免疫学实验凝集反应
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一、玻片凝集反应（定义）
当颗粒性抗原与相应的抗体发生特异性结合时，两者 比例适宜，在电解质溶液中呈现肉眼可见的颗粒状 凝集，此现象称凝集反应。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
一、玻片凝集反应
【实验材料】
1. 1:20痢疾免疫血清，1:20伤寒免疫血清。 2. 伤寒沙门菌菌液，痢疾志贺菌菌液。 3. 生理盐水，玻片，微量移液器，消毒缸等。
◆ 凝集反应 ◆ 沉淀反应 ◆ 补体结合实验 ◆ 免疫标记实验技术
实验目的：掌握抗原抗体结合反应的原理，方法及其应用
第一节 凝集反应（Agglutination） 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
反应原理：
颗粒型抗原与相应抗体在电解质溶液中出现凝集的想象 凝集反应方法： 直接凝集：颗粒性抗原和相应抗体直接出现凝集反应 间接凝集：先将可溶性抗原吸附于大分子颗粒载体
实验目的：
掌握抗原抗体结合反应的原理，方法及其应用
属免疫学最简单最直接最常用的基础实验
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
用已知的抗血清检测被检样品中有无相对应的抗原
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
【实验内容】
玻片凝集： 常用已知抗血清检测未知抗原，定性 试管凝集：可检测未知的抗原或抗体并能报告凝集效价
实 验 要 求 与 实 验 室 规 则 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
实验课要求：
1. 课前预习，明确目的，了解实验内容与方法。阅读实验指导 2. 实验过程严肃认真，按实验规程操作，要有严格的科学态度 3. 仔细观察如实记录实验现象与结果，按时独立完成实验报告
实验室规则：
1. 进入实验室必须穿整洁的隔离衣，严禁在实验室内高声喧哗 2. 禁止在实验室内饮食，吸烟和做与实验无关的其他事情 3. 节约实验用品，爱护仪器设备，如有损坏及时报告老师 4. 强化安全意识，注意水电安全。值日小组认真整理卫生，
表面,再与相应抗体结合发生凝集反应。
具体实验内容与方法：
◆ 玻片凝集试验：伤寒沙门氏菌与痢疾志贺式菌的检测，用已知抗血清 检测患者体内未知抗原。 操作见实验指导
◆ 试管凝集试验（微量反应板法）：用已知颗粒性抗原与被检血清混合， 然后观察试管内有无凝集，并观察血清凝集效价，判断抗体浓度。
◆ 间接凝集试验（类风湿因子检测 RF）：属自身免疫性疾病 受外界刺激，机体IgG变性，产生抗原性（RF），刺激自身产生抗变性 IgG抗体，此抗体与RF因子结合形成免疫复合物沉积于病变部位。
小心加样！ 取U型微量反应板（做好个人或小组标记）
• 于两横排1～10孔中各加入生理盐水 每孔50μl。
• 分别在两横排的第1孔内加入1:20伤寒免疫血清 50μl， 每排各从第1孔开始作对倍稀释至第9孔， 从第9孔混匀后弃去50μl。
• 第一横排从第10孔至第1孔各加入伤寒沙门菌菌液50μl/孔 第二横排同法各加入甲型副伤寒沙门菌菌液50μl/孔。
1
2
取清洁玻片两张，用记号笔，玻璃蜡笔作出标记和画好 分区，按实验指导要求加样操作。
【方法】
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
1. 取洁净玻片2张，各用记号笔划分三等份。 2. 在玻片的左上角分别标记1和2。 3. 按下列要求依次加入反应物。各种加量均为20微升 4. 转动玻片，充分混匀1-2min后观察反应结果并作出解释。
解释说明出现凝集和不出现凝集的依据。
1●
●
2●
●
生理 盐水
+ 伤寒沙
门菌
1：20伤 血清
+ 伤寒沙
门菌
1：20痢 血清
+ 伤寒沙 门菌
生理 盐水
+ 痢疾志
贺菌
1：20伤 血清
+ 痢疾志 贺菌
1：20痢 血清
+ 痢疾志 贺菌
二、试管凝集反应 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
【实验原理】
将待检血清作对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检 血清混合，抗原与不同稀释度的抗体在试管内直接结合而出现 的凝集现象称为试管凝集反应。此法是一种半定量法。 常用已知抗原(如细菌悬液，RBC悬液)来测定被检血清中 相应抗体的水平(效价或滴度)。 用于检测被检血清中是否存在和已知抗原相应的抗体 及抗体的效价：如；患者血清中免疫性抗体检测。
保持实验台面清洁整齐，实验废物放入指定的垃圾桶内。
临床免疫学实验指导 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
第一部分 抗原抗体反应
（Antigen-Antibody Reaction） 抗原抗体反应概念： 是指相应的抗原-抗体在体内或体外发生的特异性结
合反应。 主要应用： 1.用已知抗原检测未知抗体，抗体效价 2.用已知抗体检测未知抗原，明确病原生物 抗原-抗体结合反应常用实验方法：
例如 孕妇血清中免疫性IgG检测，用于新生儿溶血病的诊断、
病毒感染后，患者抗病毒抗体产生情况的观察
【材料】
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
1．1:20伤寒免疫血清。
2．伤寒沙门菌菌液，甲型副伤寒沙门菌菌液。
3．生理盐水，TIP头，微量移液器，
4. U型微量反应板。见下图
5．恒温培养箱等。
方法: 取U型微量反应板，做好标记，加样 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
抗原抗体反应示意图
NaCl
直接凝集反应
可见反应
实验一 凝集反应 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
定义： 凝集反应Biblioteka Baidu细菌、红细胞等颗粒性抗原或
表面覆盖抗原的颗粒状物质(如红细胞、聚苯乙 烯胶乳等)，与相应抗体结合，在一定条件下， 形成肉眼可见的凝集团块现象。
• 充分混匀后，置45℃恒温箱孵育1h后取出。 室温静置15min，最好在黑色背景下，观察并报告结果。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
血清对倍稀释方法：
• 用微量移液器将第1孔的溶液连续吸吹三次，使
其充分混匀。吸出50μl移入第2孔 。同法吸吹三次 使充分混匀后再吸出50μl移入第3孔，如此作对倍稀 释至第9孔，吸吹混匀后吸出50μl弃去。此时第1～ 9孔的血清稀释度依次增加一倍，即血清对倍稀释法 或倍比稀释法。
• 注意：做倍比稀释吸取时插到管底，吹出时离开
液 面，沿孔壁吹出。动作要连续轻巧，切勿出错
试管凝集试验操作与稀释图示 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
孔号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
当颗粒性抗原与相应的抗体发生特异性结合时，两者 比例适宜，在电解质溶液中呈现肉眼可见的颗粒状 凝集，此现象称凝集反应。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
一、玻片凝集反应
【实验材料】
1. 1:20痢疾免疫血清，1:20伤寒免疫血清。 2. 伤寒沙门菌菌液，痢疾志贺菌菌液。 3. 生理盐水，玻片，微量移液器，消毒缸等。
◆ 凝集反应 ◆ 沉淀反应 ◆ 补体结合实验 ◆ 免疫标记实验技术
实验目的：掌握抗原抗体结合反应的原理，方法及其应用
第一节 凝集反应（Agglutination） 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
反应原理：
颗粒型抗原与相应抗体在电解质溶液中出现凝集的想象 凝集反应方法： 直接凝集：颗粒性抗原和相应抗体直接出现凝集反应 间接凝集：先将可溶性抗原吸附于大分子颗粒载体
实验目的：
掌握抗原抗体结合反应的原理，方法及其应用
属免疫学最简单最直接最常用的基础实验
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
用已知的抗血清检测被检样品中有无相对应的抗原
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
【实验内容】
玻片凝集： 常用已知抗血清检测未知抗原，定性 试管凝集：可检测未知的抗原或抗体并能报告凝集效价
实 验 要 求 与 实 验 室 规 则 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
实验课要求：
1. 课前预习，明确目的，了解实验内容与方法。阅读实验指导 2. 实验过程严肃认真，按实验规程操作，要有严格的科学态度 3. 仔细观察如实记录实验现象与结果，按时独立完成实验报告
实验室规则：
1. 进入实验室必须穿整洁的隔离衣，严禁在实验室内高声喧哗 2. 禁止在实验室内饮食，吸烟和做与实验无关的其他事情 3. 节约实验用品，爱护仪器设备，如有损坏及时报告老师 4. 强化安全意识，注意水电安全。值日小组认真整理卫生，
表面,再与相应抗体结合发生凝集反应。
具体实验内容与方法：
◆ 玻片凝集试验：伤寒沙门氏菌与痢疾志贺式菌的检测，用已知抗血清 检测患者体内未知抗原。 操作见实验指导
◆ 试管凝集试验（微量反应板法）：用已知颗粒性抗原与被检血清混合， 然后观察试管内有无凝集，并观察血清凝集效价，判断抗体浓度。
◆ 间接凝集试验（类风湿因子检测 RF）：属自身免疫性疾病 受外界刺激，机体IgG变性，产生抗原性（RF），刺激自身产生抗变性 IgG抗体，此抗体与RF因子结合形成免疫复合物沉积于病变部位。
小心加样！ 取U型微量反应板（做好个人或小组标记）
• 于两横排1～10孔中各加入生理盐水 每孔50μl。
• 分别在两横排的第1孔内加入1:20伤寒免疫血清 50μl， 每排各从第1孔开始作对倍稀释至第9孔， 从第9孔混匀后弃去50μl。
• 第一横排从第10孔至第1孔各加入伤寒沙门菌菌液50μl/孔 第二横排同法各加入甲型副伤寒沙门菌菌液50μl/孔。
1
2
取清洁玻片两张，用记号笔，玻璃蜡笔作出标记和画好 分区，按实验指导要求加样操作。
【方法】
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
1. 取洁净玻片2张，各用记号笔划分三等份。 2. 在玻片的左上角分别标记1和2。 3. 按下列要求依次加入反应物。各种加量均为20微升 4. 转动玻片，充分混匀1-2min后观察反应结果并作出解释。
解释说明出现凝集和不出现凝集的依据。
1●
●
2●
●
生理 盐水
+ 伤寒沙
门菌
1：20伤 血清
+ 伤寒沙
门菌
1：20痢 血清
+ 伤寒沙 门菌
生理 盐水
+ 痢疾志
贺菌
1：20伤 血清
+ 痢疾志 贺菌
1：20痢 血清
+ 痢疾志 贺菌
二、试管凝集反应 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
【实验原理】
将待检血清作对倍稀释后，加入等量的已知颗粒性抗原与待检 血清混合，抗原与不同稀释度的抗体在试管内直接结合而出现 的凝集现象称为试管凝集反应。此法是一种半定量法。 常用已知抗原(如细菌悬液，RBC悬液)来测定被检血清中 相应抗体的水平(效价或滴度)。 用于检测被检血清中是否存在和已知抗原相应的抗体 及抗体的效价：如；患者血清中免疫性抗体检测。
保持实验台面清洁整齐，实验废物放入指定的垃圾桶内。
临床免疫学实验指导 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
第一部分 抗原抗体反应
（Antigen-Antibody Reaction） 抗原抗体反应概念： 是指相应的抗原-抗体在体内或体外发生的特异性结
合反应。 主要应用： 1.用已知抗原检测未知抗体，抗体效价 2.用已知抗体检测未知抗原，明确病原生物 抗原-抗体结合反应常用实验方法：
例如 孕妇血清中免疫性IgG检测，用于新生儿溶血病的诊断、
病毒感染后，患者抗病毒抗体产生情况的观察
【材料】
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
1．1:20伤寒免疫血清。
2．伤寒沙门菌菌液，甲型副伤寒沙门菌菌液。
3．生理盐水，TIP头，微量移液器，
4. U型微量反应板。见下图
5．恒温培养箱等。
方法: 取U型微量反应板，做好标记，加样 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
抗原抗体反应示意图
NaCl
直接凝集反应
可见反应
实验一 凝集反应 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
定义： 凝集反应Biblioteka Baidu细菌、红细胞等颗粒性抗原或
表面覆盖抗原的颗粒状物质(如红细胞、聚苯乙 烯胶乳等)，与相应抗体结合，在一定条件下， 形成肉眼可见的凝集团块现象。
• 充分混匀后，置45℃恒温箱孵育1h后取出。 室温静置15min，最好在黑色背景下，观察并报告结果。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
血清对倍稀释方法：
• 用微量移液器将第1孔的溶液连续吸吹三次，使
其充分混匀。吸出50μl移入第2孔 。同法吸吹三次 使充分混匀后再吸出50μl移入第3孔，如此作对倍稀 释至第9孔，吸吹混匀后吸出50μl弃去。此时第1～ 9孔的血清稀释度依次增加一倍，即血清对倍稀释法 或倍比稀释法。
• 注意：做倍比稀释吸取时插到管底，吹出时离开
液 面，沿孔壁吹出。动作要连续轻巧，切勿出错
试管凝集试验操作与稀释图示 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
孔号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10