几种药物对大肠杆菌的治疗效果

几种药物对大肠杆菌的敏感性测定

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几种药物对大肠杆菌的敏感性测定

摘要：大肠杆菌的抗原性复杂，毒力因子多种多样，不同血清型、不同毒力因子菌株的宿主范围和致病性大不相同，可在不同的动物或在同种不同年龄的动物中引起多种多样的疾病。通过采用不同的抗菌药物对鸡大肠杆菌病进行治疗，结果表明，该菌对头孢噻肟、庆大霉素、阿米卡星、氧氟沙星和卡那霉素敏感。

【实验目的】

通过检测抑菌圈大小测定大肠杆菌对氟苯尼考、头孢噻呋呐、硫酸新霉素可溶粉、氧氟沙星和卡那霉素几种药物的敏感程度。

【实验原理】

纸片法药敏试验是将抗菌药物吸收到特定的纸片中，然后置于已接种待测定菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环（带）。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，故可以根据抑菌环的大小，判断细菌对药物的敏感度。通过药物敏感试验，我们可以找出针对于某些致病菌的敏感药物，从而对临床中的细菌性疾病的治疗提供指导。

【实验材料】

1、药品及细菌——氟苯尼考、头孢噻呋呐、硫酸新霉素（杆菌净）、氧氟沙星和卡那霉素等抗菌药物，生理盐水，磷酸盐缓冲溶液，MH 营养肉汤，MH培养基，麦康凯培养基，蒸馏水，大肠杆菌

2、器材——纸片，试管，移液器，酒精灯，高压蒸汽锅，无菌操作

台，镊子，剪刀，锥形瓶，烘箱，培养箱，天平，玻璃棒，干净毛巾（报纸），炭笔，接种环，小广口瓶

【实验方法及内容】

1．药敏纸片的制作

1.1制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的小广口瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。

1.2抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的小广口瓶内加入药液0.25毫升（因不好取材，故扩大十倍配药。），并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

2．药液的制备（用于商品药的试验）：按商品药的使用治疗量的比例配制药液；如商品药百病消按其说明量治疗量0.01%饮水，可按这个比例配制药液，可取10毫克加入10毫升的水中混匀。此稀释液即为用于做药敏试验的药液。

3.培养基的制备

3.1普通肉汤的制备

蛋白胨2g 杭州微生物试剂有限公司

牛肉膏0.6g 成都长寿生物利剂有限公司

Nacl 1g 成都市科龙化工试剂厂

水200ml

PH 7.4

按上述要求称取各种成分于三角瓶中，混合均匀，用NaOH调PH至7.4，调好PH后其瓶口用报纸封好，至于高压蒸汽灭菌中灭菌30min。待冷却后，倒于无菌平板中。冷凝后放置在无菌操作台上备用。

3.2普通琼脂平板的制备

水解酪蛋白琼脂（M-H琼脂）杭州微生物试剂有限公司

用法称取本品36g于1000ml蒸馏水中，加热溶解，经121℃15min 高压灭菌，待冷至50℃左右，倾注无菌平板。

此次实验只需要配置200ml,称取水解酪蛋白琼脂7.2g于三角瓶中，往三角瓶中加入200ml蒸馏水即可。放入高压蒸汽灭菌锅里灭菌30min。待冷却50℃左右，倾注无菌平板。

4．细菌的转种、纯化、活化培养

（1）在麦康凯培养基上用无菌接种环接种大肠杆菌

（2）用无菌接种环将细菌接种到MH培养基中（6个），保证细菌均匀的涂布在培养基中。

注意无菌操作。

（3）将培养基置于37℃的恒温箱中培养24h。

4.药敏片法操作方法

4.1在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划

线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可挑取待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，用灭菌棉拭子将待检细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。要求涂布均匀致密）

4.2将镊子于酒精灯火焰灭菌后略停，取药敏片贴到平皿培养基表面。为了使药敏片与培养基紧密相贴，可用镊子轻按几下药敏片。为了使能准确的观察结果，要求药敏片能有规律的分布于平皿培养基上；一般可在平皿中央贴一片，外周可等距离贴若干片（外周一般可贴四片），每种药敏片的名称要记住。

4.3将平皿培养基置于37℃温箱中培养24小时后，观察效果。

附：

1.结果判断依据

2. 所用药品：

A 杆菌净泰硫酸新霉素可溶粉

主要成分：硫酸新霉素

生产商：四川莱邦药业有限公司

用法及用量：200g兑水600kg

B 头孢噻呋钠批号061202 生产商：浙江海正药业浓度：89.6%

C 卡那霉素用法及用量：禽类10g可混饮水500-1500kg

D 氧氟沙星可溶粉

生产商：广东大华农动物保健品有限公司动物保健厂

用法及用量：禽类每1L水混饮2.5g，每日2次，连用3-5日

E 氟苯尼考可溶粉

生产商：广东养宝生物制药有限公司

用法及用量：鸡每1L水混饮100mg

3.【注意事项】

3.1培养基：应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度合适（约5-6mm），不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺药和TMP的活性。

3.2细菌接种量：细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。

3.3药物浓度：药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。

3.4培养时间：一般培养温度和时间为37℃8-18小时，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2~4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推