实验9细胞凝集反应及细胞吞噬
《细胞生物学实验》教学大纲
《细胞生物学实验》教学大纲课程名称：细胞生物学实验课程编号：12030037课程类别：专业基础课/必修课学时/学分： 24/0.75开设学期：第四学期说明一、课程性质细胞生物学实验是生物科学和生物工程专业一门重要的必修基础课程，在生命学科的本科教学中有着十分重要的地位。
通过实验，不仅使学生加深对细胞生物学理论知识的理解和认证，同时通过对细胞生命现象的观察和亲手操作，使学生获得有关细胞生命活动的感性知识，有效地提高理论课的教学效果，并使学生掌握细胞生物学实验的基本原理、方法和技能，培养和提高学生实验设计和应用各种实验技术的能力，培养和训练学生的创新意识和创新能力，培养严谨的科学态度和实事求是的作风，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力，为今后独立从事教学或科学研究打下坚实的基础。
二、教学目标通过细胞生物学实验，使学生们更加牢固地掌握细胞生物学基本知识和基本理论，对细胞的结构和功能有全面、真实的认识，使学生们掌握细胞生物学的基本实验方法和技能。
三、学时分配表序号实验项目实验时数实验类型内容与要求小计实验1细胞膜的渗透性及细胞凝集反应4设计性了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度，掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝集的原理实验2叶绿体的分离与荧光观察3验证性掌握荧光显微镜的原理和使用方法；观察叶绿体的自发荧光与次生荧光；通过对植物叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法实验3植物细胞骨架的观察4验证性掌握光学显微镜观察植物细胞骨架的原理和方法实验4鸡血细胞的体外融合6综合性了解PEG诱导细胞融合的基本原理，通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术实验5巨噬细胞吞噬现象的观察7综合性通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的活动观察，加深理解细胞吞噬作用的过程和意义；掌握小白鼠腹腔注射给药方法和颈椎脱臼处死法合计24四、实验方法与要求建议本课程采用传统的实验教学方法，2人一组操作，结合多媒体、小组讨论与集体讨论、实验设计、教学录像、细胞生物学小知识和小技巧介绍等多种教学手段，帮助学生通过本课程的学习全面地掌握细胞生物学的基本实验方法与技能以及实验设计的思路，以提高学生从事教学和科学研究的综合素质。
细胞生物学实验教学的改进优化
２ １ 年 ８月 ０２
宁德师范学院学报（ 自然科学 版）
Ｊｕｎｌｆ ｉｇｅＮ ｒ ｌ ｎｖｒｉ （ ａ ｒｌ ｃ ｎ ￣ ｏｒａｏ ｎ ｄ ｏｍａＵ ｉ ｓｙ Ｎ ｔ ａＳ ｉ ｃ Ｎ ｅ ｔ ｕ ｅ
Ｖｏ ．４ Ｎ ． １ ２ ｏ３
Ａｕ ２０１ ｇ． ２
・Hale Waihona Puke ２０ ・ ９ 宁德 师范 学 院 学 报（ 自然 科 学 版）
２１年 ８ ０２ 月
调整． 如不再单设“ 特殊显微镜及其使用” “ 、巨噬细胞吞噬现象的观察” 等基础性实验 ， 将其内容融合到其
他 实验 中讲 解并 指导 操作 来完 成 ， 设 “ 增 细胞 器 的分 离 ” “ 、细胞 的融合 ““ 胞 的悬 浮培 养 ” 、细 等综 合性 、 研 究性 实验 ； 用 实验 室 进行 的 植物 组 织培 养 对本 地 草莓 、 利 太子 参 等经 济植 物 进 行快 繁 与 脱毒 、 品 种诱 新 导 等 试 验 ， 细胞 生 物 学 实验 与实 践 技术 结 合 、 验 教学 与科 研 项 目相 结 合 ， 而 有 效 提 高《 将 实 从 细胞 生 物 学》 实验 教 学效 果 ．
１ 优化整合 实验 内容
细胞生物学实验教材中设置许多单项小实验 ， 在实验经费和实验学时有限的情况下 ， 若每个实验都 独 立单 设 ， 挤 占教 学 学 时 ， 学 进 度难 以 安排Ｉ为 丰 富实 验 内容 ， 得 更好 的教 学效 果 ， 者 将 实 验 内 将 教 ” ． 取 笔 容及项 目进行整合使其更加紧凑合理． 动物染色体标本的制备与观察 ” 染色体核仁组成 区的银染 如“ 与“ 色法 ” 实验 整合 ， 者 是在 前一 实验 标 本 制作 观察 基 础 上继 续 进行 的染 色实 验 ， 后 将其 合 并 ， 仅 可 以提 高 不 材料的使用价值而且 节省实验时 问． ． 笔者在进行实验 内容组合优化的同时 ， 还考 虑到实验材料 的有效利 用， 以达 到 “ 物尽 其 用 ， 约经 费 ”如 “ 节 ． 细胞 凝 集反 应 ” “ 、细胞 膜 的渗 透性 ” 以及 “ 子 的解 剖 ” 验 用 材 都 兔 实 为兔子 ， 笔者将“ 细胞凝集反应 ” 细胞膜 的渗透性 ” 和“ 两个实验进行合并优化 ， 并且统筹安排 ， 调整实验 教学时问， 兔子的解剖” 与“ 实验同步进行． 取兔血用于“ 细胞凝集反应” 细胞膜 的渗透性” 和“ 实验 ， 取血后 的兔子用 于解剖实验 ， 提高实验材料的利用率 ， 避免以往相 同实验材料重复采购 ， 一次实验只取材料 的
实验 光学显微镜的使用及显微绘图
100 1.25
分辨距离（d）
1μm
0.42μm
0.22μm
11
科勒照明
2019/2/6
优点：视场照明均匀，样品不受热，不产生耀眼眩光，影像清晰。
1893年德国杰出的学者August Kohler提出柯勒照明法。其具体做法：在光源与聚光器之
间，加放一光源聚光镜和视场光阑，光源聚光镜把光线集成光锥，使光源灯成像于聚光器的
2019/2/6
20
七、生物显微绘图
对标本进行镜检后，对一些要重点掌握的内 容，需要及时绘图记录观察结果。生物绘图不同
于一般的美术绘图，要求将所观察标本的外形和
内部结构准确地描绘，然后对各部分分别加以注
字说明。
2019/2/6
21
生物绘图方法
1．科学性和准确性
2．布局好
3．线条均匀划一 4．圆点衬阴，以示深浅。 5．图注用铅笔，用平行线引出。 6．写明题目、图题和放大倍数。
2019/2/6
14
低倍镜的使用
（1）检查：各部件有无损坏，如发现问题，立即报告教师请求处理。 （2）准备：将显微镜放于前方略偏左侧以便观察。打开电源开关，观察 底座的光路中是否有光亮。慢慢调节同一旋钮，光线应逐步增强。转动粗调 节钮，将载物台下降使物镜与载物台距离略拉开。再旋转物镜转换器，将低 倍镜4 X对准载物台中央的通光孔（可听到“咔哒”声）。 （3）放标本片：标本片标签面向上，用标本夹夹好，把要观察的部分移 到通光孔的正中央。 （4）调节焦距：边从目镜中观察，边调节粗聚焦旋钮，使载物台缓慢上 升，直至视野中出现物像为止。如物像不太清晰，可转动细调节钮，使物像
1细胞生物学实验细胞生物学实验1202111121光学显微镜的使用及显微绘图光学显微镜的使用及显微绘图2细胞膜的渗透性观察细胞膜的渗透性观察3液泡系的超活染色与观察液泡系的超活染色与观察4feulgen反应制作细胞反应制作细胞dna定性定定性定量测定样品量测定样品5减数分裂的观察减数分裂的观察6植物染色体标本的制备植物染色体标本的制备7动物染色体标本的制备动物染色体标本的制备8考马斯亮蓝染色显示细胞考马斯亮蓝染色显示细胞骨架骨架9细胞凝集反应及细胞吞噬细胞凝集反应及细胞吞噬10细胞融合细胞融合11染色体分带技术染色体分带技术实验实验1光学显微镜的使用光学显微镜的使用及显微绘图及显微绘
凝集实验_吞噬实验报告
一、实验目的1. 掌握凝集实验的基本原理和方法，了解其应用领域。
2. 学习吞噬实验的操作步骤，观察吞噬细胞的功能。
二、实验原理1. 凝集实验：凝集实验是利用抗原与抗体特异性结合，形成大分子复合物，从而引起颗粒性抗原聚集的现象。
凝集反应分为直接凝集反应和间接凝集反应。
直接凝集反应是指颗粒性抗原与相应抗体直接结合而出现的凝集现象；间接凝集反应是指将可溶性抗原预先吸附于一种与免疫无关的颗粒性载体表面，然后与相应的抗体结合，出现凝集现象。
2. 吞噬实验：吞噬实验是研究吞噬细胞吞噬作用的一种方法。
吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。
实验中，通过观察吞噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，可以判断吞噬细胞的杀伤能力，间接测定机体的非特异性免疫水平。
三、实验材料1. 实验仪器：显微镜、载玻片、滴管、离心机等。
2. 实验试剂：鸡红细胞、鸡血清、抗体、生理盐水、0.85%NaCl溶液、玻片凝集试剂等。
四、实验方法1. 凝集实验：（1）将鸡红细胞用生理盐水洗涤三次，去除杂质。
（2）将洗涤后的鸡红细胞加入抗体中，充分混合。
（3）观察鸡红细胞是否出现凝集现象。
2. 吞噬实验：（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。
（3）30分钟后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管。
（4）用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片上。
（5）滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。
（6）高倍镜下进行观察，计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目。
五、实验结果与分析1. 凝集实验结果：鸡红细胞与抗体结合后，出现明显的凝集现象。
2. 吞噬实验结果：（1）在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象。
（2）计算吞噬红细胞的百分数和吞噬指数。
（3）分析吞噬细胞的功能及其与机体非特异性免疫水平的关系。
六、实验结论1. 凝集实验结果表明，鸡红细胞与抗体结合后，出现明显的凝集现象，验证了凝集实验的基本原理。
《医学免疫学与病原生物学》实验报告
《医学免疫学与病原生物学》实验报告
一、免疫学部分
实验一
三、血清中Ig的测定
1.原理
2.结果
四、中性粒细胞的吞噬作用（画图）淋巴细胞转化试验
五、双向琼脂扩散试验
1.原理
2.结果与分析（画图）
六、酶联免疫吸附试验
1.原理
2.结果与分析
七、豚鼠过敏性休克试验
1.原理
2.结果与分析
八、常用生物制品的种类
1.死疫苗
2.活疫苗
3.血清制品
4.其它
二、微生物学部分
一、革兰染色结果
混合菌液（1000X）
葡萄球菌：革兰染色性
大肠杆菌：革兰染色性
二、观察细菌的基本形态
葡萄球菌链球菌
1000X 1000X
痢疾杆菌霍乱弧菌
1000X 1000X
三、观察细菌的特殊结构
1000X 1000X
伤寒杆菌的鞭毛
1000X。
免疫学实验整理
免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。
2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。
4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。
5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。
6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。
细胞实验预习报告
实验一细胞凝集反应实验目的：1.了解细胞膜表面结构。
2.掌握凝集素促使细胞凝集的原理。
3.学习研究细胞凝集反应的方法。
实验原理：凝集素是一类含糖、并能与糖专一结合的蛋白质，被认为与糖的运输、储存物质的积累、细胞间的互作以及细胞分裂的调控有关。
凝集素使细胞凝集是因为它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞发生凝集。
大多数凝集素存在于储藏器官中，作为一种氮源；对某些植物而言，受到危害时，凝集素作为一种防御蛋白发挥作用。
凝集素与糖结合的活性及专一性决定其功能。
实验材料及试剂：1.马铃薯块茎2.显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支3.PBS缓冲液4.2%的红细胞液实验步骤：1.制备鸡血悬液：取1ml鸡血于离心管中，加食盐水至5ml，用滴管吹打均匀，平衡后放入离心机中，2000r/min来离心5min。
离心完毕后，将上清液倾倒再加食盐水至5ml，2000r/min，离心5分钟。
连续重复5次，最后得到的鸡血细胞再加入食盐水至5ml，即为2%的红细胞悬液。
2.取两个玻片，分别向两玻片上滴加一滴鸡血。
向其中一个鸡血玻片上再滴加一滴土豆凝集素，另一玻片不加，作为对照。
然后同时向两玻片滴加一滴PBS缓冲液，静置5min，观察血细胞的凝集反应。
注意事项：1.注意控制加入双凹片孔中的液体的量，以免双凹片的2个孔中液体混合。
2.样品加到孔中后，摇一下双凹片，并进行计时。
实验二叶绿体的分离与荧光现象实验目的:1.通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。
2.观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。
实验原理：将组织匀浆悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞的常用方法。
由于沉降系数和所受到的离心力的不同以及自身性质的不同，可用不同的转速来分离出不同的细胞器。
荧光显微技术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观测的一种技术。
某些物质在一定短波长的光的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时就能在极端的时间内射出比照射光波长更长的光，这种光称为荧光。
免疫学实验指导
免疫学实验指导生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用冯玉萍[分组]：4人/组，实验用动物、器材以每组需要量设计[班级] 2006生物工程、生物技术[学生人数]：65人/58人。
分16组/15组[时间] 2008年3月—2008年7月两周一次4学时。
目录实验一、免疫学实验动物的一般操作实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法实验四、淋巴细胞别离与E玫瑰花环形成试验实验五、IgG的别离和纯化实验六、玻片凝集试验(ABO血型鉴定)实验七、环状沉淀试验实验八、琼脂扩散试验〔单向〕实验九、巨噬细胞吞噬功能试验实验十、白细胞吞噬试验实验一、免疫学实验动物的一般操作[实验原理]实验动物的基本操作是免疫学实验的基础,抗原对动物机体的免疫效果，通过实验动物进行验证，因此必须掌握实验动物的一般操作技术。
[目的要求]1、实验材料的准备〔棉球、注射器的准备与消毒〕〔演示〕2、了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。
[自学]3、学习实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。
4、练习对小白鼠给药的几种不同途径的注射方法。
5、练习小白鼠的取血方法。
6、学习血涂片的制作及染色；观察动物血液中有形成分的形态结构特点。
[实验动物]小白鼠，2只/组，共需18 ~ 20只。
[试剂]⑴3%来苏儿或3%石炭酸100~150 ml/组；⑵无菌生理盐水100~150ml/组；磷酸盐缓冲液20~50ml/组〔带滴管、染色用〕。
⑶3 ~ 5% 苦味酸20~50ml/组〔带滴管,编号用〕；⑷5%品红20ml~50ml/组〔带滴管，编号用〕；⑸瑞特氏〔wright‘s〕染色液50ml/组〔带滴管，染色用〕；*抗凝剂一支[器材]⑴1ml注射器及针头2支/组；⑵碘酒棉球、酒精棉球、无菌干棉球各适量；⑶手术剪刀2把/组；镊子2把/组；载玻片、盖玻片各6片/组；⑷毛细吸管2支、50—100ml烧杯1个/组⑸显微镜6台/组[6] 鼠笼1个/组[操作步骤]1、练习小白鼠抓取、编号、皮下注射、皮内注射、腹腔注射的方法。
凝集反应名词解释
凝集反应名词解释凝集反应是指一种生物学现象，当两个或更多细胞或颗粒结合在一起形成团块或集群的过程。
这种反应通常发生在生物体的发育和免疫系统中，起着维持细胞结构和功能，以及保护机体免受外部侵害的重要作用。
在细胞发育过程中，凝集反应在胚胎形成、器官建立和组织分化等方面起着至关重要的作用。
在胚胎发育早期，细胞在形成不同器官和组织的过程中会产生凝集反应。
这些反应有助于细胞定位和分化，并且在细胞极化、胞外基质形成和组织分化中发挥重要作用。
在免疫系统中，凝集反应是指当抗原与抗体结合时，形成的复合物会引起免疫细胞的聚集。
这些复合物能够激活细胞介导的免疫应答，如吞噬细胞和细胞毒性T细胞的活化。
这种凝集反应有助于机体识别和清除外来病原体，并激活免疫应答以保护机体免受感染。
凝集反应的产生通常是通过黏附分子在细胞表面或颗粒之间的相互作用来实现的。
这些黏附分子可以是细胞膜上的特定受体，也可以是细胞外基质分子。
黏附分子之间的结合力通过一些力的作用来实现，如范德华力、电荷相互作用力和亲和力等。
当这些相互作用力超过分离力时，细胞或颗粒之间就会发生凝集反应，形成团块或集群。
凝集反应的研究对于理解生物体的发育、免疫和疾病等方面具有重要意义。
通过深入研究凝集反应的机制和调节作用，可以揭示生物体内细胞之间相互作用的分子基础，以及细胞集群形成和分化的调控机制。
此外，可以利用凝集反应来开发新型的治疗策略和诊断方法，如抗体药物和凝集试剂盒等。
总之，凝集反应是指细胞或颗粒结合在一起形成团块或集群的生物学现象。
它在胚胎发育和免疫系统中起着重要作用，有助于维持细胞结构和功能，并保护机体免受外部侵害。
研究凝集反应对于理解生物体的发育、免疫和疾病等方面具有重要意义，可以为新型治疗策略和诊断方法的开发提供参考。
协同凝集反应+金葡菌
Ab最终稀释度 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 － ++++
4. 现象 ＋＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋
＋
＋
－ － 1:320
+++
++ ++ +
医学免疫学实验
• 一、凝集试验、吞噬试验 • 二、沉淀试验、溶血反应 • 三、免疫标记技术；
免疫细胞的分离； 细胞免疫功能测定
实验一
• （一）凝集试验 • 1、直接凝集反应（ABO血型鉴定） • 2、间接凝集反应（类风湿因子测定） • 3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验 • （二）吞噬试验（示教）（310室） • 1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬） • 2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）
33
• So, • Titer, 1:320 ( or 320), • Titer, 1:160 ( or 160), • Titer, 1:20 ( or 20),
34
• If Titer ＞ 1:40 (or ＞ 40 ), positive (Ab positive) • If Titer ＜ 1:40 (or ＜ 40 ), negative (Ab negative)
++++
+
Agglutination
(result 3)
deposition
++++ +++ +++ ++ ++ -
-
-
-
1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120
《病原生物学和免疫学》实验大纲
《病原生物学和免疫学》实验教学大纲课程编号: 40921105课程类别: 专业基础课实验学时: 26学时学分: 1.5适用专业: 护理学本科一、实验教学目的和任务《病原生物学和免疫学》实验是为了使学生牢固掌握病原生物学和免疫学的基本方法与实验技术；加深学生对病原生物学和免疫学基本理论的理解；同时通过实验, 培养学生观察问题、提出问题、分析问题和解决问题的能力；培养学生实事求是、严谨踏实的科学态度和良好作风, 以及敢于创新的开拓精神；也为学生进一步深入学习其他医学相关学科奠定基础。
二、实验教学基本要求1.每次实验前必须充分预习实验内容, 明确实验目的、原理、方法以及操作中的注意事项,保持思路清晰。
2.在实验过程中, 应持严肃认真的科学态度, 并要注意合理地分配和利用时间。
3.认真及时做好实验记录, 对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验, 则需要记下每次观察的现象和结果, 以便分析。
4、在微生物学的整个实验过程中, 应严格加强“无菌观念”的培养和训练。
5、每次的实验结果, 应以实是求实的科学态度填入实验报告, 力求简明准确, 并及时汇交教师批阅。
如实验结果与理论不符, 应分析原因, 训练科学思维的能力。
三、实验教学内容实验项目一1.实验项目名称: 溶菌酶的溶菌试验2、实验内容提要:（1）制备含溶壁微球菌的琼脂平板。
（2）打孔凝固后, 用打孔器打孔, 孔间距1.5－2cm。
（3）加样周围四孔分别加入5.25.100、500μg溶菌酶标准品。
（4）结果观察各孔周围溶菌情况, 测量溶菌环直径。
实验项目二1.实验项目名称: 白细胞吞噬试验2、实验内容提要:（1）吸取肝素加于凹玻片内。
（2）取耳垂血0.04ml, 放在有肝素的凹玻片内, 摇匀。
（3）取葡萄球菌培养液0.02ml加于有抗凝血的凹玻片内, 摇匀。
（4）将凹玻片直于湿盒中, 37℃30分钟, 每10分钟摇匀一次。
（5）取一滴全血菌液混合液, 置载玻片上, 推片, 待干。
试验一细胞凝集反应
实验一细胞凝集反应实验目的通过对红细胞凝集现象的观察，加深理解细胞外被的结构及其功能。
实验原理细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。
目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。
凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。
凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。
实验用品1. 土豆块茎。
2. 显微镜、粗天平、载玻片、滴管2支、离心管2支。
3. PBS缓冲液称取NaCl 7.2g、Na2HPO4 1.48g、KH2PO4 0.43g、加蒸馏水，定容至1000ml，调pH值到7.24. Alsever溶液：葡萄糖 2.05g柠檬酸钠0.89g柠檬酸0.05g氯化钠0.42g蒸馏水100ml调节pH到7.2，高压灭菌10min，置4℃冰箱保存。
5. 1%的红细胞悬液的制备从集市杀鸡处取血，按1ml血加4ml Alsever溶液的比例迅速混匀，置于4℃冰箱保存备用（一周内使用）。
使用前加入0.85%生理盐水离心（2000r/min，5min）洗涤二次，最后按红细胞压积体积用生理盐水配成1%红细胞液。
实验方法1. 称取土豆去皮块茎2g,加10ml PBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素。
2. 用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20min后于低倍显微镜下观察血球凝集现象。
3.以PBS液加2%红细胞液作对照实验。
实验作业1.绘制鸡红细胞凝集图2.用简图表示凝集素使红细胞凝集的原理实验二巨噬细胞吞噬现象观察实验目的一、通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其意义。
二、掌握小鼠腹腔注射给药和脊椎脱臼处死方法。
细胞生物学
“细胞生物学”教学大纲Cellular Biology课程编号：07100023学时/学分：42/2.5一、大纲编写说明本大纲根据长沙理工大学生物工程专业2006版本科培养计划制定。
（一）教学对象本大纲适用于生物工程专业本科学生。
（二）课程性质专业必修课。
（三）教学目的与要求通过本课程的学习，使学生在细胞整体、超微结构和分子水平上掌握细胞的结构、生物学功能以及结构与功能相互关系方面的基本知识，掌握细胞在执行生命活动中的动态变化规律，理解细胞作为生物体最基本的结构单位的生命本质，从而认识生命即是细胞属性的反映。
（四）主要先修课程和后续课程主要先修课程：基础生物学，生物化学，微生物学。
主要后续课程：分子生物学，组织培养技术，工业微生物育种学。
（五）教学方式、重点和难点1．教学方式。
理论教学与实验教学结合进行，适当安排一些课堂讨论。
实验课适当安排一些综合型和创新型实验内容；野外调查与实验室观赏标本制作等操作结合进行。
2．教学重点。
（1）生物膜的结构功能：质膜的结构，物质跨膜运输，内膜系统构成的各类细胞器的结构功能、蛋白质的分选与定向转运。
（2）细胞的纤维网络结构：包括细胞连接、细胞粘附分子、细胞骨架、细胞外基质的组成、功能、相互关系，在细胞分化、迁移、癌变等方面的意义。
（3）细胞核、染色体、基因的结构、功能及调控机制：鉴于本系“分子生物学”课程中已经对基因调控有详细的讲解，本课程主要偏重于对细胞核结构和细胞通讯的分子机理的讲解。
（4）细胞生活史：包括细胞周期及其调控机理，细胞的分化、衰老、程序化死亡及肿瘤细胞生物学。
3．教学难点。
生物膜的功能和细胞的生活简史为本课程的教学难点。
（六）考核方式本课程为考试课程，期末闭卷笔试占70％，实验课占30％。
二、教学内容第一章绪论（2课时）了解细胞的发现，细胞学说的提出，细胞生物学的形成和发展；当代细胞生物学研究内容与学习方法；对未来的展望。
第二章细胞基本知识概要（7课时）了解和掌握细胞的形态、结构、化学成分和功能，病毒及其与细胞的关系，病毒在细胞内的增殖，原核细胞与真核细胞的关系等。
细胞及遗传学实验
细胞及遗传学实验目录实验一细胞膜的渗透性 (1)实验二细胞凝集反应 (2)实验三巨噬细胞吞噬现象的观察 (3)实验四线粒体和液泡系的超活染色与观察 (6)实验五 DNA的Feulgen染色法 (10)实验六动物染色体标本的制备与观察 (12)实验七植物染色体标本的制备与观察 (15)实验八联会复合体的染色与观察 (17)实验九果蝇的形态和生活史观察 (18)实验十果蝇唾腺染色体标本的制备与观察 (21)实验十一人体X～染色质（巴尔小体）的观察 (22)实验十二人体外周血细胞培养及染色体制备和观察 (24)实验一细胞膜的渗透性实验目的了解细胞膜的渗透性及各种物质进入细胞的速度。
实验原理将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血。
由于溶质透入速度互不相同。
实验用品一、器材50ml小烧杯，10ml移液管，试管（1～10ml）,试管架。
二、氯化试剂0.17mol/L 氯化钠、0.17mol/L氯化铵、0.17mol/L醋酸胺、0.17mol/L硝酸钠、0.12mol/L 草酸铵、0.12mol/L硫酸钠、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L 丙酮。
三、材料兔血。
实验方法一、兔血细胞悬液取50ml小烧杯一只，加1份兔血和10份0.17mol/L 氯化钠溶液，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的兔血。
二、低渗溶液取试管一支，加入10ml蒸馏水，再加入1ml稀释的兔血，注意观察溶液颜色的变化，由不透明的红色逐渐澄清，说明红细胞发生破裂造成100%红细胞溶血，使光线比较容易透过溶液。
三、兔红细胞的渗透性1．取试管一支，加入0.17mol/L 氯化钠溶液10ml，再加入1ml稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？为什么？2．取试管一支，加入0.17mol/L氯化铵溶液10ml，再加入1ml稀释的兔血，轻轻摇动，注意颜色有无变化？有无溶血现象？若发生溶血，记下时间（自加入稀释兔血到溶液变成红色透明澄清所需时间）。
9血液系统疾病
1．缺铁性贫血病人实验室检查有哪些主要改变?(1)血细胞形态学检查，表现为小细胞低色素性贫血。
(2)骨髓增生活跃或明显活跃，红系增生为主，红系中以早、中幼红细胞为主，粒系、巨核系无明显异常。
(3)骨髓铁染色：骨髓涂片铁染色外铁消失，铁粒幼细胞减少或消失，铁粒幼红细胞少于15％。
(4)血清铁降低，血清总铁结合力增高，血清铁转蛋白饱和度降低。
(5)血清铁蛋白的浓度降低。
(6)红细胞游离原卟啉增高。
2．小细胞性贫血见于哪些疾病?①铁粒细胞性贫血。
②海洋性贫血。
③慢性病性贫血。
④转铁蛋白缺乏症。
3．诊断溶血性贫血的实验室检查有哪些方法?(1)提示血管内溶血的检查：①游离血红蛋白增高。
②血清结合珠蛋白降低。
③血红蛋白尿。
④含铁血黄素尿。
(2)提示血管外溶血的检查：①总胆红素增高，以血游离的胆红素增高为主。
②24小时粪胆原和尿胆原排出量增加。
(3)提示骨髓代偿增生的实验室检查：①网织红细胞增多。
②周围血中可见幼稚血红细胞，常见晚幼红细胞，严重溶血可见幼粒细胞。
③骨髓幼红细胞增生。
(4)提示红细胞有缺陷、寿命短的实验室检查：①红细胞形态改变，出现畸形红细胞。
②红细胞吞噬现象及自身凝集反应。
③海因小体。
④红细胞渗透脆性。
⑤红细胞寿命缩短。
4．试述Coombs试验和Ham试验的临床意义oCoomb，试验即直接抗人球蛋白试验，其阳性是温抗体型自体免疫性溶血性贫血的重要指标。
Ham试验即酸化血清溶血试验(亦称酸溶血试验)，是确诊阵发性睡眠性血红蛋白尿的重要依据。
5．试述脾功能亢进的诊断标准。
①脾脏肿大，肋下未扪及者B超检查可供参考。
②外周血细胞减少，其中红细胞、白细胞或血小板可单一或同时减少。
③增生性骨髓象。
④脾切除后可使外周血象接近或恢复正常。
6．试述脾功能亢进行脾切除术的指征。
脾功能亢进脾切除的指征：①脾大显著，造成明显压迫症状。
②严重溶血性贫血。
③相当程度血小板减少及出血症状。
④粒细胞极度减少，并有反复感染史。
实验9细胞凝集反应及细胞吞噬
• 重度消化：鸡红细胞核模糊，核肿胀， 染色淡，胞质浅染，核呈浅灰黄色
• 完全消化：鸡红细胞核溶解，染色极淡， 巨噬细胞内只见形状类似鸡红细胞大小 的空泡，边缘整齐，核隐约可见。
五、实验结果
2、细胞吞噬
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六、讨论与思考题
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四、实验步骤
1、细胞凝集
• 2%鸡红细胞悬液制备（已完成）
• 凝集素粗提液制备：将去皮的土豆块茎2 g在10 mL PBS缓冲 液中浸泡2 hr后，PBS液中含有可溶性土豆凝集素。
• 细胞凝集反应现象的观察：用滴管吸取土豆凝集素粗提液和 2%鸡红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20 min 后于低倍显微镜下观察。
• 颈椎脱臼法处死小鼠，暴露小鼠腹腔，将内脏推向一侧， 用滴管吸取腹腔液。
• 滴1滴腹腔液在干净的载玻片上，静置5-10分钟，使腹水 细胞贴壁。
• 待其稍干后，进行瑞氏染色。加上盖玻片，显微镜下观察。
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五、实验结果
1、细胞凝集
对照组
实验组
PBS+2%血细胞液
凝集素+2%血细胞液
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实验 9
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细胞凝集反应及细胞吞噬
一、实验目的
1．掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝聚的原理。 2．观察凝集的现象。 3．了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理。 4．熟悉细胞吞噬作用的基本过程。
二、实验原理
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• 动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜表面， 它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的 必要组分。凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖 专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞 分裂的作用。
中性粒细胞和巨噬细胞吞噬功能测定
实验报告使用油镜时，需在玻片上滴加香柏油的原理是由于自标本玻片透过的光线，因介质（玻片一空气一接物镜）密度不同，部分光线发生折射而散失（如图中A—A'）使射入物镜的光线减少，在使用高、低倍镜时，透镜的孔径比较大，影响尚不显著；但应用油镜头时，因透镜的孔径小，进入的光线则不够，致使物象显现不清。
当油镜与标本片之间加香柏油后，香柏油的折射率（n=1.515）和玻璃的折射率（n=1.52）相近似，因此可增加进入透镜的光线（如图中C—C'），使视野的亮度加强，物象也就看得清楚。
5. 瑞氏染色1）原理：瑞氏染色法使细胞着色既有化学亲和反应，又有物理吸附作用。
瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料美蓝的氧化物（天青）组成，其深于甲醇后，解离为带正电的美蓝和带负电的伊红离子。
各种细胞由于其所含化学成分不同，对染料的力也不一样，因此，染色后各细胞呈现出各自的染色特点。
2）配制：（1）A液：瑞氏染粉0.1g，甲醇(AR）60ml。
将瑞氏染粉放入清洁干燥研钵中，先加少量甲醇，充分研磨使染料溶解，将已溶解的染料倒入棕色试剂瓶中，未溶解的再加少量甲醇研磨，直至染料完全溶解，甲醇全部用完为止。
染液配好后放于室温下，一周后即可使用。
（2）B液：瑞氏染液B液为磷酸盐缓冲液，其配制方法为：称取磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水）0.2g；加蒸馏水至1000 ml使其溶解。
配好后的磷酸盐缓冲溶液应校正pH值，其范围在pH6.4～6.8即可，然后塞紧瓶口备用。
摇匀。
对小鼠进行及时止血，否则易失血过多而死亡。
3.向含血液的小试管加入菌液：向小试管加入菌液后用塑料吸管吹洗三次，充分混匀，使血液中的吞噬细胞和细菌充分接触，促进吞噬。
4.水浴：37℃水浴锅中保温20分钟，每隔10分钟取出小试管混匀1次，以使吞噬细胞与细菌充分接触和作用，促进吞噬。
（吞噬细胞的活性在接近体内温度的条件下最强，温度太高细胞活性下降且容易死亡）5.血涂片的制作：在载玻片的一端滴加一滴水浴后的血液，用另一个载玻片与载玻片间角度30°推片，用力匀，勿使太薄（白细胞多集中于边缘）或太厚（细胞重叠缩小）于玻片上影响标本的清晰度。
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三、实验用品
• 1 ．器材：显微镜、解剖器械、小烧杯、载玻片、盖玻片、 滴管、吸水纸 • 2 ．材料：凝集---土豆块茎、鸡红细胞 吞噬---小白鼠、鸡红细胞
• 3 ．试剂：鸡红细胞悬液，凝集素粗提液，PBS缓冲液，
Alsever血液保存液，2%的可溶性淀粉溶液， 0.85%生理盐水，瑞氏染液(美蓝-伊红Y)
专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞
分裂的作用。 • 凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连
接，在细胞间形成“桥”的结果。凝集素与糖分子
结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体 的分布有关。
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二、实验原理
• 吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是
高等动物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物 内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬 功能。当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬 细胞由于具有趋化性，会向异物处聚集，将其内吞 入细胞质，形成吞噬泡，然后吞噬泡与溶酶体融合， 将异物消化分解。 • 通过观察细胞对鸡红细胞的吞噬，计算吞噬百分数 和吞噬指数，可以分析判断动物个体的免疫水平。
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实验 9 细胞凝集反应及细胞吞噬
一、实验目的
1．掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝聚的原理。 2．观察凝集的现象。 3．了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理。 4．2
二、实验原理
• 动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜表面，
它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的 必要组分。凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖
2018/8/1
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四、实验步骤
1、细胞凝集
• 2%鸡红细胞悬液制备（已完成）
• 凝集素粗提液制备：将去皮的土豆块茎2 g在10 mL PBS缓冲
液中浸泡2 hr后，PBS液中含有可溶性土豆凝集素。 • 细胞凝集反应现象的观察：用滴管吸取土豆凝集素粗提液和 2%鸡红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20 min 后于低倍显微镜下观察。
• 颈椎脱臼法处死小鼠，暴露小鼠腹腔，将内脏推向一侧， 用滴管吸取腹腔液。 • 滴1滴腹腔液在干净的载玻片上，静置5-10分钟，使腹水 细胞贴壁。 • 待其稍干后，进行瑞氏染色。加上盖玻片，显微镜下观察。
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五、实验结果
1、细胞凝集
对照组 实验组
PBS+2%血细胞液
凝集素+2%血细胞液
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五、实验结果
2、细胞吞噬
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六、讨论与思考题
• 绘图表示镜检时你所能看到的各种细胞类型及其形态。 • 细胞凝集实验中，为什么对照组使用PBS溶液作对照？ • 描述小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，并分 析吞噬作用的生理意义。
实验组 对照组
凝集素1滴 PBS溶液1滴
红细胞悬液1滴 红细胞悬液1滴
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四、实验步骤
2、细胞吞噬
• 实验前3天，每天向小鼠腹腔注射2%的可溶性淀粉1mL。 实验前1小时，向腹腔内注射1%鸡红细胞1mL，轻揉腹部， 使鸡红细胞分散（已完成）
2018/8/1
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四、实验步骤
2、细胞吞噬
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五、实验结果
1、细胞凝集
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五、实验结果
未染色的： 鸡红细胞是淡黄色、椭圆形有核的细胞；较大的圆形或不规 则的细胞，表面具有许多似刺毛状的小突起的是巨噬细胞。
2、细胞吞噬
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五、实验结果
2、细胞吞噬
鸡红细胞被消化程度（染色后）
• 未消化：鸡红细胞核清晰，着色正常， 胞质浅红色，细胞核蓝或紫红色 • 轻度消化：鸡红细胞胞质深黄绿色，核 固缩，紫红色 • 重度消化：鸡红细胞核模糊，核肿胀， 染色淡，胞质浅染，核呈浅灰黄色 • 完全消化：鸡红细胞核溶解，染色极淡， 巨噬细胞内只见形状类似鸡红细胞大小 的空泡，边缘整齐，核隐约可见。