临床微生物样本采集规范

#1 从两个独立的皮肤位点采血，每瓶 采集10ml
#3
#2
35°C 空气中孵育5天 每天检查浊度并翻转培养瓶
18小时后传进行次代培养 当培养瓶显示细菌生长时进行 革兰染色和传代培养
革兰阳性球菌? 接种血 平皿＋奥普托欣试验
例如：肺炎链球菌
#6
对重要病原菌
进行鉴定
和药敏试验
#5
CO2中孵育 72h
革兰阴性杆菌? 接种血平皿和 麦康凯平皿
徐英春，倪语星等。血培养操作规范，上海科学技术出版社，2002,1-31
培养瓶消毒程序
打开血培养瓶塑料盖用75%酒精消毒血培 养瓶橡皮塞并擦干表面残余酒精→消毒皮 肤后用无菌注射器抽取血液从橡皮塞处注 入血培养瓶内→用75%酒精重新消毒血培养 瓶橡皮塞并盖好塑料盖→立即送检。
血培养标本的运送
? 采集后的血培养瓶应在1小时之内送往实验室。 ? 血培养瓶在采血接种后在室温不超过4小时。 ? 血培养瓶在接种前和接种后均不得冷藏或冷冻。
正确的微生物标本采集和运送，是准确的 病原学诊断的前提！
病原学诊断的关键问题
? 减少污染 ? 鉴别污染和定植 ? 提高阳性率
标准化的流程
? 临床及时有效治疗 ? 治疗感染而非污染 ? 治疗感染而非定植 ? 降低患者死亡率
病原学治疗
微生物样本采样基本原则
1.及时采集微生物标本作病原学检查 2.在抗菌药物使用前采集标本 3.采样时严格执行无菌操作 4.采样后立即送检，甚至床旁接种尤其是厌氧培养 5.棉拭子标本宜用运送培养基 6.混有正常菌群污染标本，不可置肉汤培养 7.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂。 8.送检标本应注明来源和检验目的
血培养送检指征（须 100% 送检率）
⑴ 发热≥38.5 ℃伴下列一项 A. 寒战 B. 肺炎：肺部感染的患者有25 ～50 ％可能发生菌血症， 应同时作血培养。 C. 留置深静脉导管超过5天 D. 白细胞＞1.8 万/mm 3 E. 感染性心内膜炎 F. 收缩压低于90mmHg G. 无其它原因可以解释的感染
“正确的微生物学检验始自正确的标 本采取。临床医师、护师及检验技师 都必须通晓其要领。”
著名的临床微生物检验专著 Manual of Clinical Microbiology 的主编Patrick Murray
合格标本的结果才能引导（而非误导）做 出正确的临床决定
? 我们应该追求： “准确的病原学诊断” “针对性病原学治疗”
⑵ 发热≥39.5 ℃须抽血培养
美国微生物协会：临床微生物手册
? 急性发热：在10 分钟内从不同的部位抽2套 血培养（使用抗菌药物前）；
? 非急性疾病：不要马上开始或换抗菌药物： 从不同部位抽取2-4 套血培养，在24 小时 内间隔3 小时以上（使用抗菌药物前）；
? 不明原因的发热：不同部位抽取2-4 套血培 养，如果24-48h 阴性，再次抽取2-3 套或 更多血培养
临床微生物标本的分类
带菌体液
痰 咽拭子 尿液 粪便 其他类别
无菌体液
血液 脑脊液 关节腔积液 胸腹水 其他类别
一、血培养操作规范
①血培养
主要病原菌：沙门菌、布氏杆菌、其他革兰阴性杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌 以下菌应视为非病原菌(除非>1次血培养分离出)：芽孢杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、棒状革兰阳性杆菌
更大。
? 不推荐静脉留置导管，因其常伴有高污染率。 如果必须从留置导管内采血，也应同时从外 周静脉采集另外一个血培养标本以帮助阳性 结果的判读。
血液及骨髓标本采集运送的规范（1 ）
? 1. 采血时间：尽可能在用抗生素前，心内膜炎例
外。 ? 2.采血量：采一次或采一瓶是错误的，至少应采一
从两个独立的皮肤位点采血，每瓶采集 10ml 最好在5分钟内采集。
血培养采血量、份数与阳性率
? 研究表明，当每套血培养采血20ml时 ? 一套检出率：65% ? 二套检出率：80% ? 三套检出率：96% ? 目前的指南推荐采集2~3套血培养
采集部位
? 推荐从外周静脉采集血液标本。 ? 不推荐动脉血，因其诊断价值没有比静脉血
临床微生物样本采集规范
2014-1-15
成功治疗感染症的决定因素
? 准确、快速病原学诊断 ? 医师判读病原菌培养结果 ? 选择适当治疗方法
准确、快速病原学诊断的决定因素
二大因素
临床医务人员 提高送检意识
标本采集 运送 储存
微生物室人员 标本接收 筛选 处理
分离鉴定……
临Biblioteka Baidu医生最不能接受的问题:阳性率低
? 血培养是诊断败血症最有价值的手段
临床常见的采血指征
? 发热（? 38?C）或低温（? 36?C） ? 寒战 ? 白细胞增多（计数大于 10，000? 109/L，特别有
“核左移” 未成熟的或杆状核的白细胞） ? 粒细胞减少（成熟的多核白细胞 <1000? 109/L） ? 血小板减少 ? 皮肤粘膜出血 ? 昏迷 ，休克 ? 多器官衰竭 ? CRP/PCT升高
采血时机和采血份数
? 采血培养应该在使用抗生素之前进行 ? 间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来
之前 0.5 小时采集血液，不知发热规律应在 寒战或发热后半小时后进行。 ? 24小时内采集2-3份血培养 ? 持续性菌血症：如急性心内膜炎、导管相关 sepsis时需多次取血监测，特别是金葡菌时
采集两套血培养(CLSI)
将重要的革
#4
兰染色结果 尽快通知临
床医生
革兰阴性双球菌或球杆
菌? 接种巧克力平皿和
血平皿
例如：肺炎克雷伯菌
? Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
血培养的临床意义
? 血培养查病原菌对诊断以下疾病很重要 -菌血症，真菌血症 -感染性心内膜炎 -临床不明原因感染 -假体植入后感染（人工关节，人工瓣膜） -导管相关性菌血症 -化脓性关节炎 -肺炎
皮肤消毒程序，严格执行三步法:
1、用75%酒精擦拭静脉穿刺部位待 30s以上 2、用 1%-2% 碘酊作用 30s 或10% 碘伏作用 60s ，
从穿刺点向外画圈消毒 ,至消毒区域面积达 5cm* 5cm ，涂擦穿刺皮肤 2遍，待干燥。 3、75% 酒精脱碘：用 75%酒精由内向外方向涂 抹去碘酒液 ，待酒精挥发干燥后采血。