油镜及荧光显微镜的原理及使用方法 ppt课件
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荧光显微镜的使用原理
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什么是荧光？
概念：物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能 状态，再回到低能状态时释放出的光。 即：物质吸收短波光，发射出的长波光。
分类
自发性荧光 细胞内的成分经短波长照射后，可以发出荧光
一般很微弱，如叶绿素。
诱发性荧光 细胞内的成分经紫外线照射后不发荧光，但
与荧光染料结合后可呈现一定颜色的荧光
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12
汞灯光源
•多采用200W的超高压汞灯作光源。 •原理：电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光 量子的结果。 •作用：它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质， 因此，为荧光显微镜普遍采用。 •注意：超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好 的散热条件，工作环境温度不宜太高。
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压制滤板
压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波 长范围的荧光。
紫外光
紫外光压制滤板
紫 外蓝光压制滤板
紫蓝光压制滤板
可见光
>510nm
>460nm
16
荧Biblioteka Baidu显微镜的种类
落射式
透射式
17
荧光显微镜的主要部件
落射式
• 汞灯光源 • 激发滤版 • 分光镜 • 压制滤版
透射式
• 汞灯光源 • 激发滤版 • 暗场聚光镜 • 压制滤版
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300-490nm
520-560nm >510nm
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荧光显微镜的使用方法
1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。
2．落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发 滤版／分光镜／压制滤板。
透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的 激发滤版，在物镜的后面装上相应的压制滤板。
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激发滤板
根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板， 提供一定波长范围的激发光。
400nm 可见光
紫外光激发滤板
紫 外蓝光激发滤板
紫蓝光激发滤板
400nm 紫外光
300-450nm 光
350-490nm 光
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分光镜
•分光镜反射短波，透射长波。 •短波激发光在分光镜处反射，由 物镜到荧光物质，产生的长波长 发射光经物镜返回，并透过分光 镜。
如吖啶橙，能使细胞内的DNA呈绿色荧光；RNA呈红色荧光。
10
荧光显微镜
➢荧光显微镜(Fluorescence microscope) 是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的 形状及其所在位置。
➢荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、 运输、化学物质的分布及定位等。荧光显微 镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工 具之一。
3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置， 调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。
4．放置标本片，调焦后即可观察。
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荧光显微镜的使用方法
注意事项： 1.末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤； 2.用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜； 3.高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才
光学显微镜的使用方法 及注意事项
荧光显微镜的使用原理
1
1 光学显微镜的使用方法 2 光学显微镜注意事项 3 荧光显微镜的使用原理
2
光学显微镜
➢光学显微镜（Optical Microscope， 简写OM）是利用光学原理，把人眼所 不能分辨的微小物体放大成像，以供 人们提取微细结构信息的光学仪器。
低倍→高倍→油镜
低倍→油镜
•油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和 标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。
7
光学显微镜注意事项
1.持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势； 2.水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台， 如果沾污应立即擦净； 3.放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反 放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜； 4.不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也 不要任意拆卸各种零件，以防损坏； 5.使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内。
能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。
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3
光学显微镜的使用方法
•低、高倍镜观察 •进一步放大的部分移到视野的中心
4
光学显微镜的使用方法
•集光器上升到最高位置 •光圈开到最大
5
光学显微镜的使用方法
•高倍镜头离开通光孔，在需观 察部位的玻片上滴加一滴香柏油 •转换油镜时，从侧面水平注视 镜头与玻片的距离
6
光学显微镜的使用方法
•用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。 不出现物象 目标不理想
荧光显微镜的使用原理
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什么是荧光？
概念：物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能 状态，再回到低能状态时释放出的光。 即：物质吸收短波光，发射出的长波光。
分类
自发性荧光 细胞内的成分经短波长照射后，可以发出荧光
一般很微弱，如叶绿素。
诱发性荧光 细胞内的成分经紫外线照射后不发荧光，但
与荧光染料结合后可呈现一定颜色的荧光
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汞灯光源
•多采用200W的超高压汞灯作光源。 •原理：电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光 量子的结果。 •作用：它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质， 因此，为荧光显微镜普遍采用。 •注意：超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好 的散热条件，工作环境温度不宜太高。
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压制滤板
压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波 长范围的荧光。
紫外光
紫外光压制滤板
紫 外蓝光压制滤板
紫蓝光压制滤板
可见光
>510nm
>460nm
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荧Biblioteka Baidu显微镜的种类
落射式
透射式
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荧光显微镜的主要部件
落射式
• 汞灯光源 • 激发滤版 • 分光镜 • 压制滤版
透射式
• 汞灯光源 • 激发滤版 • 暗场聚光镜 • 压制滤版
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300-490nm
520-560nm >510nm
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荧光显微镜的使用方法
1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。
2．落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发 滤版／分光镜／压制滤板。
透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的 激发滤版，在物镜的后面装上相应的压制滤板。
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激发滤板
根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板， 提供一定波长范围的激发光。
400nm 可见光
紫外光激发滤板
紫 外蓝光激发滤板
紫蓝光激发滤板
400nm 紫外光
300-450nm 光
350-490nm 光
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分光镜
•分光镜反射短波，透射长波。 •短波激发光在分光镜处反射，由 物镜到荧光物质，产生的长波长 发射光经物镜返回，并透过分光 镜。
如吖啶橙，能使细胞内的DNA呈绿色荧光；RNA呈红色荧光。
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荧光显微镜
➢荧光显微镜(Fluorescence microscope) 是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的 形状及其所在位置。
➢荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、 运输、化学物质的分布及定位等。荧光显微 镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工 具之一。
3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置， 调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。
4．放置标本片，调焦后即可观察。
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荧光显微镜的使用方法
注意事项： 1.末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤； 2.用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜； 3.高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才
光学显微镜的使用方法 及注意事项
荧光显微镜的使用原理
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1 光学显微镜的使用方法 2 光学显微镜注意事项 3 荧光显微镜的使用原理
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光学显微镜
➢光学显微镜（Optical Microscope， 简写OM）是利用光学原理，把人眼所 不能分辨的微小物体放大成像，以供 人们提取微细结构信息的光学仪器。
低倍→高倍→油镜
低倍→油镜
•油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和 标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。
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光学显微镜注意事项
1.持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势； 2.水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台， 如果沾污应立即擦净； 3.放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反 放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜； 4.不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也 不要任意拆卸各种零件，以防损坏； 5.使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内。
能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。
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光学显微镜的使用方法
•低、高倍镜观察 •进一步放大的部分移到视野的中心
4
光学显微镜的使用方法
•集光器上升到最高位置 •光圈开到最大
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光学显微镜的使用方法
•高倍镜头离开通光孔，在需观 察部位的玻片上滴加一滴香柏油 •转换油镜时，从侧面水平注视 镜头与玻片的距离
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光学显微镜的使用方法
•用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。 不出现物象 目标不理想