[生物学]多糖提取纯化以及结构解析

2012.10.31
浙江中医药大学中药炮制中心
糖类介绍
多糖提取
多糖提取
多糖纯化
多糖结构分析
2012.10.31
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• 单糖、低聚糖 常用水或醇提取，然后用不同的有机溶剂萃取得 到不同极性的化合物。
脱脂→去Βιβλιοθήκη Baidu→浓缩→再次去杂→脱色 →浓缩 →冷却 →结晶（→进一步纯化）
• 多糖 常用热水、稀碱或稀酸溶液进行提取。 （植物体内苷常与水解酶共存，所以要杀酶或抑制 酶的活性。）
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多糖提取、纯化及结构分析文献总结
汇报人：周函钰
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多糖纯化
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糖类介绍
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定义：
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物理辅助提取
热水提
微波提取
多糖提取
稀碱提
超临界流体萃取
超声提取
粗多糖
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热水提取
对于易溶于温水、难溶于冷水和乙醇的多糖采用这种 方法。材料需要先用冷水浸过，再用热水提取，必要 时可加热至80～90℃，搅拌提取，提取液用正丁醇 与氯仿混合液除去杂蛋白，离心除去杂蛋白的清液， 透析后用乙醇沉淀即得到多糖。
稀碱提取
适合用此方法的多糖主要是不溶性胶类，用冷水 浸润红0.5mol/L NaOH提取，提取液用酸中和后 浓缩，再加乙醇沉淀即得到多糖。甘露聚糖、半 乳糖等利用此法可得到相当纯的物质。
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Sevag法(用氯仿:丁醇 5:1混合)
三氟三氯乙烷法(多糖溶液:三氟三氯乙烷1:1)
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盐析法原理原理 利用不同多糖与金属离子成盐后在水溶液中的特异性 沉淀作用，用硫酸铵、乙酸钾、氯化钾等盐析剂，将 不同的多糖逐步析出。
金属配合物法原理： 利用不同多糖能与金属离子形成配合 物而沉淀下来，使用多种配位剂沉淀多 糖。
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H
O OH
HO H • 糖类(Carbohydrates) H OH 物质是含多羟醛或多 H OH 羟酮类化合物。主要 多羟基醛；多羟基酮；多羟基 由C、H、O 组成，其 OH OH 分子式常用醛或多羟基酮的衍生物。 Cn(H2O)n O 来表示。 HO H
H H OH OH OH
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季铵盐沉淀原 理 长链季铵盐是碱性表面活性剂，酸性多糖在溶液中以聚 阴离子形式存在，它就与季铵盐或其碱形成不溶性配合 物沉淀，又由于多糖分子酸性越强、相对分子质量越大 越易沉淀出来，这样控制 季铵盐浓度即可以分理出不 常用季氨盐有十六烷基三甲胺溴化物及
与酸性多糖形成不溶性沉淀，使其分离。
其氢氧化物和十六烷基吡啶。 同的酸性多糖 提高溶液PH值或加入硼砂缓冲液，也可 沉淀分离中性多糖。
脂、提高机体免疫和抗肿瘤、抗辐射方面
都具有很广泛的应用。
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糖的分类
单糖
寡糖
多糖 复合糖 衍生糖
•凡不能被水解为更小分子的糖称。 • 如：核糖、葡萄糖
•凡能被水解成少数（2—10个）单糖分子的糖称~。 • 如：蔗糖 葡萄糖+果糖 • 凡能被水解成多个单糖分子的糖称~。 • 如：淀粉 n葡萄糖 •与非糖物质结合的糖。 • 如：糖脂、糖蛋白(蛋白聚糖)、糖核苷酸等。 •糖的衍生物。 •如：糖醇、糖酸、糖胺、糖苷等
较深，对其进行脱色可使其应用范围更加广泛。常
用的脱色方法有:离子交换法、氧化法、金属络合物 法、吸附法(纤维素、硅藻土、活性炭等)。
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凝胶柱色谱原理 分子筛原理，按照分子量的大小不同进行分离。 常用葡聚糖凝胶（sephadex G）
除此之外，还有膜分离技术、超滤膜术 等也应用于多糖的分离纯化
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常用的脱色方法
对于植物来源的多糖，可能含有酚型化合物而颜色
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沉淀原理
由于不同相对分子质量的多糖在不同浓度的低级醇或
低级酮中溶解性不同，可以逐步提高溶液中醇或酮的 浓度以使不同组分的多糖依相对分子质量由大到小的
顺序沉淀，最终达到分离的目的。
（为了多糖的稳定，一般在PH7时进行，酸性 多糖在PH2-4时进行)
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团结合，亲和力随多糖结构与电离性的不同而不同， 一般随分子中酸性基团的增加而增强，支链多糖比支
链的更易吸附，然后用不同浓度的盐溶液进行洗脱。 常用交换剂为阳离子或阴离子交换纤维素。
阳离子交换纤维素适用于分离酸性、中性多糖和粘多糖。 中性多糖与硼酸络合后可增加酸性，可被阳离子交换纤 维素吸附 酸性基团多的吸附力强，对于线性分子，分子量大的比 小的吸附力强，直链分子比支链分子易吸附
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Content
糖类分布 糖类广泛分布于生物体中，可以分为单糖、 welcome to use these PowerPoint templates, New
Content design, 10 years experience 低聚糖和多糖。目前已发现不少糖类及其
衍生物具有药用价值，尤其在抗凝、降血
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纤维素柱色谱原理 它利用的是不同多糖浓度乙醇中溶解性不同，先用4
倍V的乙醇将多糖混合液沉淀在惰性的多孔纤维素柱
上，再用不同浓度的乙醇洗脱，使不同多糖分离开来。
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离子交换色谱原理
多糖分子带有电荷，可以 与离子交换剂中的离子或基
除杂
三氯乙酸法(滴加3%三氯醋酸)
酶法
等电点沉淀法
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多糖提取
多糖纯化
多糖纯化
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由于提取液还含有多种组分的多糖混 合物，因此需要进一步纯化
纯化方法
（1）沉淀法（分级沉淀） （2）盐析法 （3）季铵盐沉淀法 （4）纤维素柱色谱法（吸附+分配） （5）离子交换色谱法 （6）凝胶柱色谱法 （7）制备区域电泳法 （8）金属配合物法