BG11液体培养配方

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BG11液体培养基就是：

Stock1 定容100mL

柠檬酸 0.3g

柠檬酸铁胺 0.3g

EDTANa2 0.05g

Stock2 定容1000mL

NaNO3 30g

K2HPO4 0.78g

MgSO4·7H2O 1.5g

Stock3 定容100mL

CaCl2·2H2O 1.9g

Stock4 定容100mL

Na2CO3 2g

Stock5 定容1000mL

H3BO3 2.86g

MnCl2·4H2O 1.81g

ZnSO4·7H2O 0.222g

Na2MnO4·2H2O 0.391g

CuSO4·5H2O 0.079g

Co(NO3)2·6H2O 0.049g

Stock1 取用2mL

Stock2 取用20mL

Stock3 取用2mL

Stock4 取用1mL

Stock5 取用1mL

总定容 1000mL

D1 (Diatom medium)

Component Amount Stock Solution

(1) NaNO3 1 mL/L 12 g/100ml dH2O

(2) K2HPO4 1 mL/L 4

g/100 mL dH2O

(3) MgSO4·7H2O 1 mL/L 7g/100 mL

dH2O

(4 ) CaCl2·2H2O 1 mL/L 2 g/100 mL dH2O

(5 ) KH2PO4 1 mL/L 8 g/100 mL dH2O

(6 ) Na2SiO3.9H2O 1 mL/L 10g/100ml dH2O

(7)

MnSO40.1mL/L 0.2g/100ml dH2O

(8) 柠檬酸铁 1

mL/L 0.5g/100ml dH2O

(9) A5 （Trace mental solution） 1ml/L

H3BO3 2.86g/L dH2O

MnCl2·4H2O 1.86g/L dH2O

ZnSO4·7H2O 0.22g/L dH2O

Na2MoO4.2H2O 0.39g/L dH2O

CuSO4. 5 H2O 0.08g/L dH2O

Co(NO3)2.6 H2O 0.05g/L dH2O

(10) 土壤提取液 20 mL/L

土壤提取液配制方法:

取花园土未施过肥200g置于烧杯或三角瓶中，加入蒸馏水1000毫升，瓶口用透气塞封口，在水浴中沸水加热3小时，冷却，沉淀24小时，此过程连续进行

3次，然后过滤，取上清液，于高压灭菌锅中灭菌后于4℃冰箱中保存备用。

f/2 medium

Component Amount

(1) NaNO3 75 mg/L

(2) NaH2PO4 · 2H2O0.6 mg/L

(3) Vitamin B12 0.5 μg/L

(4) Biotin 0.5 μg/L

(5) Thiamine HCl 100μg/L

(6) Na2SiO3 · 9H2O10 mg/L

(7) f/2 metals 1 mL/L

Na2EDTA · 2H2O 4.4g

FeCl3 · 6H2O 3.16 g

CoSO4 · 7H2O 0.012g

ZnSO4 · 7H2O 0.021g

MnCl2 · 4H2O0.18 g

CuSO4 · 5H2O 0.007g

Na2MoO4 · 2H2O0.007g

Distilled water 1000 mL

(8) Seawater 1000 mL

BG-11是培养蓝藻使用最广泛的培养基，微量元素溶液 A5 是BG-11培养基微量元素的重要组成部分。

一、目的要求

了解培养基的配制原理。

了解培养基常规配制程序。

了解培养基配制过程各环节的要求和注意事项。

二、基本原理

正确掌握培养基的配制方法是从事微生物学实验工作的重要基础，由于微生物种类及代谢类型的多因而用于培养微生物培养基的种类也很多，它们的配方及配制方法虽各有差异。但一般培养基的配制程序却相同，例如器皿的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基

菌检查等基本环节大致相向。

三、实验材科

(一)药品

待配各种培养的组成成分，琼脂，1mol/L NaOH溶液，1mol/L (升，统一用大写)HCl溶液。

(二)仪器

天平或台秤，高压蒸汽灭菌锅。

(三)玻璃器皿

移液管、试管、烧杯、量筒、锥形瓶、培养皿、玻璃漏斗等。

(四)其他物品

药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸等。

四、实验内容

(一)玻璃器皿的洗涤和包装

1．玻璃器皿的洗涤

玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将锥形瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中，用毛然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡。再用自来水及蒸馏水冲洗，洗刷干净的玻璃置于烘箱中烘干后备用。

2．灭菌前玻璃器皿的包装

(1)培养皿的包装培养皿由一盖—底组成一套。可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培

于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。

(2)移液管的包装在移液管的上端塞入—小段棉花(勿用脱脂棉)。它的作用是避免外界及口中杂

，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左有。棉花自身长度约1-1．5cm。塞棉花时外圈拉直的曲别针，将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。

先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧，在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端纸条，折叠打结，准备灭菌。

(二)液体及固体培养基的配制过程

1．液体培养基配制

(1)称量一般可用1/100粗天平称量配制培养基所需的各种药品。先按培养基配方计算各成分的用

行准确称量。

(2)溶化将称好的药品置于一烧杯中，先加入少量水(根据实验需要可用自来水或蒸馏水)，用

热溶解。

(3)定容待全部药品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需体积。如某种药品用量太少时，可预先

液，然后按比例吸取一定体积溶液，加入至培养基中。

(4)调pH 一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段p 养基

中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液进行调节。调节逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试到所需pH为止。

(5)过滤用滤纸或多层纱布过滤培养基。一般无特殊要求时，此步可省去。

2．固体培养基的配制

配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1．5％-2％)加入，并用搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。

(三) 培养基的分装