spa协同凝集实验

实验八协同凝集试验
(Coagglutination assay)
【实验原理】
葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白(SPA)能与人及多种哺乳动物(如猪、兔、豚鼠等)血清中的IgG 类抗体的Fc段结合，成为致敏的载体颗粒。

IgG的Fc段与SPA结合后，两个Fab段暴露在葡萄球菌菌体表面，仍保持其正常的抗体活性和特异性，当与特异性抗原相遇时，出现凝集现象。

【主要试剂与器材】
1.金黄色葡萄球菌Cowan I株。

2.变形杆菌OX l9株18～24h琼脂斜面培养物。

3.SPA菌液、SPA菌诊断液(制备见免疫血清的制备)。

4.无菌生理盐水。

5.载玻片、滴管、接种环、牙签等。

【操作方法】
1.将载玻片分成3格，编号为l、2、3，于第1、2格分别加1滴SPA菌诊断液，第3格加1滴未致敏的SPA菌液。

2.于第3、1格分别加1滴接种环变形杆菌OX l9株18～24h琼脂斜面培养物，第2格加1滴生理盐水，分别用牙签混匀，2～3min内观察结果。

【结果判断】
第1格内金黄色葡萄球菌凝集成清晰可见的颗粒，液体澄清，为阳性反应结果；第2、3格为对照，应无凝集。

可根据下面标准确定凝集的强弱，以“2+”以上凝集判断为阳性。

“4+”：很强，液体澄清透明，金黄色葡萄球菌凝集成粗大颗粒。

“3+”：强，液体透明，金黄色葡萄球菌凝集成较大颗粒。

“2+”：中等强度，液体稍透明，金黄色葡萄球菌凝集成小颗粒。

“+ ”：弱，液体稍混浊，金黄色葡萄球菌凝集成可见颗粒。

“- ”：不凝集，液体混浊，无凝集颗粒可见。

【注意事项】
1.试验前仔细检查所用试剂本身有无自凝现象或出现细小颗粒，以免影响结果观察或导致错误结果。

2.加变形杆菌OX l9株培养物时应先加第3格，再加第1格，以免将SPA菌诊断液带入到SPA菌液中影响试验结果。

3.协同凝集试验的特异性取决于致敏免疫血清的特异性，其凝集反应的强度取决于免疫血清效价。

故因选择特异性强和效价高的免疫血清制备SPA菌诊断液。

4.SPA与各种属IgG的亲和力有所不同，与猪IgG结合力最强，依次为狗、兔、人、猴、豚鼠、小鼠和牛；与绵羊和大鼠的IgG结合力较弱，而与牛犊、马、山羊和鸡IgG不起反应。

因此制备SPA菌诊断液所用的免疫血清种属要选择适宜的动物。

5.为排除非特异性凝集所造成的假阳性，每次试验应同时设立严格的对照。

【应用与评价】
临床上常用于脑脊液、血液、尿液和其它分泌物中病原菌的快速鉴定和分型；病毒的鉴定、分型及细菌可溶性产物的测定。

该试验异性强、灵敏度高(较常规玻片法高50倍)，节省抗血清，具快速、方便、不需特殊仪器设备等优点，是一种简便的血清学反应技术。

【思考题】
1.试验同时应设立哪些对照?有何意义?
2.简述协同凝集试验原理及应用。