鸡场抗体水平检测与解读

1、 蛋/种鸡群：ND抗体在正常检测离散范围应为6log2—12l og2，离散范围越小越能说明鸡群免疫应答反应好，如抗体滴 ND（新 度＞13log2，且离散范围大如：6log2—15log2，提示鸡群可 城疫） 能受外界毒株感染所致。 2、 肉鸡群：ND抗体正常检测离散范围在0log2-10log2之间 ，如抗体滴度≥11 log2，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 病毒 对照
2× 生理 盐水 血清 4单位抗原 红细胞
4×
8×
16×
32×
64×
128×
256×
512×
1024×
2048×
50
50 50 50 －
50
50 50 50 －
50
50 50 50 ＋
50
50 50 50 ＋＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋
164
1070.5 53 1657 233 512.1 69
1432
1851.2 22 5698 1404 3131.6 37
237
1152.4 52 2746 72 532.0 101
血凝（HA）和血凝(HI)抑制试验-以新城疫为例
血凝试验（HA），目的：滴定病毒的血凝效价；原理：某些病毒或病毒的血凝素能选 择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直 接血凝反应。
3
序号 检测项目
检测结果分析
备注
4
1、 蛋/种鸡群：IB免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗 体较免前抗体有所上升（500—2000），并且变异系数缩小， 说明免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。 IB 从大量的检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。鸡群在产 （传支） 蛋期抗体滴度大于10000的鸡群在我们长时间检测中也有发现 ，鸡群无疾病表现，目前不能说明什么，有待进一步的认识。 2、 肉鸡群：肉鸡IB抗体在30日龄-40日龄之间，在3000以下 为正常范围，大于4000且变异系数＞100%，提示鸡群可能受 外界毒株感染所致。 1、 蛋/种鸡群：IBD免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周 抗体较免前抗体有所上升（500—3000），并且变异系数缩小 ，说明免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功 IBD（法 。从大量检测结果中发现免后阳性率基本都在100%。鸡群在产 氏囊） 蛋期抗体滴度大于15000的鸡群在我们长时间检测中也有发现 ，抗体诊断几乎用不着，因典型症状较为明显。 2、 肉鸡群：以琼脂扩散试验(AGP)方法检测免后三周抗体≥50 %为免疫合格。 REO免疫效果评价（ELISA检测）：免后三周抗体较免前抗体 REO（病 均有大幅度上升（5000—15000），并且变异系数缩小，说明 关） 免疫有效，一般认为免疫抗体阳性率＞80%为免疫成功。从大
5
提示：三者均可以 给商品肉鸡提供较 高的母源抗体，保 护雏鸡前期不受外 界毒影响。
公司
序号
客户
日龄
项目 MAX MIX
HI -4 3 1 1.8 27 2 0 1.4 100 3 1 1.3 58 -5 0 0 1.0 0 0 0 1.0 0 0 0 1.0 0 H9 1 0 1.0 212 1 0 1.0 173 6 1 1.7 91 ND 10 2 4.3 45 9 4 5.9 27 7 2 3.6 42
双抗体夹心法
ELISA结果表示
1、用阳性“+”与阴性“-”表示 若样本的OD值超过规定吸收值判为阳性 ，否则为阴性。（规定吸收值=一组阴性样本的吸收值之均值+2倍或3倍 SD,SD为标准差）。 2、以P/N比值表示 样本的OD值与一组阴性样本OD值均值之比即为P/N比值 ，若样本的P/N值≥1.5、2或3倍，即判为阳性。 3、以终点滴度（即ELISA效价，简称ET）表示 将样本倍比稀释，测定各稀 释度的OD值，高于规定吸收值（或P/N≥1.5、2或3倍）的最大稀释度即仍出 现阳性反应的最大稀释度，即为样本的ELISA滴度或效价。可以做出OD值与 效价之间的关系，样本只需做一个稀释度即可推算出其效价。 4、定量测定 事先用标准抗原制备一条OD值与浓度的相关标准曲线；测出 样本的OD值，根据曲线查出抗原浓度。
酶联免疫吸附试验（ELISA）,其基本过程是将抗原或 抗体吸附于同相载体，在载体上进行免疫酶反应，底 物显色后用肉眼或分光光度计判定结果。整个反应都 必须在抗原结合抗体的最适条件下进行。每次试验时 都需设阳性和阴性对照。 ELISA的核心是利用抗原抗体的特异性吸附，在固相载 体上一层层的叠加，可是是两层、三层甚至多层，犹 如搭积木一样。
血凝抑制试验（HI），目的，确定抗体水平；原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体 ，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒 颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI） 反应，也称血凝抑制反应。
抗原
抗体
I am late！
血凝抑制试验步骤
2×
4×
8×
16×
32×
64×
128×
256×
512×
1024×
2048×
红细胞对照
生理 盐水
抗原
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
50
弃50
红细胞
50 ＋＋ ＋＋
50 ＋＋ ＋＋
50 ＋＋ ＋＋
50 ＋＋ ＋＋
50 ＋＋ ＋＋
50 ＋＋ ＋
50
病 毒 颗 粒
红细胞
血凝效价测定步骤
1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水 2. 在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。 3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul 4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 5.结果判定
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
HI
-4 3 1 1.8 27 2 -5 0 0 1.0 0 0 H9 1 0 1.0 212 1 ND 10 2 4.3 45 9 IBV 4699 388 1579.176 7 71.41654 5 2291 IBD 4553 1168 2296.2 41 2567
ELISA
REO 4556 878 1919.2557 51.549656 2822
以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一个凝集单位。上表看出， 该新城疫病毒液的血凝价为1:32，则l:32为1个血凝单位，1:16、l:8分别为2、4个血凝 单位，或将32/4=8，即1:8稀释的病毒液为4个血凝单位。 根据判定结果，吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释，即为4个血凝单位的标准 抗原，以备凝血抑制试验使用。
序号 检测项目
检测结果分析
备注
1
2
提示：两者离散范 围大小是评价鸡群 免疫应答反应效果 和野毒感染的评价 的重要指标。发病 前后7—14天抗体 1、 蛋/种鸡群H9抗体正常的检测离散范围应为4log2—10log 滴度升高2log2—4l 2，鸡群持续接种疫苗后，鸡群抗体离散范围出现4log2—12o H9（禽流 og2基本可以确定 g2也属于正常，离散范围越小越能说明鸡群免疫应答反应好 感） 。 ，如抗体体滴度＞13log2，且离散范围大如：6log2—15log2 ，提示鸡群可能受外界毒株感染所致。 2、 肉鸡群：同ND相似。 1、 蛋/种鸡群H5抗体正常检测离散范围应为4log2—10log2 H5（禽流 ，鸡群感染后，抗体异常上升，且离散范围大。 感） 2、 肉鸡群：因该病感染和死亡涉及非常快，且病变典型， 抗体对比意思不大。
50
50
50
50
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
50
结果
＋＋
＋
－
－
－
－
4
血凝试验（HA）结果判定
++++
+++
++
+
-
结果判定标准： 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、＋＋ ：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、＋ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－ ：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。
50
50 50 50 ＋＋ ＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋＋
50
50 50 50 ＋＋ ＋＋
50
弃50 50 50 －
结果
7
血凝抑制试验（HI）结果判定
结果判定标准同血凝试验（HA）。 将反应板倾斜成45度角，沉于管底的细细胞沿着倾斜面向下呈线状流动者为沉 淀，表明红细胞未被或不完全被病毒凝集；如果孔底的红细胞铺平孔底，凝成均匀 薄层，倾斜后红细胞不流动，说明红细胞被病毒所凝集。能将4单位病毒物质凝集 红细胞的作用完全抑制的血清最高稀释倍数，称为该血清的红细胞凝集抑制效价， 用被检血清的稀释倍数或以2为底的对数(10g2)表示。如上例，该血清的红细胞凝 集抑制效价为1：4或HI效价为2(10g2)。
稀释 倍数
2×
4×
8×
16×
32×
64×
128×
256×
512×
1024×
2048×
血清 对照
结果
—
—
＋
＋＋
＋＋ ＋
＋＋ ＋
＋＋ ＋＋
＋＋ ＋＋
＋＋ ＋＋
＋＋ ＋＋
＋＋ ＋＋
—
(1)一般认为鸡的免疫临界水平为1:8(成年)或1:16(雏鸡)，随地区不同而稍有差异。 (2)鸡血清HI抗体效价高于1:16时可适当推迟新城疫免疫的时间，HI抗体效价在1:16以下， 须进行新城疫疫苗接疫种，在新城疫流行的地区或鸡场，鸡的免疫临界水平应稍提高。 (3)鸡群的HI抗体水平（血凝抑制滴度）是以抽检样品的HI抗体效价(log2)的几何平均值表 示的。如果某鸡群的10份样品中，HI抗体效价(log2)为8的有3份样品，为7的有5份样品， 为6的有2份样品，它们的平均值为：（ 8×3＋7×5＋6×2）/（3＋5＋2）＝7.1;平均水平 在4(10g2)以上，说明该鸡群为免疫鸡群。若在检样中HI抗体效价的最高值与最低值相差太 大时，则不能用上法计算平均水平，应根据临界水平以下的样品数在全部样品中所占的百 分比决定免疫与否。 (4)大型养鸡场，每次进行抽测时，抽样率一般不低于0.1％一0.5％，小型鸡群，抽样率应 有所增加，一般认为理想的抽样率应为2.0％。 (5)鸡群接种新城疫疫苗后，经2～3周测血清中的HI抗体效价，若提高2个滴度以上，表示 鸡的免疫应答良好，疫苗接种成功；若HI抗体效价无明显提高，表示免疫失败。 （6）若有10%以上的鸡群出现11 (log2)以上的高血凝抑制滴度，说明鸡群已受新城疫强毒 感染。若监测鸡群的免疫水平，用血凝抑制滴度在4(log2)的鸡群保护率为50%左右；在 4(log2)以上保护率达90-100%；在4(log2)以下的非免疫鸡群保护率约9%，免疫过的鸡群为 43%。
1
陈久长
41ds
GMT CV% MAX MIX GMT CV% MAX MIX GMT CV%
天津
2
李家来
42ds
3
刘广利
43ds
如上表所示：MAX为多个样品中的HI抗体滴度最大值；MIX为HI抗体滴度最小值；GMT为 多个样品的HI几何平均滴度；CV%为变异系数或离散度。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
1、在血凝板上1－12孔内各加入50ul生理盐水； 2、在第1孔内加入被检血清50ul，然后倍比稀释至第11孔，最后弃50ul； 3、第1－12孔内加入4个单位血凝抗原50ul（第12孔为病毒对照）； 4、每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul； 5、轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 6、结果判定
鸡场抗体检测与解读
抗体检测周报
PVM动保中心--出栏肉鸡抗体检测周报 公司 序号 客户 日龄 项目 MAX MIX 1 陈久长 41ds GMT CV% MAX 天津 2 李家来 42ds MIX GMT CV% MAX 3 刘广利 43ds MIX GMT CV% (第47周 11月16日--11月22日)
免疫计划 1日龄 公司首免 9日龄 新支妥 瑞普 点眼
1日 公司首免 7日龄 新支妥 瑞普 点眼 21日龄 新威灵 梅里 亚 饮水 1日龄 公司首免 9日龄 新支妥 瑞普 点眼
0
1.4 100 3 1 1.3 58
0
1.0 0 0 0 1.0 0
0
1.0 173 6 1 1.7 91
4
5.9 27 7 2 3.6 42