石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别
石蜡切片和冷冻切片之欧阳学文创编
石蜡切片和冷冻切片——傻傻分不清楚系列欧阳歌谷（2021.02.01）在组织实验中，组织切片和冷冻切片是最常见的两种切片方法，两种优缺点明显，在实验的应用上也大有不同。
而两个实验的相同点都是应用免疫学基本原理——即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内蛋白质，对其进行定位、定性及相对定量的研究。
一、石蜡切片组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。
石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
1、固定：将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜。
凝固组织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。
同时能使组织硬化，有利于切片的进行。
2、脱水：为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。
固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。
3、透明：常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。
纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。
材料块在透明剂浸渍过程称透明。
4、浸蜡：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。
先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。
5、包埋：以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。
6、切片：切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。
通常切片厚度为5微米，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片。
7、贴片与烤片：将水浴中展片捞至玻片上铺正，然后将载玻片放入37℃温箱中干燥。
8、切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。
石蜡切片VS冰冻切片
石蜡切片V S冰冻切片石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。
冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法。
制作过程较石蜡切片快捷、简便，因而多应用于手术中的快速病理诊断。
实验步骤一、石蜡切片1.?固定：将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜。
凝固组织中的物质成分，尽可能保持其活体时的结构。
同时能使组织硬化，有利于切片的进行。
2.脱水：为了减少组织材料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时。
固定后的组织材料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果。
3.透明：常用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂。
纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精。
材料块在透明剂浸渍过程称透明。
?4.浸蜡：先把组织材料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时。
先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右。
5.包埋：以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定。
6.切片：切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度。
通常切片厚度为3-5um，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片。
7.贴片与烤片：一般使用恒温水浴锅，温度控制在37-40℃左右，有利于石蜡切片的展开，贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋白质凝固后即可染色。
8.切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递减的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化。
9.染色：经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精染成紫蓝色，多数细胞质及非细胞成分被伊红染成粉红色。
实验操作简单。
免疫组化：指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应。
石蜡切片与冰冻切片
石蜡切片与冰冻切片一、组织和细胞标本类型：（一）组织标本类：1、石蜡切片：组织形态保存好2、冰冻切片：抗原性保存好（二）细胞标本类：1、组织印片2、细胞培养片（细胞爬片）3、细胞涂片二、组织取材1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后，再进行后固定。
2、组织取材注意事项：（1）标本新鲜：组织要求离体后30min~2h内浸入固定液，尤其是开展分子生物学工作。
动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。
（2）注意防止人为因素的影响刀和剪要快，避免挤压。
（3）组织块的大小厚为0.1~0.3cm，大小可根据需要而定。
三、活细胞标本的制备法（1）细胞大量培养后，经消化将细胞制成悬液（106）涂在涂有切片粘合剂的载玻片上，凉干后固定。
（2）将细胞直接培养在盖玻片上。
（3）将细胞直接培养在6孔或9孔板上，经固定后可行IHC。
四、石蜡切片的制备1、由于石蜡不溶于水和醇类试剂，只溶解在二甲苯类试剂中。
因而，组织经固定和水洗后含大量水分，需用乙醇类试剂进行脱水，水脱完后，组织内含有大量的乙醇，还必须用能溶解乙醇的二甲苯来置换，最后经浸蜡，组织细胞内被大量石蜡支称，才使组织能用于石蜡切片。
2、小动物组织脱水、透明和浸蜡时间75%乙醇30min，85%乙醇30min，95%乙醇Ⅰ1h，Ⅱ1h，Ⅲ过夜或2h；无水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min；二甲苯Ⅰ15min，Ⅱ10min，Ⅲ10min；石蜡Ⅰ30min，石蜡Ⅱ30min，石蜡Ⅲ1~2h。
五、冰冻切片的保存和使用1、冰冻切片固定后-80℃保存备用2 、冰冻切片从-80℃取出，凉干或电吹风吹干后可直接进行免疫组化标记。
冰冻切片与石蜡切片的区别
1．冰冻切片是免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法。
其最突出的优点是能够较完好地保存多种抗原的免疫活性,尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。
冰冻时，组织中水份易形成冰晶,往往影响抗原定位。
一般认为冰晶少而大时,影响较小,冰晶小而多时，对组织结构损害较大，在含水量较多的组织中上述现象更易发生。
冰晶的大小与其生长速率成正比，而与成核率（形成速率)成反比,即冰晶形成的数量愈多则愈小,对组织结构影响愈严重。
因此,应尽量降低冰晶的数量。
Fiｓh认为冰冻开始时,冰晶成核率较慢,以后逐渐增加，其临界温度为-3３。
C，从-3０。
C降至-43。
C之间，成核率急剧增加达1018，然后再减慢。
基于上述理论可采取以下措施减少冰晶的形成。
(1)速冻,使组织温度骤降，缩短从-３３。
C43。
C的时间,减少冰晶的形成。
其方法有二：①干冰-丙酮（酒精)法：将15０－２00ｍｌ丙酮(酒精）装入小保温杯内，逐渐加入干冰,直至饱和呈粘稠状,再加干冰不再昌泡时,温度可达-７0℃C，用一小烧杯(50－100ml)内装异戊烷约50ml，再将烧杯缓慢置入干冰丙酮(纯酒精)饱和液内,至异戊烷温度达-7０℃时即可使用。
将组织(大小为1cm×0.8ｃｍ×0.5cm）投入异戊烷内速冻３０-6０s后取出，或置恒冷箱内以备切片，或置-80℃低温冰箱内贮存。
②液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约２cm），如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织,然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内,当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒保持原位切勿浸入液氮中,大约10-2０s组织即迅速冰结成块。
取出组织冰块立即置入－80℃冰箱贮存备用,或置入恒冷箱切片机冰冻切片。
（2)将组织置于20%-30%蔗糖溶液1~３天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。
影响冰冻切片的因素较多，因此，技术难度较大，选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键。
免疫组化（IHC）经验超全总结
免疫组化（IHC）经验超全总结做过病理实验的人都知道，实验看似容易，但真想把它做好，还是需要花上很长一段时间去积累和摸索经验。
我从事病理实验已有6年多了，在这段时间里，我做过许许多多病理相关实验，刚开始啥也不懂，一味按照网上操作流程来做，但做的结果往往并不是十分理想，最终结果未能达到预期的效果。
经过一段时间的浏览和学习，在论坛内学习、请教，并结合实践操作，我经历了初级——查找资料和摸索方法；中级——问题求助和不断总结；高级——难题解答和经验分享这三个阶段，也学到了不少知识，积累了很多宝贵经验，与大家一起分享。
一、石蜡切片和冰冻切片的比较？1.要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。
因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
2.冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。
缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。
当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
3.石蜡切片的优点是可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80oC的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的切片，为了防止RNA降解，保存一贯很重要。
由于石蜡切片可以切到4μm左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
1.单克隆和多克隆抗体的选择。
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。
单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。
另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。
在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
石蜡切片和冷冻切片
石蜡切片和冷冻切片——傻傻分不清楚系列之迟辟智美创作在组织实验中，组织切片和冷冻切片是最罕见的两种切片方法，两种优缺点明显，在实验的应用上也年夜有分歧.而两个实验的相同点都是应用免疫学基来源根基理——即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标识表记标帜抗体的显色剂显色来确定组织细胞内卵白质，对其进行定位、定性及相对定量的研究.一、石蜡切片组织学惯例制片技术中最为广泛应用的方法.石蜡切片不单用于观察正常细胞组织的形态结构，也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变动的主要方法，而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中.1、固定：将新鲜组织切成小块，固定于4%多聚甲醛过夜.凝固组织中的物质成份，尽可能坚持其活体时的结构.同时能使组织硬化，有利于切片的进行.2、脱水：为了减少组织资料的急剧收缩，应使用从低浓度到高浓度递增的顺序进行经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为1小时.固定后的组织资料需除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀，否则会影响后期的染色效果.3、透明：经常使用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂.纯酒精不能与石蜡相溶，还需用能与酒精和石蜡相溶的溶剂，替换出组织内的酒精.资料块在透明剂浸渍过程称透明.4、浸蜡：先把组织资料块放在熔化的石蜡和二甲苯的等量混合液浸渍1小时.先后移入2个熔化的石蜡液中浸渍1小时左右.5、包埋：以少许热蜡液将其底部迅速贴附于包埋盒内上，然后置于速冻台，让石蜡固定.6、切片：切片刀的锐利与否、蜡块硬度是否适当都直接影响切片质量，可将蜡块至于冷水中改变蜡块硬度.通常切片厚度为5微米，用毛笔轻托轻放在37度水浴中展片.7、贴片与烤片：将水浴中展片捞至玻片上铺正，然后将载玻片放入37℃温箱中干燥.8、切片脱蜡及水化：干燥后的切片置于二甲苯中进行脱蜡，然后依次使用从高浓度到低浓度递加的顺序进行经纯酒精、95%、85%、70%进行水化.9、染色：经典的苏木精和伊红：细胞核被苏木精染成紫蓝色，大都细胞质及非细胞成份被伊红染成粉红色.实验把持简单.免疫组化：指带显色剂标识表记标帜的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应.二、冰冻切片：冰冻切片是一种在高温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度，然后进行切片的一种方法.制作过程较石蜡切片快捷、简便，因多应用于手术中的快速病理诊断.一、取材：应尽可能快地采用新鲜的资料，防止组织发生死后变动.二、速冻：1、将组织块平放于软塑瓶盖或特制小盒内（直径约2cm）.2、如组织块小可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放入盛有液氮的小杯内.3、当盒底部接触液氮时即开始气化沸腾，此时小盒坚持原位切勿浸入液氮中，年夜约10-20s组织即迅速冰结成块.4、在制成冻块后，即可置入恒冷箱切片机冰冻切片.5、若需要保管，应快速以铝箔或塑料薄膜封包，立即置入-80℃冰箱贮存备用.三、固定：1、样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻组织置于其上，4℃冰箱预冷5-10min让OCT胶浸透组织.2、取下组织置于锡箔或者玻片上，样品托速冻.3、组织置于样品托上，其上再添一层OCT胶，以完全覆盖为宜，速冻架（PE）上30min.四，切片：1、恒温冰冻切片机为较理想的冰冻切片机，其基本结构是将切片机置于高温密闭室内，故切片时不受外界温度和环境影响，可连续切薄片至5-10μm.2、切片时，高温室内温度以-15℃ ~ -20℃为宜，温渡过低组织易破碎，抗卷板的位置及角度要适当，载玻片附贴组织切片，切勿上下移动.3、切好室温放置30min后，入4℃丙酮固定5-10min，烘箱干燥20min.PBS洗5min×3.4、进行抗原热修复，微波热修复也可，室温自然冷却.可用3%H2O2孵育5-10min，消除内源性过氧化物酶的活性.五、免疫荧光染色：1、冰冻切片室温晾干15min，可用含10%正常山羊血清的PBS室温封闭切片1小时（此步可不洗）.2、滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液（抗体的量视组织年夜小而定，原则是可以均匀覆盖组织面，且保证整个过程中不会使组织干涸）.3、将切片放在加了PBS的免疫组化湿盒，室温孵育2小时或4℃过夜.4、第二天先将湿盒放到37℃回温1h，然后吸取片上的一抗进行回收，将切片拔出到小染缸PBS冲刷.5、滴加用PBS稀释好的二抗（避光）置于分子杂交箱中37℃孵育1小时.回收二抗，切片置于染缸内，PBS洗5min×3次.6、滴加DAPI工作液染核，室温10-20min（工作浓度0.1%染色15min）.7、回收DAPI，滴加5-10μl抗荧光衰减封片剂或中性树胶，用处置干净的盖玻片封片，即可到荧光显微镜或者共聚焦显微镜下观察拍照.8、做好的切片放在切片盒内，置于4℃冰箱，可保管一周左右.比较：。
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别一、石蜡切片把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。
切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um。
切好的蜡带，放人40℃左右的温水中将蜡片展平。
良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。
切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。
为能得到平整无皱褶的组织切片。
可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在30％的乙醇溶液中进行第一次展片，然后将切片捞起，再次放人45～50℃的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。
此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。
为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。
对HE染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。
二、冰冻切片冰冻切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法，其最突出的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。
为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片机和配套的一次性刀架是保证切片质量的关键。
组织在切片前需要冰冻，而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，从而影响抗原定位。
一般认为，冰晶体积大而量少时，影响较小；冰晶体积小而量多时，对组织结构损害较大。
含水量较多的组织中较易出现冰晶。
1．防止组织中冰晶形成的方法(1)速冻：使组织温度骤降，减少冰晶的形成。
方法包括：1)干冰—丙酮(乙醇)法：将150～200ml丙酮(无水乙醇)装入小保温杯内，逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70℃，用一小烧杯内装异戊烷约50ml，将此烧杯缓慢置人干冰—丙酮(或无水乙醇)饱和液内，至异戊烷温度-70℃时即可使用。
振动切片方法
振动切片方法
振动切片用振动切片机，可以把新鲜组织（不固定不冰冻）切成厚片20～10μm，以漂浮法在反应板进行免疫组织化学染色，然后在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位，修整组织进行后固定，最后按电镜样品制备、脱水、包埋、超薄切片、染色观察等。
组织不冰冻，无冰晶形成和组织抗原破坏，在免疫组化染色前避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的损害，能较好地保留组织内脂溶性物质和细胞膜抗原，主要用于显示神经系统抗原分布研究。
医学教育`网搜集整理这种包埋前染色，尤其适用于免疫电镜观察。
片到1毫米以上厚片的仪器。
一般厚度精度控制大约为1微米，如果做荧光染色建议切成薄片。
对于成年小鼠或胚胎脑部、脊髓、肝脏、眼睛及其他器官组织，我们的方法是用低熔点琼脂糖包埋，然后将封装在琼脂糖里的组织进行切片，取下的组织厚片可以浸泡在如六孔板内进行组织化学或免疫组织化学染色。
然后，用激光扫描共聚焦显微镜或双光子显微镜等进行观察。
而对于或新鲜活体组织则不需要包埋，直接固定在切片槽中切片。
与石蜡切片、冰冻切片方法比较：
振动切片方法简单、快速，能使组织比较完整保留，适合做或组织电生理学等研究。
与冰冻切片相比，不需要对组织冷冻，不会形成冰晶或造成组织抗原的破坏。
与石蜡切片相比，不需要脱水、透明、浸蜡等过程，避免对抗原的损害。
生物显微技术介绍——冰冻切片
生物显微技术课程论文（2010——2011学年，第一学期）冰冻切片摘要：1.1冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度, 然后进行切片的一种方法。
因其制作过程较石蜡切片相对简便、快捷, 都应用于手术中快速病理诊断。
我科于1975 年开展术中冰冻切片检查, 1995 年采用快速恒冷式切片机(德国LE2ICACM1850) , 作冰冻切片1100 余例, 其中包括乳腺、肺、喉、甲状腺、淋巴结、消化道、泌尿道、卵巢、子宫、皮肤等组织。
结果显示, 切片顺利,制作效果满意, 为病理诊断提供了可靠的依据。
既免除了患者多次手术带来的巨大痛苦, 又节约了患者的住院费用, 深受广大临床医生及患者的欢迎及好评。
关键词：冰冻切片方法及注意事项冰冻切片机1 冰冻切片简介1.1冷冻切片的种类冰冻切片的种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法，二氧化碳冰冻切片法，甲醇循环制冷冰冻切片法等。
这些方法，随着时代的变迁，科技的发展，许多年前被认为是非常重要的技术，现在也逐步被淘汰了。
当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。
1.2冷冻切片的目的1.2.1在手术进行中，突然发现病人的病变与原诊断，原定手术方案不相符合，或者怀疑时，需要病理确定。
1.2.2了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。
1.2.3了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞，或者转移的程度，以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。
1.2.4在做剖腹探查时所发现的肿块或者异样的组织。
1.2.5显示组织中的脂肪和脂类物质，这常见于某些病例如脂肪瘤及肉瘤，某些科研组织等。
1.2.6某些酶的显示如ATP酶，琥珀酸脱氢酶等。
1.2.7神经病理学技术中的某些染色法如：Eager氏法，Marchi氏法，Cajal氏法，Hortega氏法和Holzer氏法等。
1.2.8对某些物质所进行的免疫荧光的研究。
免疫组化(IHC)经验
免疫组化经验总（好假哟）一、石蜡切片和冰冻切片的比较？1.要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。
因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
2.冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。
缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。
当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
3.石蜡切片的优点是可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在 -80℃的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的切片，为了防止 RNA 降解，保存一贯很重要。
由于石蜡切片可以切到 4 μm 左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
二、一抗的选择要点和技巧是什么？1.单克隆和多克隆抗体的选择。
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。
单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。
另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。
在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
2.应用范围的选择。
有的一抗只能用于 WB （ Western blotting）或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。
3.种属反应性的选择。
这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。
4.种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。
冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处
了。当然有些技术，如低温恒冷箱冰冻切片法，正在受到青睐。
编辑本段
编辑本段编辑本段
编辑本段冰冻切片的应用
新鲜的组织制备
组织尽可能新鲜、骤冷愈快愈好，才能避免冰晶，常用的骤冷剂有：① CO2
气（－78℃） ② 丙酮干冰冷却的轻石油醚、乙烷和庚烷（－80℃） ③ 液
氮（－190℃）④ 液氮冷却的丙烷（－19℃）。液氮适用于组织化学，较安
全。缺点：组织块易发生龟裂。
④ 分化。
⑤ 于碱水中返蓝20秒。
⑥ 伊红染色10－20秒。
⑦ 脱水，透明，中性树胶封固。
冰冻组织1－2分钟，切片1分钟，固定1分钟，染色共五分钟。总共在
10分钟内完成快速制片过程，结果与石蜡切片不相上下。 冰冻切片的方法还有很多种，如甲醇循环的半导体冰冻切片法，二氧化
据不同的组织而定，不能一概而论。如：切未经固定的脑组织，肝组织和淋
巴结时，冷冻箱中的温度不能调太低，在-10- -15℃左右，切甲状腺、脾、
肾、肌肉等组织时，可调在-15～20℃左右，切带脂肪的组织时，应调至-25℃
左右，切含大量的脂肪时
切含大量的脂肪时切含大量的脂肪时
切含大量的脂肪时，
（
（（
（二
二二
二）
））
）缺点
缺点缺点
缺点：
：：
：
1．不容易做连续切片。
2．切取的组织不能过大，组织过大不容易冻结或者组织冻结不均，影响
切片及染色效果。
3．不容易制作较薄的切片。
4．组织块在冻结过程中容易产生水的结晶而影响细胞的形态结构及抗原
甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值观察
甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值观察1. 引言1.1 概述甲状腺疾病是甲状腺组织发生疾病的统称，包括甲状腺结节、甲状腺炎、甲状腺癌等多种疾病。
甲状腺冰冻与石蜡切片作为常用的病理学诊断方法，在甲状腺疾病的诊断中发挥着重要作用。
甲状腺冰冻切片是指将新鲜组织冰冻后快速切片，适用于术中快速病理诊断；而石蜡切片则是将组织用石蜡固定并切片，适用于常规病理诊断。
甲状腺冰冻与石蜡切片的病理诊断价值一直备受关注，但两者在临床应用中各有优劣。
本研究旨在观察甲状腺冰冻与石蜡切片在病理诊断中的表现差异，探讨两种切片方法的优缺点，以及如何结合它们提高病理诊断的准确性。
通过本研究，希望为甲状腺疾病的病理诊断提供更加全面的参考，促进临床诊断水平的进一步提高。
1.2 研究目的研究目的：本研究旨在探讨甲状腺冰冻与石蜡切片在病理诊断中的价值，并比较两种切片方法在临床应用中的优劣势，以期为提高甲状腺疾病的准确诊断提供参考依据。
具体目的包括：一、探究甲状腺冰冻与石蜡切片的制备方法及特点；二、分析比较石蜡切片与冰冻切片在病理诊断中的优缺点；三、观察甲状腺疾病的病理诊断价值及准确性；四、研究甲状腺冰冻与石蜡切片在临床应用中的对比情况；五、比较孤立性甲状腺结节的病理诊断结果，并总结切片方法在甲状腺疾病诊断中的应用价值。
通过本研究，旨在提高甲状腺疾病的病理诊断水平，为临床医生提供更准确、可靠的诊断依据，促进甲状腺疾病的早期发现和治疗，从而提高患者的生存质量和治疗效果。
1.3 研究意义甲状腺是人体内分泌系统中一个非常重要的器官，其功能异常会引发一系列问题，如甲状腺功能亢进或功能减退等疾病。
对于甲状腺疾病的诊断和治疗，病理学是一个至关重要的方面。
而甲状腺病理诊断中，甲状腺冰冻与石蜡切片的比较研究一直备受关注。
研究意义在于探讨甲状腺冰冻与石蜡切片在病理诊断中的优劣势，并提出更加准确和有效的诊断方法，从而为临床医生提供更好的指导和决策依据。
通过对两种切片方法的比较分析以及甲状腺疾病的病理诊断观察，可以为临床医生提供更为全面的信息，帮助其更好地制定治疗方案和预后评估。
石蜡切片与冰冻切片的优缺点
两种切片我都做得比较多。
相比之下，我更喜欢石蜡切片。
石蜡切片的最突出优点是标本可以长期保存。
在这次试验结束的若干年后，还可以用来做别的指标。
对于比较珍贵的标本，如罕见的临床标本，石蜡切片是比较好的选择。
我觉得石蜡标本的好坏取决于固定的质量。
个人认为组织块不宜过大，固定时间不宜过长。
我的经验是取火柴头大的组织，4%多聚甲醛或10%福尔马林4摄氏度固定3-4小时。
固定时间太长的话，蛋白质的肽链过度扭曲，抗原决定族被缠绕包裹，不容易做出结果。
石蜡切片的主要缺点是不适合做荧光。
我也不知道为什么，反正我老板是这么说的。
可能是由于石蜡有自发荧光的缘故。
我也试过用石蜡切片做荧光，效果还可以。
可是文章中这么做的确实很少。
冰切相对简单，容易出结果。
大多数人是用新鲜组织直接冰切，然后丙酮固定。
这样做虽然省事，可固定完了以后要马上漂洗、孵抗体或染色，不能让切片晾干，不然形态会非常糟糕。
我喜欢先用4%多聚甲醛或10%福尔马林固定，然后蔗糖脱水，再切片。
这样虽然麻烦一些，可切片的形态会好很多。
切片可以晾干，而且在4摄氏度下可以保存1-2个月。
千万不能放-20度保存，否则会有严重的冰晶，切记。
冰冻切片最大的问题还是标本不能长期保存，要现取现做。
适合用于容易获取的动物标本。
chengjinxiang wrote:做冰冻切片的组织可以是直接放在液氮里直接冻存的组织吗？石蜡切片前的福尔马林固定的组织过大会怎么样，我们因为自己没有机器通常是把组织扔到甲醛里直到有一定量和有足够多标本才去包蜡块这样对组化结果有什么影响？做冰切的组织可以先在液氮中长期保存。
而且经过液氮冻存的组织冰切后的形态特别漂亮，一点儿冰晶都没有。
不过保存之前要先用OCT包埋。
切片之前要把冰切机预冷到工作温度（-20度以下）。
包埋块从液氮中一拿出来就要放进冰切机中，不能让包埋块融化，否则还是会出现严重的冰晶。
做HE染色的话，组织固定时间长一点儿没关系。
但如果做免疫组化的话，固定时间就不能太长。
石蜡切片和冷冻切片
石蜡切片战热冻切片——愚愚分出有收会系列之阳早格格创做正在构造真验中，构造切片战热冻切片是最罕睹的二种切片要收，二种劣缺面明隐，正在真验的应用上也大有分歧.而二个真验的相共面皆是应用免疫教基根源基本理——即抗本与抗体特同性分离的本理，通过化教反应使标记表记标帜抗体的隐色剂隐色去决定构造细胞内蛋黑量，对于其举止定位、定性及相对于定量的钻研.一、石蜡切片构造教惯例造片技能中最为广大应用的要收.石蜡切片出有但是用于瞅察仄常细胞构造的形态结构，也是病理教战法医教等教科用以钻研、瞅察及推断细胞构造的形态变更的主要要收，而且也已相称广大天用于其余许多教科范围的钻研中.1、牢固：将新陈构造切成小块，牢固于4%多散甲醛过夜.凝固构造中的物量身分，尽大概脆持其活体时的结构.共时能使构造硬化，有好处切片的举止.2、脱火：为了缩小构造资料的慢遽中断，应使用从矮浓度到下浓度递加的程序举止经70%、85%、95%曲至杂酒粗（无火乙醇），屡屡时间为1小时.牢固后的构造资料需与消留正在构造内的牢固液及其结晶重淀，可则会做用后期的染色效验.3、透明：时常使用的透明剂有二甲苯，二甲苯是石蜡的溶剂.杂酒粗出有克出有及与石蜡相溶，还需用能与酒粗战石蜡相溶的溶剂，替换出构造内的酒粗.资料块正在透明剂浸渍历程称透明.4、浸蜡：先把构造资料块搁正在熔化的石蜡战二甲苯的等量混同液浸渍1小时.先后移进2个熔化的石蜡液中浸渍1小时安排.5、包埋：以少许热蜡液将其底部赶快揭附于包埋盒内上，而后置于速冻台，让石蜡牢固.6、切片：切片刀的钝利与可、蜡块硬度是可适合皆间接做用切片品量，可将蜡块至于热火中改变蜡块硬度.常常切片薄度为5微米，用毛笔沉托沉搁正在37度火浴中展片.7、揭片与烤片：将火浴中展片捞至玻片上铺正，而后将载玻片搁进37℃温箱中搞燥.8、切片脱蜡及火化：搞燥后的切片置于二甲苯中举止脱蜡，而后依次使用从下浓度到矮浓度递减的程序举止经杂酒粗、95%、85%、70%举止火化.9、染色：典范的苏木粗战伊黑：细胞核被苏木粗染成紫蓝色，普遍细胞量及非细胞身分被伊黑染成粉黑色.真验支配简朴.免疫组化：指戴隐色剂标记表记标帜的特同性抗体正在构造细胞本位通过抗本抗体反应战构造化教的呈色反应.二、冰冻切片：冰冻切片是一种正在矮温条件下使构造赶快热冻到一定的硬度，而后举止切片的一种要收.创造历程较石蜡切片快速、烦琐，果多应用于脚术中的赶快病理诊疗.一、与材：应尽大概快天采与新陈的资料，预防构造爆收死后变更.二、速冻：1、将构造块仄搁于硬塑瓶盖大概特造小盒内（曲径约2cm）.2、如构造块小可适量加OCT包埋剂浸出构造，而后将特造小盒慢慢仄搁进衰有液氮的小杯内.3、当盒底部交战液氮时即启初气化沸腾，此时小盒脆持本位切勿浸进液氮中，约莫10-20s构造即赶快冰结成块.4、正在造成冻块后，即可置进恒热箱切片机冰冻切片.5、若需要保存，应赶快以铝箔大概塑料薄膜启包，坐时置进-80℃冰箱贮存备用.三、牢固：1、样品托上涂一层OCT包埋胶，将速冻构造置于其上，4℃冰箱预热5-10min让OCT胶浸透构造.2、与下构造置于锡箔大概者玻片上，样品托速冻.3、构造置于样品托上，其上再加一层OCT胶，以真足覆盖为宜，速冻架（PE）上30min.四，切片：1、恒温冰冻切片机为较理念的冰冻切片机，其基础结构是将切片机置于矮温稀关室内，故切片时出有受中界温度战环境做用，可连绝切薄片至5-10μm.2、切片时，矮温室内温度以-15℃ ~ -20℃为宜，温度过矮构造易破碎，抗卷板的位子及角度要适合，载玻片附揭构造切片，切勿上下移动.3、切佳室温搁置30min后，进4℃丙酮牢固5-10min，烘箱搞燥20min.PBS洗5min×3.4、举止抗本热建复，微波热建复也可，室温自然热却.可用3%H2O2孵育5-10min，与消内源性过氧化物酶的活性.五、免疫荧光染色：1、冰冻切片室温晾搞15min，可用含10%仄常山羊血浑的PBS室温启关切片1小时（此步可出有洗）.2、滴加适合比率稀释的一抗大概一抗处事液（抗体的量视构造大小而定，准则是不妨匀称覆盖构造里，且包管所有历程中出有会使构造搞涸）.3、将切片搁正在加了PBS的免疫组化干盒，室温孵育2小时大概4℃过夜.4、第二天先将干盒搁到37℃回温1h，而后吸与片上的一抗举止回支，将切片拔出到小染缸PBS浑洗.5、滴加用PBS稀释佳的二抗（躲光）置于分子杂接箱中37℃孵育1小时.回支二抗，切片置于染缸内，PBS洗5min×3次.6、滴加DAPI处事液染核，室温10-20min（处事浓度0.1%染色15min）.7、回支DAPI，滴加5-10μl抗荧光衰减启片剂大概中性树胶，用处理搞洁的盖玻片启片，即可到荧光隐微镜大概者共散焦隐微镜下瞅察拍照.8、搞佳的切片搁正在切片盒内，置于4℃冰箱，可保存一周安排.对于比：。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析
石蜡切片和冰冻切片都是质谱成像分析中常用的技术。
它们各自具有优点，可以根据实验需求进行选择。
石蜡切片法是将组织样本固定在石蜡块中，然后用切片机切成非常薄的切片(通常在20-50微米之间)。
这种方法的优点在于其切割厚度均匀，可以提供高质量的细胞和组织的图像。
此外，由于使用的是石蜡作为固定剂，因此可以得到长期保存的切片。
石蜡切片也有其缺点。
石蜡本身是一种有机物质，可能会对某些生物分子产生影响。
石蜡切片需要经过一系列复杂的处理步骤，包括脱水、包埋、切片等，这可能增加实验的复杂性和时间成本。
相比之下，冰冻切片法则是在冷冻状态下快速切割生物组织并立即冻结以保留其完整性。
这种方法的优点在于它可以提供实时观察的活体细胞和组织结构，对于研究动态过程非常有用。
此外，冰冻切片不需要使用石蜡或其他固定剂，因此不会对生物分子产生影响。
然而，冰冻切片也有其挑战。
由于是在冷冻状态下进行切割，因此切片的质量可能受到冷冻损伤的影响。
此外，冰冻切片需要在极短的时间内完成，这可能对切片机的性能要求较高。
石蜡切片和冰冻切片都适合质谱成像分析，选择哪种方法取决于具体
的实验需求。
如果需要长期保存的高质量图像，或者需要研究静态结构和三维形态，那么石蜡切片可能是更好的选择。
而如果需要实时观察活体细胞和组织结构，或者对时间敏感，那么冰冻切片可能更合适。
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石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别
一、石蜡切片
把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片（sectio n）。
切片必须保持
切片刀锐利，切片厚度通常为 5〜7um也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um切好的蜡带，放人40C左右的温水中将蜡片展平。
良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。
切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。
为能得到平整无皱褶的组织切片。
可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在 30%的乙醇溶液中进行第一次展片，然后将切片捞起，再次放人45〜50C的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。
此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。
为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。
对HE染色的切片, 可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基一乙氧基甲硅
烷等处理。
二、冰冻切片
冰冻切片（fiozen section）是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法，其最突出的优点是能够较完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶活性以及抗原的免疫活性，尤其是细胞表面抗原更应采用冰冻切片。
新鲜组织和已固定的组织均可作冰冻切片。
为了得到高质量的冰冻切片，选择好的冰冻切片机和配套的一次性刀架是保证切片质量的关键。
组织在切片前需要冰冻，
而冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，从而影响抗原定位。
一般认为，冰晶体积大而量少时，影响较小；冰晶体积小而量多时，对组织结构损害较大。
含水量较多的组织中较易出现冰晶。
1 •防止组织中冰晶形成的方法
（1）速冻：使组织温度骤降，减少冰晶的形成。
方法包括：
1）干冰一丙酮（乙醇）法：将150〜200ml丙酮（无水乙醇）装入小保温杯内，
逐渐加入干冰，直至饱和呈黏稠状，再加干冰不再冒泡时，温度可达-70 C,用一小烧杯内装异戊烷约50ml，将此烧杯缓慢置人干冰一丙酮（或无水乙醇）饱和液内，至异戊烷温度-70 C时即可使用。
将组织（大小为lcm X0. 8cm x 0，5cm）投入异戊烷内速冻30〜60秒后取出，置恒冷箱内以备切片，或置-80 C低温冰箱内贮存。
2）液氮法：将组织块平放于软塑瓶盖或特制锡纸小盒（直径约2cm），可适量加OCT包埋剂浸没组织，然后将特制小盒缓缓平放人盛有液氮的小杯内，当盒底部接触液氮时即开始汽化沸腾，此时小盒保持原位，切勿浸入液氮中，大约
10〜20秒后组织即迅速冰结成块。
取出冷冻的组织块立即置人恒冷箱切片机冷冻切片或置人-80 C冰箱贮存备用。
（2）应用蔗糖溶液：将组织置于20%〜30%蔗糖溶液I〜3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量，可防止或减少冰晶的形成。
2 •恒冷箱切片法
冷冻后的组织块即可用于恒冷箱切片，其过程包括以下步骤：
（1）组织包埋根据研究目的取所需组织（如切取小鼠肝脏
1. 0cm x l . 0cm x 0. 5cm大小的组织块），用滤纸吸去多余水分，将组织块平放于用特制锡纸小盒(直径约2cm)或软塑瓶盖内。
加适量 OCT包埋剂浸没组织, 40C浸透20— 30分钟。
为防止冰晶形成，包埋前可进行蔗糖处理。
(2) 组织冷冻：按上述干冰一丙酮(乙醇)法或液氮法冷冻组织。
(3) 切片：切片前1小时将恒冷箱切片机的温度设定为-18 °C左右，以备切片。
切片时温度以-15 — -18 C为宜，温度过低组织易破碎。
刀的角度要适当？否则不易连片。
用载玻片贴附组织切片时，勿上下移动。
未经固定的新鲜组织在冰冻
切片后应使用相应的固定剂固定10分钟。
冰冻切片后如不立即染色，必须用电风扇吹干，贮存于-70 C低温冰箱内或进行短暂预固定后低温冰箱保存。
染色前从冰箱内取出切片，置室温干燥10分钟，再经冷丙酮固定5〜10分钟(未固定者)，PBS S 洗3次后即可进入染色程序(HE染色可用甲醛、冰醋酸和95%乙醇快速固定1—2分钟)。
(4) 冰冻切片的保存：冰冻切片后如不能及时染色，可在干燥后装入密封的标本盒内，外包塑料袋，贮存于低温冰箱，或进行短暂预固定后于低温冰箱保存。
三、振动切片
用振动切片机(vibratome)可以把新鲜组织(不固定、不冷冻)切成20〜 400pm的厚片，以漂浮法在反应板内进行组织化学或免疫组织化学染色。
因组织不冷冻，无冰晶形成也无组织抗原破坏，染色前又避免了组织脱水、透明、包埋等步骤对抗原的损害，故能较好地保留组织内脂溶性物质和细胞膜抗原。
振动切片主要用于显示神经系统抗原分布的研究。
对于柔软的胚胎脑组织，可用低熔点(45 —55C)10 %琼脂糖包埋，振动切片机切成厚片(40 — 100gm),采用漂浮法在反应板内进行免疫荧光组织化学染色，激光扫描共聚焦显微镜观察。
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