脱细胞真皮基质(ADM)制备前后的变化(1)

脱细胞真皮基质(ADM)制备前后的变化

(1)

】目的探讨脱细胞真皮基质制备前后出现的各种变化。方法将人全厚皮切制成厚0.5mm的中厚皮片，先后经1M NaCl溶液、0.1％戊二醛、0.5％SDS、

0.25％胰蛋白酶、冷冻干燥及水化处理，制得脱细胞真皮基质（ADM）。观察制备前后出现的各种变化。结果皮片经处理后，ADM具有良好的弹性和柔韧性。

皮片中所有细胞成分消失，胶原及弹力纤维结构完整、排列规则，基底膜存

在。处理前后弹力/胶原纤维面密度分别为0.25±0.08和0.26±0.08、胶原含

量分别为69.18±12.51和85.17±28.93、Ⅲ/Ⅰ型胶原比值分别为0.85±0.22和0.71±0.14，均无明显变化。结论脱细胞真皮基质制备过程可有效去除皮

肤中的细胞成分，完整保留真皮基质和基底膜，形成相对无免疫活性的脱细胞

真皮基质。

【关键词】脱细胞真皮基质制备

Studies on the changes during preparation of acellular

dermal matrix (ADM)

【Abstract】 Objective To investigate the changes during preparation of ADM.Methods Split-thickness allograft， 0.5mm thick， were

obtained from full thickness human’s skins with a dermatome. Donor skins were treated with 1 M NaCL， 0.1% glutaraldehyde， 0.5 % SDS

and 0.25 % trypsin successively. The resulting acellular dermal matrices were then freeze-dried in a freeze-dryer and hydrated in PBS. The processing technique resulted in acellular dermal matrices (ADM). The dynamic changes during processing were researched.Results All the cellular components in the donor skins were removed and basement membrane was retained. Regular orientation and integral framework of collagen bundles and elastin was present in elastic and flexible ADM. The area-density of elastin/ collagen，gross and Ⅲ/Ⅰ t ype ratio of collagen were 0.25±0.08，69.18±12.51，0.85±0.22 in the donor skins and 0.26±0.08，85.17±28.93，0.71±0.14 in the ADM respectively. There was no change after donor skins were

treated.Conclusion The processing technique removed all the cellular components from the donor skins， retained dermal matrix and basement

membrane， and acquired acellular dermal matrix that exhibited no immunocompetence.

【Key words】 acellular dermal matrix preparation

脱细胞真皮基质 (acellular dermal matrix， ADM) 是一种良好的基质，可作为真皮替代品与自体表皮复合移植，亦可作为软组织填充材料单独使用，临床上应用愈来愈广泛。最早由Liversey研制成功，并申请了美国专利［1］；国内报道的制备方法差别较大，对此我们进行了研究，移植后亦获得了成功。现就其制备过程中出现的各种变化报道如下。

1 材料与方法

1.1异体皮肤来源异体皮肤来源于我院整形手术患者，术前查体正常，免疫学检查HBsAg、HCV、HIV、TP-Anti均为阴性。切下的健康皮肤制成厚约0.5mm的中厚皮片。

1.2实验条件整个实验过程均需在严格无菌条件下进行。

1.3实验步骤中厚皮片入1M NaCl溶液，37℃，浸泡24h→0.1%戍二醛缓冲液，37℃，浸泡5min→0.5%SDS溶液，37℃，浸泡2h→0.25%胰蛋白酶溶液，消化20min→大量的PBS溶液反复多次漂洗，至漂洗液无泡沫为止→冷冻干燥机，-60℃，ATM 56，持续12h→密封保存。

1.4 ADM的水化室温下冷冻干燥的ADM置于PBS溶液中浸泡30min以上，即可使用。

2 结果

2.1大体观察皮片经高渗盐水处理后，表皮易于从真皮上呈片状完整剥离，有时在表皮和真皮之间形成水泡样间隙，毛发与表皮亦一起脱落。真皮呈瓷白色，富有弹性，形成基底膜和真皮两个面，其中基底膜面有光泽，比真皮面光滑（图1～4）。

戍二醛缓冲液、SDS、胰蛋白酶处理前后，外观无显著变化。

冷冻干燥处理后真皮变干、变硬，弹性明显减退，状如瓷白色皮革样。

水化处理后，与处理前的皮片相比，手感较酥软，弹性略有减退，厚度稍有增加。

2.2细菌学检查将ADM粉碎后进行细菌培养，未见细菌生长。

图1 人体正常皮肤，处理前

图2 1M NaCl处理后，表皮被掀起

图3 1M NaCl处理后，去除的表皮

图4 1M NaCl处理后的皮肤

2.3 组织学观察 HE染色显示皮片经高渗盐水处理后，表皮细胞各层均被完全去除，基底膜完整，形成一个连续的光滑面，真皮中的细胞成分仍然存在；经戍二醛缓冲液、SDS、胰蛋白酶处理后，真皮中所有的细胞成分即被完全去除，完整地保留了基质成分，即脱细胞真皮基质（图5～7）。

图５图６图７

图５人体正常皮肤，HE×100

图6 1M NaCL处理后，无表皮细胞，基底膜完整，真皮中细胞残留，HE×100图7 脱细胞真皮基质，无细胞存在，基底膜完整，HE×100

图8

图9

图8 人体正常皮肤，真皮内丰富的弹力纤维，Verhoeff×100

图9 脱细胞真皮基质，丰富的弹力纤维，Verhoeff×100

Verhoeff铁苏木素染色证实ADM中的胶原、弹力纤维形态规则、结构清晰、无肿胀，无变性坏死，排列整齐，整个处理过程对其无显著影响（图8～9）。