体外诊断试剂注册申报资料模板-主要原材料的研究资料

体外诊断试剂注册申报资料XXXXX检测试剂盒（XXX法）主要原材料的研究资料

XXXXX有限公司

目录

一、主要原材料的选择 (2)

(一)、连接酶的选择 (2)

(二)、XXX酶的选择 (4)

(三)、引物a（如标签引物）的选择 (5)

(四)、XXXX的选择 (7)

二、主要原材料的检定 (7)

(一)、连接酶 (7)

(二)、XXX酶 (7)

(三)、标签引物 (8)

(四)、XXXX (8)

三、试剂盒质控品的建立 (9)

四、企业参考品的建立 (10)

一、主要原材料的选择

根据试剂盒组分，对市面常见竞争品牌进行比较测试，参考试剂性能，并比较相关试剂应用于反应体系中的表现以及采购难易、成本、口碑等多方面因素，择优选择适用于本试剂盒的主要原材料。

(一)、连接酶的选择

1.检测对象

A公司生产的XX酶和B公司生产的XX酶。

2.主要仪器

PCR仪、荧光PCR仪、Qubit DNA荧光定量仪、漩涡混合器、迷你离心机、磁力架等。

3.研究方法和考核指标

3.1建库测试

使用待选择的两种XX酶分别对4例临床真实样本按照附件建库方法进行建库。取1μL建库产物进行文库定量，并进行电泳检测。

要求：建库产物文库浓度应≥PM和文库片段电泳条带分布应在- bp范围内。

3.2酶活测试（定性检测酶活性）

使用待选择的两种连接酶及非连接酶配制反应体系以？？

为模板进行连接反应，并设置了空白对照，连接产物进行电泳检测。

表1 连接酶酶活实验反应体系

要求：2个供应商的连接产物电泳条带分布应单一，无连接酶和空白对照组的反应体系产物应无连接产物产生，呈现多条条带。

4.实验结果

4.1建库测试结果：文库产量如表1，两个供应商文库产量浓度结果对比图见图1。B公司的连接酶建库产量虽整体较高，但不稳定，样本（填入样本编号)的文库产量低于pM（3.1规定的指标）。电泳结果如图2，两个供应商的连接酶产生的文库片段电泳条带分布应在- bp范围内。（3.1规定的指标）表1：连接酶的选择：文库产量及电泳结果（单位：pM）

*（如有不符合要求的请用高亮标出）

图1 连接酶的选择：文库产量对比图

图2：连接酶的选择：文库片段电泳条带分布

4.2酶活测试结果：酶活测试结果见表2。A公司和B公司的连接酶均能成功连接，酶活符合要求。

表2连接酶的选择：酶活测试结果

图3 连接酶的选择：酶活测试结果电泳条带分布

5.实验结论

有以上实验结果可知，B公司生产的连接酶未能使样本(样本编号)的建库产物文库浓度未能达到pM。而A公司酶连接效果较为稳定，各方面均能符合要求，因此将A公司生产的连接酶作为该试剂盒的主要原材料。

(二)、XXX酶的选择

1.检测对象

2.主要仪器

3.研究方法和考核指标

3.1建库测试

3.2荧光PCR测试

4.实验结果

5.实验结论

(三)、引物a（如标签引物）的选择

1.检测对象

A公司合成的引物a和B公司合成的引物a。

2.主要仪器

紫外分光光度计、Qubit DNA荧光定量仪、漩涡混合器、迷你离心机。

3.引物的设计

说明引物的设计原理

4.研究方法和考核指标

分别从两家供应商的引物中选取3条引物进行以下四个性能指标的检查。

4.1外观及性状：目测，应为半透明或不透明片状粉状物质，无异

味，易溶于水和TE缓冲液。

4.2相对分子质量：对合成的引物A，进行HPLC检测，根据每个

碱基的分子质量（见附录2），计算理论的分子质量值与HPLC 检测的分子质量值进行比较，HPLC检测的分子质量值与计算的理论分子质量值的差值应在±1%范围内。

4.3总量：将引物溶解，使用Qubit3.0荧光定量仪测试引物浓度，

与理论值进行比较；测定OD值换算的浓度与合成报告单的

浓度相差±200%。

4.4碱基准确性：检查质量报告单，合成的序列应与设计的序列

一致性。

5.实验结果

5.1外观及性状：两个供应商的引物均是呈薄膜粉状物质，加入

TE溶液后全部溶解。

5.2相对分子质量结果见表8

表8 引物A的选择：相对分子质量

5.3总量测定见表9

表9 引物A的选择：总量测定（单位：μM）

5.4碱基准确性检查两个供应商的引物碱基准确性均与设计一致。

6.实验结论

综上，A公司合成的引物a和B公司合成的引物a，在外观

及性状，相对分子质量，总量和碱基准确性上均能符合要求，综

合成本等因素，选择A公司合成的引物作为本试剂盒的主要原材料。

(四)、XXXX的选择

其他原材料的选择同样选取2-3个供应商生产的原材料采用一

定的考核指标评价确定供应商，（供应商指生产厂家，非经销商）。

如无法确定哪些原材料需要确定供应商，可参考相关产品的技术

审评指导原则。

二、主要原材料的检定

(一)、连接酶

1.外观

无色透明液体。

2.性能要求

2.1将原料配制成建库试剂组分，进行建库测试，建库产物文库浓度

应PM和文库片段电泳条带分布应在- bp范围内。

2.2对原料进行酶活测试，应具有连接酶活性。

3.贮存条件

-18℃以下保存。

(二)、XXX酶

1.外观

无色透明液体。

2.性能要求

2.1将原料配制成建库试剂组分，进行建库测试，建库产物文库浓