丙二醛MDA、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶(SOD)的测定

丙二醛MDA、总抗氧化能力、超氧化物歧化酶（SOD）的

测定

丙二醛MDA测定

测试所需仪器设备：

可见光分光光度计，可调到95℃左右的恒温水浴箱（或者铝锅内放几个去掉盖子的易拉罐，将罐壁及底部穿数十个孔，以便水的进入，用来代替水浴箱）。离心机。

100Ｔ试剂盒组成与配制：

试剂一：液体20mL*1瓶，室温保存．（天冷时会凝固，每次测试前适当水浴加温以加速溶解，直至透明方可应用）。

试剂二：液体12mL*1瓶，用时每瓶加340mL双蒸水混匀，4℃冷藏。试剂三：粉剂*1支，4℃冷藏。

1.按规范操作方法来配制MDA3号试剂：将1支100Ｔ的MDA3号

粉剂倒入烧杯内加90℃～100℃的热蒸馏水64mL,充分溶解

（溶解过程中可适当加热）。冷却后加冰醋酸60mL混匀。

2.再将上述配好的MDA3号试剂用50％冰醋酸按2：1进行稀释，

用多少配多少。

例如您需要用微量法测MDA需要试剂三为15mL，则可以取上

述按规范操作法配好的试剂三10mL加冰醋酸5mL，混匀即可。

配好的试剂避光4℃冰箱冷藏（冰醋酸自备）

注：因蒸馏水热胀冷缩，加热过程要蒸发，本应加60mL现多加

4mL，冷却后在60mL。

50％冰醋酸的配制是50mL双蒸水加50mL冰醋酸混合而成的。

冰醋酸又名乙酸，一般的医药公司、化剂公司均有售，要购AR级分析纯级的乙酸较好，乙酸含量为99％以上。

用时将粉剂加入到90℃～100℃的热双蒸水60mL中，（在溶解过程中可适当加热），充分溶解后用双蒸水补足至60mL再加冰醋酸

60mL，混匀，配好的试剂避光冷藏。冰醋酸自备。

标准品：10nmoL/mL四乙氧基丙烷5mL*1瓶，4℃冷藏。

测试盒冷藏至少可保存一年。

操作步骤：

混匀（摇动几下试管架）

旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴（或用锅开盖煮沸40分钟），取出后流水冷却，然后3500～4000转/分，离心10分钟，取上清***，532nm处，1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度值。

a*表示所取的样品量，标准品量，无水乙醇的量、试剂一的量，四者均相等，例如样品取0.1mL，则标准品、无水乙醇及试剂一也取

0.1mL，若样品取0.2mL，则标准品、无水乙醇及试剂一也取0.2mL。因吸光度与加样量呈正比曲线，因而结果不受影响。

**一般情况下，标准管、标准空白及测定空白管每批只需做1～2只，若测定管中蛋白量不是太高，则测定空白管可以不测，用标准空白管来代替测定空白管。

***吸取上清比色时了好用移液器吸取上清加入比色皿中，尽量避免倾倒，以免沉淀进入比色皿，影响吸光度。

注1.用此方法，所测各管吸光度值比规范操作方法要高，但不影响最终结果。

注2.5％组织匀浆a*取0.1～0.2mL进行检测较好。

注3.若发现检测样本吸光主葢低，可以将水浴时间40分钟延长至

80分钟，但您的同一课题中MDA 的检测都必须延长至80分钟，以免造成批间差异。

注4. 此方法标准管参考吸光度：当标准品取样量为0.1mL 时，则标

准管吸光度减去标准空白管吸光度为0.103～0.112。当标准品取样量为0.2mL 时，则标准管吸光度减去标准空白管吸光度为0.206～0.224。 计算公式 1. 计算公式：

（１）血清中MDA 含量计算公式：

样本测试前稀释倍数

标准品浓度（白管吸光度

标准管吸光度－标准空白管吸光度

测定管吸光度－测定空＝

含量（血清中⨯⨯)/10)/mL nmoL mL nmoL MDA

（２）组织中MDA 含量计算公式：

)

/)/10*)/mL mgprot mL nmoL mgprot nmoL MDA 蛋白含量（标准品浓度（白管吸光度

标准管吸光度－标准空白管吸光度

测定管吸光度－测定空＝

含量（组织中÷⨯*nmol/mgprot 为纳摩尔/毫克蛋白

超氧化物歧化酶（SOD）测试盒

100管试剂盒的组成与配制

试剂一：贮备液：10mL*1瓶（天冷时或放冰箱会有部分结晶析出，需热水浴溶解后再用），试剂一应用液的配制：用时每瓶加

蒸馏水稀释至100mL，4℃保存。

试剂二：液体10mL*1瓶，4℃～10℃保存。

试剂三：液体10mL*1瓶，4℃～10℃保存。

试剂四：液体350μL*2支，4℃保存，不可冷冻；4号稀释液10mL*1瓶，4℃保存。

用时二者按1：14稀释，可以一次稀释，也可以分次稀释。

配好的试剂四4℃保存，不可冷冻。配好后可保存2～3个

月。注：所用吸嘴最好为专用且消毒处理过。

试剂五：粉剂*１支，用时加70℃～80℃热双蒸水75mL，配好后的试剂避光4℃冷藏。

试剂六：粉剂*1支，用时加蒸馏水75mL溶解后备用，配好后的试剂避光4℃冷藏保存。

显色剂的配制：按照试剂五：试剂六：冰乙酸＝3：3：2的体积比配成显色剂，4℃冷藏。

操作

总SOD(T-SOD)活力的测定：

混匀，室温放置10分钟，于波长550nm 处，1cm 光径比色杯，蒸馏

水调零，比色。

计算

（一）血清总ＳＯＤ活力计算：

1. 定义：每毫升反应液中ＳＯＤ抑制率达50％时所对应的ＳＯＤ量

为一个ＳＯＤ活力单位（Ｕ）。

2. 血清总SOD 活力计算公式：

样本测试前的稀释倍数

反应体系的稀释倍数

％对照管吸光度

测定管吸光度

对照管吸光度活力（总⨯⨯÷-=

50)/mL U SOD