血液凝固及其影响因素

实验目的
1. 学习测定血液凝固时间的方法。 学习测定血液凝固时间的方法。 2. 了解钙离子和纤维蛋白在血液凝 固中的作用。 固中的作用。 了解血液凝固的基本过程， 3. 了解血液凝固的基本过程，以血 液凝固的时间为指标， 液凝固的时间为指标，观察不同 因素对血液凝固速度的影响。 因素对血液凝固速度的影响。
实验操作步骤
前期准备： 前期准备：
富、少plt血浆、肺组织悬液，置4℃储存 plt血浆、肺组织悬液， 4℃储存 血浆
一、观察纤维蛋白在凝血过程中的作用 二、内源性凝血和外源性凝血过程 三、各种因素对血液凝固的影响
一、纤维蛋白原在凝血过程中的作用
取抗凝血10ml，注入2小烧杯内，加 抗凝血10ml 注入2小烧杯内， 10ml， /ml,轻摇混匀 轻摇混匀。 M/40 CaCL2 4滴/ml,轻摇混匀。 1.一杯静置。 1.一杯静置。 一杯静置 2.另一杯不断用竹签搅直至纤维蛋白 2.另一杯不断用竹签搅直至纤维蛋白 形成，随后洗净竹签上的纤维蛋白， 形成，随后洗净竹签上的纤维蛋白，观 察纤维蛋白呈丝状且有弹性。 察纤维蛋白呈丝状且有弹性。 3.比较两杯凝固情况。 3.比较两杯凝固情况。 比较两杯凝固情况
组织损伤 胶原、玻璃、异 胶原、玻璃、 物等激活Ⅻ 物等激活Ⅻ 释Ⅲ（组织因子） 组织因子） 较多 较慢 血管内皮损伤 或试管内凝血 较少 较快 试管内加组织因子
实验对象
实验器材
• 10ml注射器，试管11支，小烧杯2 10ml注射器 试管11 注射器， 11支 小烧杯2 试管架，竹签，吸管6 个，试管架，竹签，吸管6支，水 浴装置一套，秒表，冰块，棉花， 浴装置一套，秒表，冰块，棉花， 液状石蜡。 液状石蜡。 • M/40 CaCL2，肝素（8 U/ml），2% 肝素（ U/ml）， ），2% 草酸钾溶液，生理盐水， 草酸钾溶液，生理盐水，肺组织悬 抗凝全血，稀释凝血酶溶液， 液，抗凝全血，稀释凝血酶溶液， 富（少）血小板血浆。 血小板血浆。
二、比较内源性和外源性凝血过程
富血小板血浆 少血小板血浆 生理盐水 肺组织悬液
M/40 M/40 CaCl2 （复钙 ） 复钙）
第一管 第二管 0.2ml （ 4 滴 ） 0.2ml 0.2ml
第三管
0.2ml
0.2ml
0.2ml （ 4 滴 ） 0.2ml
0.2ml 0.2ml
凝固时间
注：试管应标号，最后同时加CaCl2，摇匀。每30 试管应标号，最后同时加CaCl 摇匀。 秒倾斜试管一次，分别记录三只试管凝固时间。 秒倾斜试管一次，分别记录三只试管凝固时间。 比较2 管抗凝时间， （1）比较2、3管抗凝时间，分析差别原因 比较1 管时间， （2）比较1、2管时间，说明血小板抗凝中作用
内源性凝血
外源性凝血
两条途径
胶原、玻璃、异物 胶原、玻璃、
组织损伤
Ⅻ
Ⅻa Ⅺ Ⅺa Ⅸ
Ⅸa Ⅷa Ca2+ PL Ⅲ Ⅶ Ca2+ PL
三个阶段
一、凝血酶原激活物形成 二、凝血酶原变成凝血酶
Ⅹ
Ⅹa Ⅴa Ca2+ PL Ⅱ
Ⅹ
Ⅱa Ⅰ Ⅰa
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三、纤维蛋白原变成纤维蛋白
内源性凝血及外源性凝血的区别
内源性凝血 始动因素 反应步骤 凝血速度 发生条件 外源性凝血
血液凝固及其影响因素
药理教研室：张建武 药理教研室： Email： Email：875270583@qq.com
实验室规则
1 穿好工作服，不迟到早退。 穿好工作服，不迟到早退。 组长提前10 10分钟持有效证件到实验准备 2 组长提前10分钟持有效证件到实验准备 室借实验器材。 室借实验器材。 实验室不可大声喧哗， 3 实验室不可大声喧哗，各组间可互相观摩 4 实验完毕，动物统一回收，集中销毁。 实验完毕，动物统一回收，集中销毁。 5 实验结束，留下一组同学打扫卫生，老师 实验结束，留下一组同学打扫卫生， 检查后方可离开。 检查后方可离开。 6 部分实验要求写出实验报告
思考题
1. 实验中向血浆中加入钙离子，为什 实验中向血浆中加入钙离子， 么会发生凝固？ 么会发生凝固？ 2. 血小板在血液凝固中起何种作用？ 血小板在血液凝固中起何种作用？ 3. 生理情况下机体为什么不会发生血 液凝固? 液凝固?
血小板在凝血中的作用
（1）为凝血因子的激活提供磷脂表面。 为凝血因子的激活提供磷脂表面 提供磷脂表面。 （2）释缩血管物5-HT和TXA2，也促其自身聚集。 释缩血管物5 HT和 也促其自身聚集。 （3）释放І及钙离子等凝血因子，加速凝血过程 释放І及钙离子等凝血因子， （4）吸附凝血因子（І、Ⅴ、Ⅸ），利于血凝。 吸附凝血因子（ ），利于血凝。 利于血凝 （5）血小板的收缩，可引起血凝块收缩，挤出血 血小板的收缩，可引起血凝块收缩， 清，使血凝块变得更坚实。 使血凝块变得更坚实。
实验原理
血液凝固的概念： 血液凝固的概念：
由流动的胶体状态变为不能流动的冻 胶凝块的过程。正常为2 胶凝块的过程。正常为2-8min
血液凝固的本质： 血液凝固的本质：
由多种凝血因子参与的酶促反应， 由多种凝血因子参与的酶促反应， 使可溶性的纤维蛋白原变成不溶的纤维 蛋白，最终网罗血细胞而成血凝块。 蛋白，最终网罗血细胞而成血凝块。
注意事项
• 统一观察项目内的各试管应保持基本条件 一致（试管口径、血量、温度） 一致（试管口径、血量、温度） • 判断凝血标准要一致（倾斜试管45度时， 判断凝血标准要一致（倾斜试管45 45度 试管内血液无流动） 试管内血液无流动） • 不要过多的振动试管或者手握试管，防止 不要过多的振动试管或者手握试管， 外部条件影响实验结果。 外部条件影响实验结果。
三、观察影响血液凝固的一些因素
实验条件
放少许棉花
凝血时间
接触面
石蜡油润滑试管内表面
保温于37 保温于37℃水槽中 37℃
温度
放置于冰浴槽中
放肝素8 放肝素8单位于试管中（振荡摇匀） 振荡摇匀） 放草酸钾4 振荡摇匀） 放草酸钾4滴于试管中（振荡摇匀） 每只试管加抗凝血1ml 复钙后立即计时， 每只试管加抗凝血1ml，复钙后立即计时， 1ml， 30秒倾斜试管一次 并记录凝血时间。 秒倾斜试管一次， 每30秒倾斜试管一次，并记录凝血时间。如果 肝素和草酸钾管不出现血液凝固， 肝素和草酸钾管不出现血液凝固，各再复钙一 观察血液凝固否。 次，观察血液凝固否。