兔场免疫程序与药物保健技术

兔场免疫程序与药物保健技术
一、免疫程序
1. 地克珠利（商品名为杀球灵等），按每公斤饲料或饮水添加1毫克饲喂进行预防；治疗时剂量加倍，连用3-5天。

1、20天
大肠杆菌苗兔皮下注射2毫升/只。

2、25-27天
魏氏梭菌苗皮下注射1-2毫升/只。

3、33-35天
种兔场用兔瘟、兔巴氏杆菌病单苗；扩繁场、农户用兔瘟-巴氏杆菌病二联苗，皮下注射2毫升/只。

4、60天
用兔瘟-巴氏杆菌病二联苗，皮下注射2毫升/只。

5、60天后（青年兔、成年兔）
每3-4个月一次，用兔瘟-巴氏杆菌病二联苗，皮下注射2毫升/只；魏氏梭菌单苗，皮下注射2毫升/只
二、药物保健技术
（一）球虫病
1. 地克珠利（商品名为杀球灵等） 3月龄内兔按每公斤饲料或饮水1-2毫克连续添加饲喂进行预防。

2. 莫能菌素 3月龄内兔按每公斤饲料20-40毫克连续添加饲喂进行预防。

（二）螨病
1、种母兔配种前用长效伊维菌素注射液按0.2ml/公斤体重注射一次以控制螨病。

2、种公兔每3个月用长效伊维菌素注射液按0.2ml/公斤体重注射一次。

长毛兔白细胞介素-4基因的克隆和真核表达质粒的构建
应用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，在国内首次从ConA诱导培养的长毛
兔外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到IL-4 基因，并将其克隆到pMD18-T载体中，经菌落
PCR、酶切分析、序列测定鉴定及序列分析，克隆得到的IL-4 基因（序列号：EF606761）的开放阅读框含有441个核苷酸，编码147个氨基酸，其中前24个氨基酸组成信号肽，成熟肽含123个氨基酸残基。

与Genbank中已登录的欧洲兔IL-4基因（序列号：AF169169）的核苷酸序列和推知氨基酸序列同源性均为100％；与其他哺乳动物如犬、猫、人、猪、牛、羊、马、大熊猫和鼠等的核苷酸同源性在57.0％(大熊猫)～69.8％(人)之间；编码氨基酸同源性在43.0％(鼠)～53.6％(人)之间。

构建的进化树结果都表明，兔与人的亲缘关系相对较近，与鼠的亲缘关系最远。

应用DNA重组技术，将克隆的长毛兔IL-4 基因克隆到真核表达载体上pCDNA3.1(+)，将构建的重组真核表达质粒pCDNA3.1(+)/IL-4转染非洲绿猴肾细胞( COS7细胞株)，RT-PCR 检测IL-4的转录表达；用兔淋巴母细胞增殖实验检测其在真核细胞中表达产物对兔淋巴细胞的刺激活性。

本研究成果为了解各物种间白细胞介素序列的进化关系提供理论依据，同时也为进一步研究兔IL-4在体内外的作用及将其作为免疫增强剂与免疫治疗剂应用于临床奠定了基础。

长毛兔白细胞介素2基因的克隆、真核表达载体构建及表达活性检测应用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，从ConA诱导培养的长毛兔外周血淋巴细胞总RNA中扩增得到长毛兔IL-2基因，并将其克隆到pMD18-T载体中。

经菌落PCR鉴定、序列测定及序列分析，克隆得到的IL-2基因开放阅读框由462个核苷酸组成，编码一个由153个氨基酸组成的多肽，包括编码20个氨基酸的信号肽和133个氨基酸的成熟肽。

与长毛兔、欧洲兔及肉兔IL-2基因同源性分别为100％、99.4％及98.9％，与Genbank中其他哺乳动物的IL-2序列比较，它与猿、人、猫、马、家犬、猪、大熊猫、水牛、山羊及鼠等的核苷酸同源性在75.0％(鼠)～86.9％(猿)之间；进化树构建结果表明：在物种之间，兔与猿IL-2基因遗传距离较近。

将pMD18-T-IL-2双酶切，回收酶切产物，与同样酶切的pcDNA3.1(+)质粒定向连接并转化到大肠杆菌中，构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-IL-2。

通过脂质体介导将构建的真核表达重组质粒转染到Cos-7细胞，获得具有一定生物学活性的IL-2蛋白。

发表论文：贾小勇杨光友古小彬赖松家水牛痒螨和兔痒螨第二转录间隔区(ITS-2)基因序列分析昆虫学报2008,51(5):545-550。