大肠杆菌
微生物大肠杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性。
2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 掌握大肠杆菌的培养和计数方法。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是肠杆菌科的一种细菌，广泛存在于人体肠道中。
本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生物学特性，并掌握其培养和计数方法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜粪便、营养琼脂平板、营养肉汤、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、无菌培养皿、无菌移液器、酒精灯、显微镜等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等。
四、实验方法1. 大肠杆菌的分离（1）取新鲜粪便样品，用无菌生理盐水进行稀释。
（2）取适量稀释液，用无菌棉签涂布于营养琼脂平板上。
（3）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
2. 大肠杆菌的纯化（1）观察平板上的菌落，挑选单菌落，用无菌移液器移至新的营养琼脂平板上。
（2）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 大肠杆菌的鉴定（1）观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
（2）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（3）取培养液，用显微镜观察细菌形态，并进行革兰氏染色。
（4）对培养液进行生化试验，如乳糖发酵试验、吲哚试验等。
4. 大肠杆菌的培养与计数（1）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）用无菌移液器取适量培养液，进行系列稀释。
（3）取稀释液，涂布于营养琼脂平板上。
（4）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（5）观察平板上的菌落，记录菌落数，并计算大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 大肠杆菌的分离：在平板上观察到圆形、光滑、白色、半透明的菌落，说明已分离出大肠杆菌。
2. 大肠杆菌的纯化：经过纯化后，菌落特征与分离菌落相同，证明已得到纯化的大肠杆菌。
3. 大肠杆菌的鉴定：通过显微镜观察，发现细菌为革兰氏阴性短杆菌，生化试验结果显示该菌株能发酵乳糖，产生吲哚，表明已鉴定为大肠杆菌。
大肠杆菌
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• 培养特性 • 由于此菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、 葡萄糖的普通培养基上生长良好。 • 最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能 生长，生长温度范围为15-46℃。 • 在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态： • （1）光滑型： 菌落边缘整齐，表面有光泽、 湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。 • （2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐， 易在生理盐水中自凝。 • （3）粘液型：常为含有荚膜的菌株 • 此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生 长pH为6.8-8.0，所用培养基pH为7.0-7.5,若pH值低 于6.0或高于8.0则生长缓慢
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• 生化试验： 将斜面培养物移种到下列培养基中进行 生化试验。 1 色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h 后,加Kovacs氏试剂0.2～0.3mL,上层出现红色 为靛基质阳性反应
靛基质试验（Indole）原理及照片
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2 MR-VP培养基：在36±1℃培养 48±2h。以无菌操作移取培养物1 mL至 13mm×100mm试管中,加5％α-萘酚乙醇 溶液0.6mL,40％氢氧化钾溶液0.2mL和少 许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊 红色,为VP试验阳性。 将MR-VP培养物的剩余部分再培养 48h滴加5 滴甲基红溶液。如培养物变红 色,为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性 反应
• 肠杆菌科有一些共同特性，比如都是革兰氏 阴性小杆菌，好氧或兼性厌氧，没有芽孢 • 大小0.4～0.7×1～3um,无芽胞,大多数菌株有 动力。 • 有普通菌毛与性菌毛，有些菌株有多糖 类包膜，革兰氏阴性杆菌。
• MOTILITY TEST • 1. Pseudomonas aeruginosa（铜绿假单胞菌）： Motile 2. Staphylococcus aureus：Non-motile 3. Bacillus subtilis：Motile
大肠杆菌 国家标准
大肠杆菌国家标准
大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，属于肠道菌群中
的一种重要成员。
它在人和动物的肠道中普遍存在，是一种常见的肠道微生物。
大肠杆菌在生物学、医学和食品工业中具有重要的意义，因此各国都对大肠杆菌制定了相应的国家标准，以保障公共卫生和食品安全。
国家标准对大肠杆菌的监测和检测进行了详细规定，主要包括采样方法、检测
方法、限量标准等内容。
在食品工业中，大肠杆菌是一种重要的指标菌，其数量的多少直接反映了食品的卫生状况。
因此，国家标准对食品中大肠杆菌的限量标准进行了严格规定，以保障食品的安全卫生。
在医学领域，大肠杆菌也是一种重要的病原菌。
它能够引起多种感染性疾病，
如泌尿系统感染、肠道感染等。
因此，国家标准对医疗机构和实验室中的大肠杆菌的监测和检测也进行了详细规定，以防止病原菌的传播和感染。
除了食品和医学领域，大肠杆菌在生物学研究中也具有重要意义。
它是一种常
用的实验室模式菌种，被广泛应用于分子生物学、遗传学和生物工程等领域。
因此，国家标准对实验室中的大肠杆菌的保存、传递和使用也进行了规范，以保证实验室操作的安全和准确性。
总的来说，大肠杆菌国家标准的制定和执行，对于保障公共卫生和食品安全具
有重要意义。
通过对大肠杆菌的监测和检测，可以及时发现和控制病原菌的传播，保障人民群众的健康。
同时，国家标准的执行也可以规范实验室操作，保证科研工作的准确性和安全性。
因此，各界应严格遵守大肠杆菌国家标准，共同维护公共卫生和食品安全。
大肠杆菌
大肠杆菌（Escherichia coil）是我们了解得最清楚的原核生物，它为分子生物学的发展做出了巨大的贡献。
本文简要介绍大肠杆菌的细胞壁、细胞膜、细胞核、质粒、核糖体、鞭毛等结构与功能以及大肠杆菌的产能方式和生化反应。
大肠杆菌（Escherichia coli）在自然界分布很广，是人和动物肠道中的正常菌群。
正常情况下一般不致病，但它是条件致病菌。
大肠杆菌是单细胞原核生物，具有原核生物的主要特征：细胞核为拟核，无核膜，细胞质中缺乏象高等动植物细胞中的线粒体、叶绿体等具膜结构的细胞器，核糖体为70S，以二分分裂繁殖。
大肠杆菌为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌。
其大小为：0.5～0.8μm×1.0～3.0μm。
周身鞭毛，能运动，具致育因子的菌株还具性菌毛。
1．形态结构1.1 细胞壁位于大肠杆菌的最外层，厚约11um，分为两层，即外膜和肽聚糖层。
外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，占细胞壁于重的80％，厚约8nm，位于肽聚糖层的外侧，主要由磷脂、蛋白质和脂多糖组成。
脂多糖是革兰氏阴性细菌的内毒素，也是革兰氏阴性细菌细胞壁的特有成分，主要和其抗原性、致病性及对噬菌体的敏感性有关。
肽聚糖层由1～2层网状的肽聚糖组成，占细胞壁干重的10％，厚约2～3nm，是细菌等原核生物所特有的成分。
大肠杆菌的肽聚糖由聚糖链、短肽和肽桥三部分组成。
聚糖链由N-乙酸葡糖胺和N-乙酚胞壁酸分子通过β-1，4糖苷键连接而成，短肽由L-丙氨酸→D-谷氨酸→内消旋二氨基庚二酸→D-丙氨酸组成，并由L-丙氨酸与胞壁酸相连。
一条聚糖链短肽的D-丙氨酸与另一条聚糖链短肽的内消旋二氨基庚二酸直接形成肽键（肽桥），从而使肽聚糖形成网状的整体结构。
由脂蛋白将外膜和肽聚糖层连接起来，从而使大肠杆菌的细胞壁形成一个整体结构。
1.2 细胞膜大肠杆菌细胞膜的结构和其它生物细胞膜的结构相似。
但其细胞膜中蛋白质的含量高且种类多。
其细胞膜具选择透性，从而可控制营养物质进出细胞。
鉴别大肠杆菌的方法
鉴别大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，存在于人和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌是正常肠道菌群的一部分，但有些菌株可以引起食物中毒和感染。
因此，准确鉴别大肠杆菌的方法对食品安全和公共卫生至关重要。
在鉴别大肠杆菌时，通常需要从样品中分离出细菌，并进行初步的鉴定。
下面是一些常用的鉴别大肠杆菌的方法：1. 培养基选择：大肠杆菌可以在普通富营养的培养基上生长，如营养琼脂和TSA 寒天琼脂。
与其他致病菌不同的是，大肠杆菌具有乳糖发酵能力，因此可以使用含有乳糖的培养基如EOH（大肠杆菌溶血素乳糖琼脂）、MacConkey琼脂和XLD （硫代硫酸亚铁氧化琼脂）来选择性培养大肠杆菌。
2. 形态学特征：在琼脂平板上培养后，大肠杆菌形成小型、粉红色的圆形菌落。
在显微镜下观察，大肠杆菌呈革兰阴性，为杆状细菌，长度约为2微米，直径约为1微米。
此外，大肠杆菌具有移动性，在液体培养基中呈现出活跃的运动。
3. 生化特性：通过测试大肠杆菌的生化特性，可以进一步鉴别该菌株。
常见的生化试验包括蔗糖发酵试验、气体发酵试验、硫化试验和尿素酶试验等。
大肠杆菌通常可以产生气体和酸，而不产生硫化物，同时具有尿素酶活性。
4. 分子生物学方法：PCR（聚合酶链式反应）和基因测序技术能够快速、准确地鉴定大肠杆菌。
通过特定引物放大大肠杆菌特有的基因片段，再进行测序比对，可以确定分离菌株是否为大肠杆菌。
5. 抗生素敏感性测试：鉴别大肠杆菌的方法还可以包括抗生素敏感性测试。
通过对细菌进行抗生素敏感性的测试，可以确定菌株对不同抗生素的敏感程度。
大肠杆菌通常对多种抗生素敏感，但也能产生耐药株。
通过该方法，可以观察和评估细菌感染的治疗方法。
综上所述，鉴别大肠杆菌的方法包括培养基选择、形态学特征观察、生化特性测试、分子生物学方法以及抗生素敏感性测试。
这些方法可以相互配合，提供准确和可靠的鉴别结果，对于食品安全和公共卫生具有重要意义。
大肠杆菌
大肠杆菌学名:Escherichiacoli(T.Escherich1885)大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，是与我们日常生活关系非常密切的一类细菌，学名称作“大肠埃希菌”，属于肠道杆菌大类中的一种，主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%，是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。
大肠杆菌结构简单，繁殖迅速，正常栖居条件下大多数大肠杆菌不致病，还能竞争性抵御致病菌的进攻，还能合成维生素B和K2，与人体是互利共生的关系；但在机体免疫力降低、肠道长期缺乏刺激等特殊情况下，进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。
因此，大部分大肠杆菌通常被看作机会致病菌。
在水和食品中检出，可认大肠菌群数常作为饮水、食物或药物的卫生学标准。
特点大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。
主要生活在大肠内。
1、大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核有拟核；细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。
2、大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。
3、人体与大肠杆菌的关系：在不致病的情况下（正常状况下），可认为是互利共生（一般高中阶段认为是这种关系）；在致病的情况下，可认为是寄生。
4、培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。
5、大肠杆菌在生物技术中的应用：大肠杆菌作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济，倍受遗传工程专家的重视。
目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的首选体系。
6、大肠杆菌在生态系统中的地位，假如它生活在大肠内，属于消费者，假如生活在体外则属于分解者。
7、它的基因组DNA为拟核中的一个环状分子。
同时可以有多个环状质粒DNA。
8、大肠杆菌细胞的拟核有1个DNA分子，长度约为4 700 000个碱基对，在DNA分子上分布着大约4 400个基因，每个基因的平均长度约为1 000个碱基对。
大肠杆菌
八、非致病性大肠杆菌的作用 保护肠道的微生态平衡。消耗肠道内的氧 气，创造厌氧环境，利于厌氧菌的生长； 分解代谢产物供厌氧菌生长。 能合成维生素K和B。 对外袭菌有拮抗作用。某些大肠杆菌能产 生大肠菌素，对一些病原微生物具有拮抗 作用。
九、微生物学的诊断
1、病料的采集：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、 、病料的采集 脑脊液等，腹泻者取粪便。 2、分离培养 、分离培养：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培 养基。其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌 选择性培养基。37℃培养18～24h后，观察菌落并涂 片染色镜检。 3、生化鉴定：大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发 、生化鉴定： 酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和木胶糖等产酸 产气。 IMViC试验为“+ + - -”。即为典型大肠杆菌。
四、大肠杆菌的特殊结构
1、荚膜 荚膜具有抗原性，构成了大肠杆菌的表面抗原，即 K抗原 。 2、鞭毛 由鞭毛蛋白组成，构成了细菌的鞭毛抗原，与运动 有关。 3、菌毛 在细胞表面还含有一种比鞭毛更细更短更硬的丝状 体叫菌毛，可分为普通菌毛和性菌毛。
大肠杆菌可以透过 接合作用传递遗传 物质。
五、抗原及血清型
生化试验
血清学鉴定 临床上只检测O抗原
猪水肿病菌株
Stx2e检测 检测
猪腹泻菌株
肠毒素检测
4、血清型鉴定 、 假定试验：取经生化试验证实的大肠杆菌培养物， 用致病性大肠杆菌，侵袭性大肠杆菌和产毒素大肠 杆菌多价O血清和出血性大肠杆菌的O157血清做玻 片凝集试验。 当与某一种多价O血清凝集时，在与该多价O血清 的单价O血清做实验。如与某一单价O血清发生强 凝集反应，则为假定试验阳性。 证实试验：制备O抗原悬液。原效价为1：160～1： 320的O血清，用0.5%盐水稀释至1：40。稀释血清 与抗原悬液在10mm×75mm试管内等量混合，做 试管凝集试验。混匀后放于50℃水浴箱内，经16h 后观察结果。如出现凝集，可证实为该O抗原。
大肠杆菌表达
大肠杆菌表达
大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然环境中。
由于其易于培养和转化，大肠杆菌常被用作生物学研究中的模式生物。
在分子生物学研究中，大肠杆菌常被用来表达外源蛋白。
表达外源蛋白的方法包括利用质粒系统和细菌基因组定点插入等策略。
常见的质粒系统包括pUC、pET等。
表达外源蛋白时，通过将目标基因克隆到质粒载体中，然后将质粒转化到大肠杆菌中，使细菌可以表达目标蛋白。
通过添加适当的启动子、终止子和调控元件，可以调控外源蛋白的表达水平。
另一种方法是利用细菌基因组中的定点插入位点，将目标基因插入到细菌基因组中的某个位点，达到目标蛋白的表达。
这种方法可以实现对外源蛋白的稳定高效表达，但需要进行基因组工程操作。
大肠杆菌表达系统的优点包括生长快、易于培养、高表达水平等。
然而，由于大肠杆菌的内毒素产生，需要注意控制表达条件，以避免产生毒性影响。
大肠杆菌生存条件
大肠杆菌生存条件
大肠杆菌是一种能够在不同环境中生存的细菌，其生存条件主要包括以下几个方面：
1. 温度：大肠杆菌能够在较宽的温度范围内生存，最适生长温度一般在37°C左右，但能够在10°C至50°C之间生长。
2. pH 值：大肠杆菌适宜的 pH 值范围为6.0至8.0之间，也能
够在酸性和碱性条件下生存，但适应能力相对较弱。
3. 氧气浓度：大肠杆菌属于兼性厌氧菌，适应在氧气存在的条件下生长，但也能够在缺氧或微氧环境中存活。
4. 湿度：大肠杆菌对湿度要求不高，能够在相对湿度较低的环境下生存。
5. 营养物质：大肠杆菌是一种兼性厌氧菌，能够利用多种碳源和氮源进行生长，如葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖等。
此外，还需要一些微量元素如铁、磷等。
需要注意的是，尽管大肠杆菌在自然环境中有一定的生存能力，但在室内环境中（如食品加工、医疗设施等）仍然存在潜在的感染风险。
为了防止感染和传播，需要进行适当的卫生措施，如正确的食品储存、烹饪处理和消毒等。
大肠杆菌
大肠杆菌（Escherichia coil）是我们了解得最清楚的原核生物，它为分子生物学的发展做出了巨大的贡献。
本文简要介绍大肠杆菌的细胞壁、细胞膜、细胞核、质粒、核糖体、鞭毛等结构与功能以及大肠杆菌的产能方式和生化反应。
大肠杆菌（Escherichia coli）在自然界分布很广，是人和动物肠道中的正常菌群。
正常情况下一般不致病，但它是条件致病菌。
大肠杆菌是单细胞原核生物，具有原核生物的主要特征：细胞核为拟核，无核膜，细胞质中缺乏象高等动植物细胞中的线粒体、叶绿体等具膜结构的细胞器，核糖体为70S，以二分分裂繁殖。
大肠杆菌为革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌。
其大小为：0.5～0.8μm×1.0～3.0μm。
周身鞭毛，能运动，具致育因子的菌株还具性菌毛。
1．形态结构1.1 细胞壁位于大肠杆菌的最外层，厚约11um，分为两层，即外膜和肽聚糖层。
外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，占细胞壁于重的80％，厚约8nm，位于肽聚糖层的外侧，主要由磷脂、蛋白质和脂多糖组成。
脂多糖是革兰氏阴性细菌的内毒素，也是革兰氏阴性细菌细胞壁的特有成分，主要和其抗原性、致病性及对噬菌体的敏感性有关。
肽聚糖层由1～2层网状的肽聚糖组成，占细胞壁干重的10％，厚约2～3nm，是细菌等原核生物所特有的成分。
大肠杆菌的肽聚糖由聚糖链、短肽和肽桥三部分组成。
聚糖链由N-乙酸葡糖胺和N-乙酚胞壁酸分子通过β-1，4糖苷键连接而成，短肽由L-丙氨酸→D-谷氨酸→内消旋二氨基庚二酸→D-丙氨酸组成，并由L-丙氨酸与胞壁酸相连。
一条聚糖链短肽的D-丙氨酸与另一条聚糖链短肽的内消旋二氨基庚二酸直接形成肽键（肽桥），从而使肽聚糖形成网状的整体结构。
由脂蛋白将外膜和肽聚糖层连接起来，从而使大肠杆菌的细胞壁形成一个整体结构。
1.2 细胞膜大肠杆菌细胞膜的结构和其它生物细胞膜的结构相似。
但其细胞膜中蛋白质的含量高且种类多。
其细胞膜具选择透性，从而可控制营养物质进出细胞。
大肠杆菌——总结
一、大肠杆菌
1.形态及染色特性
寄生于大多数人和温血动物肠道内正常菌群成员之一；革兰氏染色为阴性，呈长直杆状。
2.培养及生化特性
本菌为兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好，最适生长温度为37℃, pH为7.2—7.4。
麦康凯琼脂上形成红色菌落；在伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属闪光的菌落，在SS 琼脂上一般不生长或生长较差，生长者呈红色。
一些致病性菌株在绵羊血平板上呈β溶血。
在营养琼脂上生长24h后，形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落.直径2—3mm。
S型菌株在肉汤中培养18〜24h，呈均匀浑浊，管底有黏性沉淀,液面管壁有菌环。
3.菌落形态及细菌形态
（1）大肠杆菌在麦康凯上的菌落形态
（2）大肠杆菌在伊红美兰上菌落形态
4.细菌革兰氏染色镜下形态
5.大肠杆菌。
大肠杆菌是什么病毒吗
大肠杆菌是什么病毒吗
一、大肠杆菌是什么病毒吗1. 大肠杆菌是什么病毒吗2. 感染大肠杆菌的症状 3. 大肠杆菌如何被杀死二、大肠杆菌的传播途径三、大肠杆菌如何预防
大肠杆菌是什么病毒吗
1、大肠杆菌是什么病毒吗大肠杆菌不是病毒,是肠道细菌。
大肠杆菌是人和动物肠道中的正常栖居菌,婴儿出生后即随哺乳进入肠道,与人终身相伴,几乎占粪便干重的1/3。
国家规定,每毫升饮用水中的菌落总数小于100,每100毫升水中不得检出总大肠菌群。
大肠杆菌为埃希氏菌属代表菌。
一般多不致病,为人和动物肠道中的常居菌,在一定条件下可引起肠道外感染。
大肠杆菌潜伏期通常为3至4日,但亦会长达9日。
某些血清型菌株的致病性强,引起腹泻,统称致病性大肠杆菌。
该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强,在自然界的水中可存活数周至数月,在温度较低的粪便中存活更久。
2、感染大肠杆菌的症状人体感染大肠杆菌后,会引起肠道外感染,以泌尿系感染为主,如尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎。
也可引起腹膜炎、胆囊炎、阑尾炎等。
婴儿、年老体弱、慢性消耗性疾病、大面积烧伤患者,大肠杆菌可侵入血流,引起败血症。
某些血清型大肠杆菌能引起人类腹泻,同时伴有发热、呕吐等表现。
3、大肠杆菌如何被杀死大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强,55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。
在自然界的水中可存活数周至数月,在温度较低的粪便中存活更久。
夏季是各种肠道疾病的高发期,要多加小心。
不要食用生冷变质食品,蔬菜要洗净,剩饭菜要充分加热,饭前便后要洗手。
烹饪时,生食及熟食应。
《大肠杆菌》课件
THANKS
感谢观看
。
食物中毒通常发生在食用被污染 的肉类、奶制品、蔬菜等食品后 ，因此食品生产和加工过程中的
卫生控制至关重要。
抗生素抗性与超级细菌
抗生素是治疗细菌感染的重要药物，但长期使用抗生素会导致细菌产生抗药性。
大肠杆菌等细菌在长期接触抗生素的过程中，会逐渐适应并抵抗抗生素的作用，形 成超级细菌。
超级细菌对多种抗生素具有抗药性，给治疗带来了极大的困难，也对全球公共卫生 安全构成了严重威胁。
致病性或提高其生物合成能力，为工业生产和医疗应入探究大肠杆菌的致病机制，为开发更有效的抗 菌药物和治疗方法提供理论支持。
加强跨学科合作
加强生物学、化学、物理学等领域的跨学科合作，利用新 技术和新方法，推动大肠杆菌研究的创新发展。
提高应用价值
将大肠杆菌的研究成果应用于实际生产和医疗实践中，提 高其应用价值和社会效益。同时，需要关注伦理和安全问 题，确保研究工作的合规性和可持续性。
致病性大肠杆菌的传播途径多样，包 括动物-人传播、人-人传播和食物-人 传播。
这些致病性大肠杆菌通过食物、水或 接触污染表面进入人体，导致腹泻、 呕吐、腹痛等症状，严重时甚至会导 致休克和死亡。
食物中毒与感染
食物中毒是指食用了被致病性大 肠杆菌污染的食物而引起的急性
中毒性疾病。
感染后可能出现恶心、呕吐、腹 痛、腹泻、发热等症状，严重时 可导致脱水、电解质紊乱和休克
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大肠杆菌的研究进展
新技术与新方法
基因组学技术
利用新一代测序技术，对大肠杆 菌基因组进行全面解析，发现新 的基因和基因变异，为研究其生 物学特性和致病机制提供基础。
蛋白质组学技术
通过蛋白质组学方法，研究大肠杆 菌的蛋白质表达和功能，揭示其在 不同环境下的适应机制和调控机制 。
大肠杆菌形态特征
大肠杆菌形态特征大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，是人体和动物肠道中最主要的有益菌之一、它具有以下的形态特征：1.形态特征大肠杆菌呈杆状，通常为直杆状或稍微弯曲。
它的长度约为1.5至6微米，直径约为0.5微米。
细菌细胞之间通常呈单独分离的独立状态。
2.色素特征大肠杆菌没有颜色，通常呈无色透明状态。
然而，一些毒力菌株可能会产生特定的荧光色素，并具有特定的荧光染色。
3.附着结构大肠杆菌具有许多附着结构，包括鞭毛、菌毛和纤毛。
这些结构通过细菌细胞表面的附着蛋白质发挥作用。
鞭毛是长丝状的结构，在细菌移动和感受环境刺激方面起着重要作用。
菌毛比鞭毛短，呈柱状，用于细菌之间的附着和交流。
纤毛也是附着细菌的结构，通常细菌细胞表面具有几百到几千个纤毛。
4.胞外多聚物（胞外多糖）大肠杆菌的表面覆盖有多种胞外多聚物，包括多糖。
这些多糖在保护菌体免受环境的侵害以及与其他细菌或宿主细胞进行交互方面起着重要作用。
5.壁结构大肠杆菌有复杂的细胞壁结构，包括内层质膜、纤维素外层膜和外层膜。
内层质膜起到维持细菌细胞形状和膜蛋白质定位的作用。
纤维素外层膜是由纤维素组成的蛋白质复合物，具有保护细菌免受宿主免疫系统攻击的作用。
外层膜是含脂质的双层结构，与环境中的物质交换起重要作用。
总之，大肠杆菌是一种常见的革兰氏阴性杆菌，它具有直杆状的形态、无色透明的外观和多种附着结构。
它的表面覆盖有胞外多聚物，并具有复杂的细胞壁结构。
这些形态特征是大肠杆菌在生物学功能和与环境相互作用中的重要基础。
大肠杆菌
大肠杆菌，一生的“朋友”人出生几小时后，大肠杆菌就能通过口腔进入人的消化道，并在消化道后段大量繁殖，以后终生存在，直到死亡降临。
因此，说大肠杆菌是人一生最老的朋友一点也不过分，因为它陪伴了人一生，无论贫穷富裕，疾病健康，年轻衰老，一直不离不弃，祸福相依。
但这个朋友与一般的朋友不同，它的多重身份让它非常与众不同……简介大肠杆菌，1885年被德国医师Escherich从婴儿粪便中分离出来，学名大肠埃希氏菌(E.coli)，简称大肠杆菌。
大肠杆菌是肠杆菌科细菌的模式种，为中等大小的革兰阴性直杆菌。
多数菌株有周鞭毛和菌毛，有些菌株有包膜，兼性厌氧，由于多寄生于人和动物肠道中，进化为嗜温菌，最适生长温度为37℃。
在营养琼脂上的菌落有多种形态，一种为光滑型，低凸起，湿润，灰白色，表面有光泽，边缘整齐，在生理盐水中易乳化；一种为粗糙型，干燥，在生理盐水中不易乳化；也有中间型菌落和黏液型菌落。
大肠杆菌营养要求不高，在普通培养基中生长良好。
生化反应活泼，能发酵乳糖和葡萄糖，由于体内有甲酸解氢酶，能将发酵糖产生的甲酸进一步分解为CO2和H2，故产酸又产气。
作为革兰阴性菌，大肠杆菌外膜由脂质双层、脂蛋白和脂多糖（又称内毒素）3部分组成。
脂多糖又由脂质A、核心多糖、特异性多糖3部分组成。
脂质A与致病性有关，核心多糖具有属特异性，特异性多糖具有种特异性，是菌体抗原。
大肠杆菌分类时，根据其菌体（O）、表面（K）、鞭毛（H）三种主要抗原划分，称为血清型，如O111、K58、H2。
作用大肠杆菌属于正常寄居菌，是肠道正常菌群的组成部分，通常情况下，认为它和人属于共生关系。
大肠杆菌的作用主要有：1、保护动物肠道的微生态平衡。
人和动物肠道中以厌氧菌为主，大肠杆菌在肠道中生长繁殖消耗肠道中的氧气，创造厌氧环境，有利于厌氧菌的生长；同时，大肠杆菌分解的一些代谢产物还可以供厌氧菌利用。
作为肠道正常菌群的一个成员，大肠杆菌与需氧菌、兼性厌氧菌、专性厌氧菌在微观环境中保持相对稳定的平衡状态。
大肠杆菌 生物安全等级
大肠杆菌生物安全等级
大肠杆菌是一种广泛存在于自然界中的细菌，具有重要的应用价值，但同时也可能对人类和动物造成健康危害。
因此，大肠杆菌被归入生物安全等级中。
生物安全等级是根据生物实验室中工作的危险性和难度而划分的级别。
大肠杆菌被划分为生物安全等级1，即最低级别，因为大肠杆菌对人类和动物的病原性较低，不会造成明显的危害。
尽管如此，当与人类或其他生物接触时，大肠杆菌仍然需要被谨慎处理。
在实验室中，人们应该遵循正确的安全操作程序，使用适当的个人防护设备，以及进行妥善的消毒和废物处理。
总之，大肠杆菌虽然被归入较低级别的生物安全等级中，但在实验室中仍然需要注意生物安全问题。
只有这样，才能充分发挥大肠杆菌的应用价值，并保证人类和动物的健康安全。
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大肠杆菌的保存与培养
大肠杆菌的保存与培养大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道菌，在许多实验室中用作模型生物。
为了长期保存和使用大肠杆菌，需要进行保存和培养。
本文旨在介绍大肠杆菌的保存和培养方法。
大肠杆菌的保存方法冻存法冻存法是保存大肠杆菌最常用的方法之一。
它使用冻干法或液氮法将菌株保存在低温下，以避免菌株变异或污染。
冻干法冻干法是将菌株在液氮下冷冻后进行干燥。
这种方法需要使用冻干器。
冻干器通过减压将菌株冻干，并将其保存在低温下。
液氮法液氮法是将菌株在液氮中冷冻后进行保存。
菌株存储在液氮罐中，使用时取出并解冻。
非冷冻法非冷冻法也可以用于保存大肠杆菌，例如保存在琼脂板上或制备干粉剂。
不过，这些方法缺乏长期保存和使用的稳定性，更适合短期保存。
鉴定编码大肠杆菌可以根据不同的基因、菌株和形态进行分类。
为了便于记忆和识别，每个菌株都有一个独特的编码。
这些编码可以在数据库中查找，以便进行鉴定和分类。
大肠杆菌的培养方法培养基培养基是生长大肠杆菌的基本食物。
常用的培养基包括肉汤培养基、三蔗糖培养基和Luria Broth培养基。
这些培养基提供大量的营养物质和水分，以支持细菌的生长和繁殖。
培养条件大肠杆菌的生长需要适当的环境条件。
最适宜的温度为37°C，pH值为7.0到7.5。
此外，大肠杆菌需要氧气和适当的紫外线照射。
分离和纯化分离和纯化是从混合菌群中收集大肠杆菌的过程。
这些步骤有助于在单独的培养皿中产生纯种大肠杆菌，并减少混杂菌群带来的影响。
分离大肠杆菌的常用方法是麻醉稀释法，也称为涂片法。
涂片法将混合菌群分散到琼脂板的表面上，并等待菌落生长和扩散。
选出大肠杆菌的单一菌群后，可以将其移植到另一培养皿中进行纯化。
大肠杆菌是实验室常见的菌株之一。
为了存储和使用大肠杆菌，需要使用冻存法或其他方法保存，使用培养基提供必要的营养物质支持生长，根据适宜的生长条件进行培养，加强分离和纯化步骤可以提高培养质量。
这些步骤可以帮助实验人员快速高效地进行大肠杆菌的保存和培养。
大肠杆菌
——大肠杆菌 ——大肠杆菌
大肠杆菌
• 大肠杆菌的分类：根据对畜禽生产的危害不同特点特 大肠杆菌的分类： 性，可将繁多的大肠杆菌分为三类： • 1、正常大肠菌群：肠道后段常住菌，合成并分泌维 生素K、维生素B、叶酸等，提供宿主利用。 • 2、病原性大肠杆菌：大肠杆菌中一小部分，包括溶 血性大肠杆菌，如O138、O141、O8、O9、O115、O78、 O1、O2、O78、O7引起动物多种疾病。 • 3、条件性大肠杆菌：多种因素导致动物抵抗力减弱， 或者消化道正常微生物区系发生改变时，寄居在宿主 体内的这类大肠杆菌才会成为致病的病原菌。
大肠杆菌
• 2、涂片、镜检
革兰氏 ？性（光镜下）
箭头所指？（电镜下
大肠杆菌
• 3、分离培养 • 初次分离用麦糠凯琼脂，形成红色菌落。
粉红色菌落
• 接种到三糖铁斜面 • 发黄、产气
Why？
• 在伊红美兰琼脂上
紫黑色金 属光泽菌 落
大肠杆菌
• 必要时做生化试验
大肠杆菌
• 卫生学指标 用以判定饮水、食品等卫生程度，主 要有三项，分别是大肠杆菌指数：指1 000ml水 中发现大肠杆菌数；大肠杆菌价：指检出一个大 肠杆菌的最少水量；细菌总数：每毫升（克）样 品中细菌总数。 • 公共卫生：我国规定饮用水细菌总数不得超过 100；大肠杆菌指数不得超过3；大肠杆菌菌价不 得少于330。我国畜禽饮水参照人用标准执行。
大肠杆菌
• 大肠杆菌的致病性： • O138、O141、O8、O9、O115常引起初生仔猪黄痢和 断乳仔猪水肿病，而且具有溶血性，称为溶血性 大肠杆菌； • O78引起犊牛、羔羊下痢； • 而O8、O7对仔猪、犊牛、羔羊均能致病。 • O1、O2检查 • 1、采集病料 • 下痢生前：取排泄物，或从患病部位取材料（尿、 血、脓）。 • 死后：小块肝脏、脾、胆囊、淋巴结、心血及胃 肠内容物。
大肠杆菌
2006年，巴西圣保罗大学将枯草芽孢杆菌作为表达载体表达 LTB，对致病菌或内源性感染 的条件致病菌均有明显的抑制作用。
兽医生物制品学-分论
大肠杆菌
小组成员：余兆鸿 罗洪瑶 胡国帅 黄荣浩
第一章 大肠杆菌
大肠杆菌是革兰氏阴性杆菌。
多数是肠道的正常菌群，少数为病原菌。
埃希菌属 （Escherichia)
埃希菌属有5个种，其中最重要的 是大肠埃希菌俗称大肠杆菌（E.coli)， 是最常见的临床分离菌。
形态特征：
大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢的
致病性
根据毒力因子与发病机制的不同，Gyles认为与 动物疾病有关的病原性大肠杆菌可分为五类:
• 1、产肠毒素大肠杆菌 (ETEC) • 2、产类志贺毒素大肠杆菌 (SLTEC) • 3、肠致病性大肠杆菌 (EPEC) • 4、败血性大肠杆菌(SEPEC) • 5、尿道致病性大肠杆菌 (UPEC)
麦康凯氏培养基培养 2、制造要点
(1)、种子繁殖： 马丁肉汤培养-划线接种麦康凯氏培养基培养-接种马丁琼脂斜面培养-作为一级种子-取一级种
子接种马丁肉汤培养-得到二级种子。 (2)、菌液制备：用玻璃瓶或培养罐通气培养，按容积装入70%培养基及花生油消泡剂。 (3)、配苗与封装： 配苗：每5份菌液加1份氢氧化铝胶，同时按总量的0.005%加硫柳汞，充分震荡，2～8 ℃静置，
羔羊大肠杆菌病
流行特点
主要是通过消化道感染， 其次是通过脐部感染，也有 部分是通过呼吸道感染。
发病特点及临床症状
羔羊发生一种以口鼻流沫、呼吸困难和胸膜肺炎为 主要特征的疾病。发病的羔羊据统计有121只，病羊多为 4～20日龄的羔羊，死亡54只，死亡率约44.6%，病程短， 如不及时治疗，约30min到数小时便死亡。发病的羔羊在 刚开始时体温升高，达41～42℃，精神委顿，食欲不振， 腹部胀气，继之出现呼吸困难，脉搏快而弱，口流白沫， 鼻流黏液，运动失调，卧地磨牙，头弯向一侧，最后在 昏迷中死亡，很少见有腹泻病羔。
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大肠杆菌目录生物学分类学名常见种类介绍大肠杆菌导致的疾病大肠杆菌的传播途径大肠杆菌在生物技术中的应用[编辑本段]生物学分类细菌域(Bacteria)、变形菌门(Proteobacteria)、γ-变形菌纲(Gammaproteobacteria)、肠杆菌目(Enterobacteriales)、肠杆菌科(Enterobacteriaceae)、埃希氏菌属(Escherichia)、大肠杆菌种(E. coli)[编辑本段]学名Escherichia coli （T. Escherich 1885）[编辑本段]常见种类介绍大肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。
直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症，它是一种普通的原核生物，是人类和大多数温血动物肠道中的正常茵群。
但也有某些血清型的大肠杆菌可引起不同症状的腹泻，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。
大肠杆菌0 157：H7血清型属肠出血性大肠杆菌，自1982年在美国首先发现以来，包括我国等许多国家都有报道，且日见增加。
日本近年来因食物污染该菌导致的数起大暴发，格外引人注目。
在美国和加拿大通常分离的肠道致病菌中，目前它已排在第二或第三位。
大肠杆菌O 157：H7引起肠出血性腹泻，约2％～7％的病人会发展成溶血性尿毒综合征，儿童与老人最容易出现后一种情况。
致病性大肠杆菌通过污染饮水、食品、娱乐水体引起疾病暴发流行，病情严重者，可危急生命。
大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。
周身鞭毛，能运动，无芽孢。
能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素B和K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。
正常栖居条件下不致病。
但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。
在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。
兼性厌氧菌。
在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。
若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。
因此，大肠菌群数（或大肠菌值）常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。
大肠杆菌的抗原成分复杂，可分为菌体抗原（O）、鞭毛抗原（H）和表面抗原（K），后者有抗机体吞噬和抗补体的能力。
根据菌体抗原的不同，可将大肠杆菌分为150多型，其中有16个血清型为致病性大肠杆菌，常引起流行性婴儿腹泄和成人肋膜炎。
大肠杆菌是研究微生物遗传的重要材料，如局限性转导就是1954年在大肠杆菌K12菌株中发现的。
莱德伯格（Lederberg）采用两株大肠杆菌的营养缺陷型进行实验，奠定了研究细菌接合方法学上的基础，以及基因工程的研究。
大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，主要寄生在大肠内。
它侵入人体一些部位时，可引起感染，如腹膜炎、胆囊炎、膀胱炎及腹泻等。
人在感染大肠杆菌后的症状为胃痛、呕吐、腹泻和发热。
感染可能是致命性的，尤其是对孩子及老人。
大肠细菌（E. coli）为埃希氏菌属(Escherichia)代表菌。
一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。
某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称致病性大肠杆菌。
该菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强，55℃经60分钟或60℃加热15分钟仍有部分细菌存活。
在自然界的水中可存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久。
胆盐、煌绿等对大肠杆菌有抑制作用。
对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感，但易耐药，是由带有R因子的质粒转移而获得的。
致病物质:大肠杆菌具有很多毒力因子，包括内毒素，荚膜，〣型分泌系统，黏附素和外毒素等。
（〣型分泌系统是指能向真核靶细胞内输送毒性基因产物的细菌效应系统。
约由20余种蛋白质组成。
）黏附素能使细菌紧密黏着在泌尿道和肠道的细胞上，避免因排尿时尿液的冲刷和肠道的蠕动作用而被排除。
大肠杆菌黏附素的特点是具有高特异性。
包括：定植因子抗原〡，〢，〣；集聚黏附菌毛〡和〣；束形成菌毛；紧密黏附素；P菌毛；侵袭质粒抗原蛋白和Dr菌毛等。
外毒素大肠杆菌能产多种的外毒素，包括：志贺毒素〡和〢；耐热肠毒素〡和〢；不耐热肠毒素〡和〢。
此外，溶血素A在尿路致病性大肠杆菌所致疾病中有重要作用。
大肠杆菌血清学分型基础（即其抗原）大肠埃希菌主要有三种抗原：O抗原，为细胞壁脂多糖最外层的特异性多糖，由重复的多糖单位所组成。
该抗原刺激机体主要产生IgM类抗体（出现早，消失快）。
K抗原，位于O抗原外层，为多糖，与细菌的侵袭力有关。
K抗原分为A，B，L三型。
H抗原，位于鞭毛上，加热和用酒精处理，可使H抗原变性或丧失。
H抗原主要刺激机体产生IgG类抗体，与其他肠道菌基本无交叉反应。
表示大肠杆菌血清型的方式是按O：K：H排列，例如：O111：K58（B4）：H2 [编辑本段]大肠杆菌在生物技术中的应用大肠杆菌作为外源基因表达的宿主,遗传背景清楚,技术操作简单,培养条件简单,大规模发酵经济,倍受遗传工程专家的重视.目前大肠杆菌是应用最广泛,最成功的表达体系,常做高效表达的首选体系真核基因在大肠杆菌中表达,必须有合适的表达载体(Vector),常用载体:pBV220,pET系统目的基因在大肠杆菌中表达的情况:大肠杆菌更适合原核基因的表达,外源基因表达产量与单位体积产量是正相相关的,而单位体积产量与细胞浓度和每个细胞平均表达产量呈正相相关.细胞浓度与生长速率,外源基因拷贝数和表达产物产量之间存在动态平衡,单个细胞的产量又与外源基因拷贝数,基因表达效率,表达产物的稳定性和细胞代谢负荷等因素有关。
预防方法：1.保持地方及厨房器皿清洁，并把垃圾妥为弃置。
2.保持双手清洁，经常修剪指甲。
3.进食或处理食物前，应用肥皂及清水洗净双手，如厕或更换尿片后亦应洗手。
4.食水应采用自来水，并最好煮沸后才饮用。
5.应从可靠的地方购买新鲜食物，不要光顾无牌小贩。
6.避免进食高危食物，例如未经低温消毒法处理的牛奶，以及未熟透的汉堡扒、碎牛肉和其它肉类食品。
7.烹调食物时，应穿清洁、可洗涤的围裙，并戴上帽子。
8.食物应彻底清洗。
9.易腐坏食物应用盖盖好，存放于雪柜中。
10.生的食物及熟食，尤其是牛肉及牛的内脏，应分开处理和存放(雪柜上层存放熟食，下层存放生的食物)，避免交叉污染。
11.雪柜应定期清洁和融雪，温度应保持于摄氏4度或以下。
12.若食物的所有部分均加热至摄氏75度，便可消灭大肠杆菌O157 : H7；因此，碎牛肉及汉堡扒应彻底煮至摄氏75度达2至3分钟，直至煮熟的肉完全转为褐色，而肉汁亦变得清澈。
13.不要徒手处理熟食；如有需要，应戴上手套。
14.食物煮熟后应尽快食用。
15.如有需要保留吃剩的熟食，应该加以冷藏，并尽快食用。
食用前应彻底翻热。
变质的食物应该弃掉。
大肠杆菌是人和许多动物肠道中最主要且数量最多的一种细菌，周身鞭毛，能运动，无芽孢。
主要生活在大肠内。
1、大肠杆菌是细菌，属于原核生物；具有由肽聚糖组成的细胞壁，只含有核糖体简单的细胞器，没有细胞核有拟核；细胞质中的质粒常用作基因工程中的运载体。
2、大肠杆菌的代谢类型是异养兼性厌氧型。
3、人体与大肠杆菌的关系：在不致病的情况下（正常状况下），可认为是互利共生（一般高中阶段认为是这种关系）；在致病的情况下，可认为是寄生。
4、培养基中加入伊红美蓝遇大肠杆菌，菌落呈深紫色，并有金属光泽，可鉴别大肠杆菌是否存在。
5、大肠杆菌在生物技术中的应用：大肠杆菌作为外源基因表达的宿主，遗传背景清楚，技术操作简单，培养条件简单，大规模发酵经济,倍受遗传工程专家的重视。
目前大肠杆菌是应用最广泛，最成功的表达体系，常做高效表达的首选体系。
6、大肠杆菌在生态系统中的地位，假如它生活在大肠内，属于消费者，假如生活在体外则属于分解者大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群检验方法：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。
目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。
两个标准方法在检测程序上略有不同。
（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。
乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。
36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。
同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。
本方法采用两步法：推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST 肉汤。
36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
以BGLB产气为阳性。
查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。
具体操作参见SN0169-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》三、说明：1．MPN检索表：MPN 为最大可能数(Most Probable Number)的简称。
这种方法，对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近似的数值。
MPN检索表只给了三个稀释度，如改用不同的稀释度，则表内数字应相应降低或增加10倍。
注意国家标准和行业标准中所附MPN表所用稀释度是不同的，而且结果报告单位也不相同。
2．初发酵和证实试验：无论是国家标准的三步法还是行业标准的两步法，都利用了乳糖发酵管进行了两次发酵试验，培养基的配制略有不同，但都是为了证实培养物是否符合大肠菌群的定义，即“在37℃分解乳糖产酸产气”。