国药监局饮片补充检验方法--WORD

国家食品药品监督管理局稽查局
食药监稽函【2012】200号中药材及中药饮片药品检验补充检验方法和检验项目批准件
蒲黄
POLLEN TYPHAE
[检查]总灰分不得过15.0%（中国药典2005年版一部附录IX K总灰分测定法）。

金胺O (1) 取本品粉末2g，加70%乙醇20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml中含0.1 mg的溶液，即得。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，取供试品溶液和对照
品溶液各10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—氨水（4：5：5：1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，立即在可见光下检视。

供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—0.025mol/L 磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值为3.0）（40：60）为流动相；检测波长为484nm。

理论板数按金橙Ⅱ峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备取金橙Ⅱ对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml约含60µg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取上述（1）项下的供试品溶液，即得。

测定法取供试品溶液和对照品溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在210~550nm 波长范围的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

备注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。

建议采用乙腈-0.05mol/L 醋酸铵（35：65）流动相系统。

红花
Honghua
FLOS CARTHAMI
[检查]金橙Ⅱ（1）取本品粗粉2g，加70%乙醇20ml，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

取金橙Ⅱ对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml中含0.1mg的溶
液，作为对照试剂溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，取供试品溶液10µl，对照试剂溶液5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-
甲醇-冰乙酸（7：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，立即在可视光下检视。

供
试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相
同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值为3.0）（40：60）为流动相；检测波长为484nm。

理论板数按金橙Ⅱ峰计算，应不低于2000。

对照试剂溶液的制备取金橙Ⅱ对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含60µg 的溶液，即得。

供试品溶液的制备取上述（1）项下的供试品溶液，即得。

测定法取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在
210~550nm波长范围的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

备注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。

建议采用乙腈-0.05mol/L的醋酸铵溶液（35：65）流动相系统。

五味子
Wuweizi
PRUCTUS SCHISANDRAE CHINENSIS
[检查]胭脂红、赤藓红、酸性红73 （1）取本品2g（不粉碎），加70%乙醇5ml，超声提取20分钟，离心（3000转/分钟），取上清液作为供试品溶液。

另取胭脂红、赤
藓红和酸性红73对照试剂适量，分别加70%乙醇溶解并制成每1ml含0.1mg的溶
液作为对照试剂溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版第一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯
-正丁醇-乙醇-氨水-水（1：3：3：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光
下检视。

供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。

若出现相同颜色的斑点，则用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.05mol/L醋酸铵为流动相B,按下表进行梯度洗脱：检测波长为508nm。

理论板数按胭脂红峰计算，应不低于2000。

时间（min）流动相A（%）流动相B（%）
0-12 20→45 80→55
12-25 45→80 55→20
25-30 80 20
对照试剂溶液的制备取[检查]（1）项下的对照试剂溶液，作为对照试剂溶液。

供试品溶液的制备取[检查]（1）项下的供试品溶液，作为供试品溶液。

测定法取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-
可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

朱砂（水飞）
Zhusha
CINNABARIS
[检查] 808猩红（1）取本品粉末0.2g，加乙醇10ml，超声处理10分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

另取808猩红对照试剂适量，加乙腈制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版第一部附录VI B）试验，吸取上述两种溶液各10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，日光下检视。

供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1%的甲酸溶液（85：15）为流动相：检测波长为520nm。

理论板数按808 猩红峰计算，应不低于2000。

对照试剂溶液的制备取808猩红对照试剂适量，加乙醇制成每1ml约含60µg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取[检查]（1）项下的供试品溶液，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，取出滤液，即得。

测定法取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

808猩红对照试剂色谱峰在519±1nm显示最大吸收。

备注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。

建议采用乙腈-0.1%的甲酸溶液（80：20）流动相系统。

血竭
Xuejie
SANGUIS DRACONIIS
[检查]苏丹红Ⅳ、808猩红、松香酸
（1）取本品粉末0.2g，加乙醇25ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

另取松香酸、苏丹红Ⅳ、808猩红对照试剂适量，分别加乙醇制成每1ml含松香酸1mg，含苏丹红Ⅳ、808猩红0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版第一部附录VI B）试验，吸取上述供试品溶液2µl和对照试剂溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，再以石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯-冰乙酸（9:1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干。

日光下检视，供试品色谱中，在与苏丹红Ⅳ、808猩红对照试剂色谱相应的位置，不得显示相同颜色的斑点；紫外光灯（254nm）下检视，供试品色谱中，在与松香酸对照试剂色谱相应的位置，不得显相应的荧光淬灭斑点。

再喷以10%硫酸/乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与松香酸对照试剂色谱相应的位置，不得显相应的棕黄色斑点；紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与松香酸对照试剂色谱相应的位置，不得显相应的蓝色荧光斑点。

若出现相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

（2）苏丹红Ⅳ、808猩红照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水（95：5）为流动相，检测波长为520nm，理论板数按苏丹红Ⅳ峰计算，应不低于2000。

对照试剂溶液的制备取苏丹红Ⅳ、808猩红对照试剂适量，分别加乙醇制成每1ml 约含40µg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取[检查]（1）项下的供试品溶液，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，取续滤液，即得。

测定法取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

苏丹红Ⅳ对照试剂色谱峰在350±1nm，517±1nm显示最大吸收；808猩红对照试剂色谱峰在518±1nm显示最大吸收。

松香酸色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1%甲酸（75：25）为流动相，检测波长为241nm，理论板数按松香酸峰计算，应不低于4000。

对照试剂溶液的制备取松香酸对照试剂适量，加乙醇制成每1ml约含松香酸100µg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取[检查]（1）项下的供试品溶液1ml，加乙醇稀释至10ml，用
微孔滤膜（0.45µm）滤过，取续滤液，即得。

测定法取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与松香酸对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

松香酸对照色谱峰在241 1nm显示最大吸收。

沉香
Chenxiang
[检查]松香（1）取本品粉末1g，置具塞试管中，加石油醚（60~90℃）10ml，振摇10数分钟，滤过，取滤液5ml，置另一试管中，加新配置的0.5%醋酸铜溶液5ml，振摇后，静置分层，石油醚层不得显绿色。

若石油醚层显绿色，则进行如下试验。

（2）松香酸取本品粉末2g，加石油醚（60~90℃）20ml，振摇数分钟，滤过，滤液浓缩至1ml作为供试品溶液。

取松香酸对照试剂10mg，加石油醚（60~90℃）10ml溶解，作为对照试剂溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版第一部附录VI B）试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各5µl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（60~90℃）-乙酸乙酯-冰乙酸（9：1：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干。

置紫外光灯（254nm）下检视。

供试品色谱中，在与松香酸对照试剂色谱相应的位置，不得显相应的荧光淬灭斑点。

再喷以10%硫酸/乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。

供试品色谱中，在与松香酸对照试剂色谱相应的位置，不得显相应的棕黄色斑点；紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与松香酸对照试剂色谱相应的位置，不得显相应的蓝色荧光斑点。

若出现相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

（3）松香酸照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1%甲酸（75：25）为流动相；检测波长为241nm；柱温20℃。

对照试剂溶液的制备取松香酸对照试剂适量，加甲醇溶解并制成1ml含0.1mg 的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备取本品粉末1g，加甲醇20ml，超声处理20分钟，滤过，取续滤液，即得。

测定法取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与松香酸对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

备注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。

乌梅（炙乌梅）
Wumei
FRUCTUS MUME
[检查]（1）取本品2粒，加70%乙醇20ml，超声提取20分钟，溶液颜色不得显墨绿色。

若溶液呈墨绿色，则采用下列方法检查。

（2）苋菜红、亮蓝、日落黄
薄层色谱法取本品2粒，加70%乙醇20ml，超声提取20分钟，取上清液离心，作为供试品溶液。

另取苋菜红、亮蓝、日落黄溶液（国家标准物质、标示浓度0.5mg/ml，国家标准物质研究中心）各1ml，分别加70%乙醇稀释至5ml，作为对照品溶液。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）试验，吸取供试品溶液5µl，对照品溶液各2µl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1：3：3：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干。

供试品色谱中，在与对照品色谱的相应位置应不得检出相同颜色的斑点。

若检出相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法进
一步检查。

（3）高效液相色谱法照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）测定。

色谱条件与系统适应性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为甲醇，流动相B为0.02mol/L醋酸铵（冰乙酸调pH 4.0），梯度洗脱程序为：0-45分钟，流动相A,20%→50%,流动相B,80%→50%。

检测波长500nm（检验苋菜红和日落黄）和630nm （检验亮蓝）。

理论板数按苋菜红峰计算应不低于4000。

测定法分别吸取[检查]（1）项下供试品溶液5µl和[检查]（2）项下对照品溶液各2µl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。

结果判断供试品色谱中，应不得检出与对照色谱保留时间相同的色谱峰。

大黄
DaHuang
RHEI RADIX ET RHIZOMA
[检查] 土大黄苷取本品粉末0.1g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

另取土大黄苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液（对照品溶液应临用前现配制）。

再取华北大黄（大黄伪品）参照物0.1g，同法制成参照物溶液，照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述三种溶液各5µl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-甲酸乙酯-丙酮-甲酸-甲醇（30:5:5:0.1:20）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应不得检出亮蓝色荧光斑点；与参照物色谱相比较，应不得显相同的总体色谱特征。

黄柏（饮片）
Huangbo
CORTEX PHELLODENDRT CHINENSIS
[检查] 金胺O （1）取本品粉末2g，加70%乙醇20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml中含0.1mg 的溶液，即得。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水（4：5：1：1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，立即在可视光下检视。

供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值为3.0）（35：65）为流动相；检测波长为432nm。

理论板数按金胺O对照试剂色谱中的主峰峰计算，应不低于2000。

对照试剂溶液的制备取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含50µg 的溶液，即得。

供试品溶液的制备取上述（1）项下的供试品溶液，即得。

测定法取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在320~450nm 波长范围的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

备注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。

建议采用乙腈-0.05mol/L 的醋酸铵溶液（35：65）流动相系统。

黄连（饮片）
HuangLian
RHIZOMA COPTIDIS
[检查]金胺O （1）取本品粉末2g，加70%乙醇20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml中含0.1mg 的溶液，即得。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水（4：5：1：1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，立即在可视光下检视。

供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值为3.0）（35：65）为流动相；检测波长为432nm。

理论板数按金胺O对照试剂色谱中的主峰峰计算，应不低于2000。

对照试剂溶液的制备取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含50µg 的溶液，即得。

供试品溶液的制备取上述（1）项下的供试品溶液，通过硅胶柱（柱内径：1.0cm，100~200目硅胶，2克，干法装柱），取流出液，即得。

测定法取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在320~450nm 波长范围的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

备注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。

建议采用乙腈-0.05mol/L 的醋酸铵溶液（35：65）流动相系统。

总灰分不得过5.0%（中国药典2005年版一部附录Ⅸ K）。

延胡索
Yanhusuo
RHIZOMA CORYDALIS
[检查]金胺O （1）取本品粉末2g，加70%乙醇20ml，密塞，超声处理20分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。

取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml中含0.1mg 的溶液，即得。

照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VI B）试验，取供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水（4：5：1：1）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，立即在可视光下检视。

供试品色谱中，在与对照试剂色谱相应的位置上，不得显相同颜色的斑点；若出现相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.025mol/L磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，并用磷酸调pH值为3.0）（35：65）为流动相；检测波长为432nm。

理论板数按金胺O对照试剂色谱中的主峰峰计算，应不低于2000。

对照试剂溶液的制备取金胺O对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含50µg 的溶液，即得。

供试品溶液的制备取上述（1）项下的供试品溶液，即得。

测定法取上述供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应色谱峰在320~450nm 波长范围的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

备注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。

建议采用乙腈-0.05mol/L 的醋酸铵溶液（35：65）流动相系统。

西红花
Xihonghua
STIGMA CROCI
[检查]金胺O 新品红柠檬黄胭脂红
（1）取本品0.5g，剪碎，加70%乙醇10ml，超声处理20分钟，离心，取上清液作为供试品溶液。

另取金胺O、新品红、柠檬黄、胭脂红对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照试剂溶液。

照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液10µl，对照试剂溶液5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-冰乙酸（7：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视。

供试品色谱中，在与金胺O、新品红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。

上述薄层板再以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1：3：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，在可见光下检视。

供试品色谱中，在与柠檬黄、胭脂红对照试剂色谱斑点相应的位置上，不得显相同颜色的斑点。

若出现相同颜色的斑点，或相同位置有干扰不能判断时，则用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A， 0.05mol/L醋酸铵溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱：
时间（min）流动相A（%）流动相B（%）
0-30 5→45 95→55
在432nm波长检测金胺O和柠檬黄；在509nm波长检测胭脂红；在550nm波长检测新品红。

理论板数按金胺O峰计算，应不低于6000。

对照品溶液的制备取金胺O、新品红、柠檬黄、和胭脂红对照试剂适量，加70%乙醇制成每1ml约含25µg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取上述[检查]（1）项下的供试品溶液，即得。

测定法取上述供试品溶液和对照试剂溶液各10µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，则采用二极管阵列检测器比较相应谱峰的紫外-可见吸收光谱，吸收光谱应不相同。

备注：1、必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法验证。

建议采用乙腈-0.02mol/L 的醋酸铵流动相系统。

2、因柠檬黄保留较弱，建议采用250mm规格液相色谱柱。

青黛
Qingdai
INDIGO NATURALIS
[检查]孔雀石绿
（1）取本品0.5g，加3%甲酸甲醇溶液10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

另取孔雀石绿对照试剂，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

吸取上述供试品溶液及对照试剂溶液各10~20µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-三氯甲烷（5：5）为展开剂，置氨蒸汽饱和的层析缸内，展开，取出，晾干。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，不得显相同的蓝色斑点。

若供试品色谱中出现与对照试剂相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.05mol/L 醋酸铵溶液（用冰醋酸调pH为4.5）（80：20）为流动相；采用二极管阵列检测器；检测波长为618nm。

理论板数按孔雀石绿峰计算，应不低于3000。

对照试剂溶液的制备取孔雀石绿对照试剂适量，加甲醇制成每1ml含20µg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取[检测]（1）项下的供试品溶液，用微孔滤膜（0.45µm）滤过，取续滤液，即得。

测定法取上述供试品溶液和对照试剂溶液各5µl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

结果判断供试品色谱中，应不得出现与对照试剂色谱保留时间相同的色谱峰。

若出现保留时间相同的色谱峰，其在200~700nm波长范围的紫外-可见吸收光谱应与对照品不相同。

备注：必要时可采用高效液相色谱-质谱联用方法作进一步验证。

人工牛黄
Renggong Niuhuang
CALCULUS BOVIS ARTIFACTUS
[鉴别]取本品粉末0.5g，加入三氯甲烷10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

另取胆红素对照品适量，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5~10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-甲醇-甲酸（20：3：0.5：0.15）为展开剂，展开，取出，晾干，置日光和紫外光灯（365nm）下检视。

供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点。

[检查]炽灼残渣取本品1.0g，精密称定，依法测定（中国药典2010版一部附录Ⅸ J），不得过15.0%。

胭脂红、金胺O、金橙Ⅱ（1）取本品粉末0.5g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。

另取胭脂红、金胺O、金橙Ⅱ对照试剂适量，分别加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。

照薄层色谱法法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5~10µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-氨水-水（1：3：3：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干。

供试品色谱中，在与胭脂红、金胺O、金橙Ⅱ对照品色谱相应的位置上，不得显相同红色、黄色、橙红色的斑点。

若供试品色谱中出现与对照品相同颜色的斑点，则采用下列高效液相色谱法验证。

（2）照高效液相色谱法（中国药典2010年版一部附录VI D）测定。

色谱条件与系统适应性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.05mol/L醋酸铵溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱；采用二极管阵列检测器；检测波长为508nm、484nm、432nm。

理论板数按胭脂红峰计算，应不低于2000。