荧光显微成像技术和应用PPT课件
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的迁移功能,将一荧光蛋白与信号分子相偶联, 根据荧光蛋白的分布情况即可推断信号分子的 迁移状况,并推断该分子在迁移中的功能。由 于GFP分子量小,在活细胞内可溶且对细胞毒 性较小,因而常用作荧光探针
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16
谢谢
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2019/10/23
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7
分色镜 反射激发光,透过荧光
暗场聚光镜 来自下面光源的光线经过暗场聚光镜,形成了横过显微镜视野而不进
入物镜的强烈光束。因此视野是暗的
8
2019/10/23
9
荧光图像的记录方法
荧光显微镜所看到的荧光图像具有: 形态学特征和荧光的颜色、亮度
判断结果时,必须将二者结合起来综合判断 记录结果:主观指标(即工作者目力观察)
客观指标(细来自百度文库分光光度计、图像分析仪等)
10
荧光显微镜应用技术
1. 对细胞结构或组分的定性位、半定量研究 免疫荧光技术 用荧光标记的抗体或抗原与样品(细胞、组织或分离的物质等)中相应
的抗原或抗体结合,以适当检测荧光的技术对其进行分析的方法。将抗原 或抗体与荧光染料连接,用于检测相应特异性的抗体或抗原的方法称“直 接免疫荧光技(directimmunofluorescent technique)”。用荧光染料标 记的第二、第三抗体等检测相应抗原抗体复合体的方法则称“间接免疫荧 光技术(indirect immunofluorescent technique)”。
11
由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进 行细胞定位
12
2.作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。 绿色荧光蛋白 绿色萤光蛋白(green fluorescent protein),简
称GFP,其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的 光线激发下,会发出绿色萤光,在生物学研究中绿 色荧光蛋白具有广泛用途,包括有
荧光显微技术和应用
12级生物科学 邱修明
1
原理
普通光学显微镜 通过普通光源的照明观察标本
2
荧光显微镜(fluorescence microscope): 利用较短波长的光(激发光)照射样品,
使样品受到高能量激发,产生较长波长的 荧光(发射光),用来观察和分辨样品中产 生荧光的物质的成分和位置。
3
透射式
荧光显微镜的种类 ●落射式
4
透射荧光显微镜原理图
目镜
物镜
标本
吸收滤色镜 暗场聚光镜
激发滤色镜
汞灯
5
落射荧光显微镜原理图
吸收滤色镜
分色镜 物镜 标本
汞灯 激发滤色镜
6
荧光显微镜的主要部件
透射式
汞灯光源 激发滤色镜 暗场聚光镜 吸收滤色镜
落射式
汞灯光源 激发滤色镜 分色镜 吸收滤色镜
13
1.分子标记 利用绿色荧光的发光机制,可将GFP作为蛋白质
标签(protein tagging),即利用DNA重组技术, 将目的基因与GFP基因构成融合基因,转染合适的 细胞进行表达,然后借助荧光显微镜便可对标记的 蛋白质进行细胞内活体观察
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2.药物筛选 荧光探针分布是利用信号传导中信号分子
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谢谢
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分色镜 反射激发光,透过荧光
暗场聚光镜 来自下面光源的光线经过暗场聚光镜,形成了横过显微镜视野而不进
入物镜的强烈光束。因此视野是暗的
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荧光图像的记录方法
荧光显微镜所看到的荧光图像具有: 形态学特征和荧光的颜色、亮度
判断结果时,必须将二者结合起来综合判断 记录结果:主观指标(即工作者目力观察)
客观指标(细来自百度文库分光光度计、图像分析仪等)
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荧光显微镜应用技术
1. 对细胞结构或组分的定性位、半定量研究 免疫荧光技术 用荧光标记的抗体或抗原与样品(细胞、组织或分离的物质等)中相应
的抗原或抗体结合,以适当检测荧光的技术对其进行分析的方法。将抗原 或抗体与荧光染料连接,用于检测相应特异性的抗体或抗原的方法称“直 接免疫荧光技(directimmunofluorescent technique)”。用荧光染料标 记的第二、第三抗体等检测相应抗原抗体复合体的方法则称“间接免疫荧 光技术(indirect immunofluorescent technique)”。
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由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出,从而可对抗原进 行细胞定位
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2.作为生物大分子筛选与鉴定的标记物。 绿色荧光蛋白 绿色萤光蛋白(green fluorescent protein),简
称GFP,其基因所产生的蛋白质,在蓝色波长范围的 光线激发下,会发出绿色萤光,在生物学研究中绿 色荧光蛋白具有广泛用途,包括有
荧光显微技术和应用
12级生物科学 邱修明
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原理
普通光学显微镜 通过普通光源的照明观察标本
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荧光显微镜(fluorescence microscope): 利用较短波长的光(激发光)照射样品,
使样品受到高能量激发,产生较长波长的 荧光(发射光),用来观察和分辨样品中产 生荧光的物质的成分和位置。
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透射式
荧光显微镜的种类 ●落射式
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透射荧光显微镜原理图
目镜
物镜
标本
吸收滤色镜 暗场聚光镜
激发滤色镜
汞灯
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落射荧光显微镜原理图
吸收滤色镜
分色镜 物镜 标本
汞灯 激发滤色镜
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荧光显微镜的主要部件
透射式
汞灯光源 激发滤色镜 暗场聚光镜 吸收滤色镜
落射式
汞灯光源 激发滤色镜 分色镜 吸收滤色镜
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1.分子标记 利用绿色荧光的发光机制,可将GFP作为蛋白质
标签(protein tagging),即利用DNA重组技术, 将目的基因与GFP基因构成融合基因,转染合适的 细胞进行表达,然后借助荧光显微镜便可对标记的 蛋白质进行细胞内活体观察
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2.药物筛选 荧光探针分布是利用信号传导中信号分子