化学反应而得到一个有机分 子的过程
实验过程
2）.异硫氰酸苯脂与蛋白质和多肽的N-端残基反应
异硫氰酸苯脂 蛋白质或多肽
苯氨基硫甲酰肽(PTC-肽 ）
具体操作：
在pH9．0的碱性环境下，将异硫氰酸苯酯(Ph—N=C=S， PITC)和多肽N端氨基酸偶合，形成苯氨基硫甲酰(PTC)衍生物；
实验过程
2.环化裂解
1）.定义
环化：分子中形成环状结构 裂解：裂解是指只通过热能将一 种样品（主要指高分子化合物）转变成 另外几种物质（主要指低分子化合物） 的化学过程。
实验过程
2）.苯氨基硫甲酰衍生物硝基甲烷中与酸作用发生环化，生 成相应的苯乙内酰硫脲衍生物而从肽链上掉下来。
苯乙内酰硫脲衍生物 剩余完整肽链 苯氨基硫甲酰衍生物
实验过程
3.转化
1）.苯乙内酰硫脲衍生物转化为苯乙内酰硫氨基酸
苯乙内酰硫脲衍生物
苯乙内酰硫氨基酸
具体操作：
萃取出释放的氨基酸衍生物并在强酸性条件下转化为稳 定的乙内酰苯硫脲氨基酸(PTH．氨基酸)
Edman降解法的优点
异硫氰酸苯酯与所有氨基酸残基的反 应产率和回收率都相当高，因此反应副 产物少，用色谱可以准确鉴定。 对大多数氨基酸残基而言，30 min的 耦合反应时间、5 min的切割反应时间 都已足够。 剩下的肽链仍是完整的，可依照此法 重复测定新生的N末端氨基酸
具体操作
以三氟乙酸(TFA)处理耦合后产物，将多肽的N一端 第一个肽键选择性的切断，释放出该氨基酸残基的噻唑啉 酮苯胺衍生物
实验过程
3.转化
1）.苯乙内酰硫脲衍生物转化为苯乙内酰硫氨基酸
苯乙内酰硫脲衍生物
苯乙内酰硫氨基酸
具体操作：
萃取出释放的氨基酸衍生物并在强酸性条件下转化为稳 定的乙内酰苯硫脲氨基酸(PTH．氨基酸)
谢谢
学习小结
201源自文库.3.27
• 认识TBTU、DIEA • TBTU、DIEA在多肽的合成里的作用 • 肽链中氨基酸序列的测试-Edman降解法
目录
TBTU
• O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四 甲基脲四氟硼酸 • 分子量：321.1 • 白色至灰白色晶体 • 熔点:200-205 ℃
理想的固相肽合成偶联试剂；该偶联试剂的晶体以及 溶液结构是胍盐N-氧化物，而非脲阳离子化合物