蛋白质组分的分离提取

1.方法原理

根据小麦种子蛋白的溶解性能，把它们可分为清蛋白（Albumin）、球蛋白（Globulin）、麦醇溶蛋白（Gliadin）和麦谷蛋白（Glutenin）四种组分。清蛋白在中性或微酸性条件下易溶解于水。球蛋白不溶于水而溶于中性稀盐溶液。醇溶蛋白不溶于水及稀盐溶液，溶于乙醇溶液。谷蛋白不溶于水，稀盐溶液及乙醇溶液，只溶于稀碱或稀酸溶液。因此，可用水、10%NaCl、70%~80%乙醇、0.2%NaOH 溶液作溶剂，分别提取小麦种子蛋白中的清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白及谷蛋白四种不同组分，并用凯氏法定量。

2.蛋白质组分的分离提取

1.清蛋白称1g试样于15ml离心管中，加几滴纯水用玻璃棒搅拌成匀浆，再加10ml纯水。将离心管放入50℃水浴中，搅拌提取半小时。离心（4000r/min）20min，上清液移入50ml容量瓶中。用纯水如上法洗残渣2次，每次加水10ml，搅拌10min，离心10min。上清液并入提取液中，加水定容至50ml。

2.球蛋白向上述残渣中加入10m10%的氯化钠溶液，同前提取、离心，并用氯化钠洗残渣2次。提取液并入50ml容量瓶中，加10%氯化钠溶液定容至50ml。

3.醇溶蛋白向上述残渣中加入10ml75%乙醇，放入50℃水浴中，搅拌浸提5min，然后在室温下继续搅拌浸提30min。同前离心，用乙醇洗残渣2次，每次在室温下搅拌洗渣5min。提取液并入容量瓶，加75%乙醇定容至50ml。

4.谷蛋白向上述残渣中加入10ml0.2%氢氧化钠溶液，同清蛋白的方法提取、离心，用NaOH洗残渣2次。提取液并入容量瓶，加入0.2%的氢氧化钠定容至50ml。

3蛋白质组分的测定

1.清蛋白吸取清蛋白提取液10ml于50ml消解试管中，加催化剂0.2g，混液（过氧化氢—硫酸混合液，30%过氧化氢：浓硫酸：水=3：2：1）3ml。在试管口放一小曲颈漏斗，置于远红外消解炉上。开始小火力，使管内溶液微沸，并保持微沸约5min。加大火力，使炉温达到并保持在400℃左右，约30min管内溶液变黑或发黄，并冒浓烟，继续消解至溶液清亮，白烟消失。消解液为淡蓝色。总消解时间约80min。用凯氏定氮的蒸馏、滴定法测定消解液含氮量。

2.球蛋白吸取球蛋白提取液2.5ml于消解试管内，加催化剂0.1g，混液3ml。同上方法消解，并测定消解液含氮量。球蛋白消解最好用K氏烧瓶，以免溶液向外溅射。

3.醇溶蛋白吸取醇溶蛋白提取液10ml，加催化剂0.3g，混液3ml，同前方法消解和测定含氮量。

4.谷蛋白吸取谷蛋白提取液10ml，加催化剂0.3g，混液3ml，同前方法消解和测定含氮量。

5.残渣蛋白将离心管中残渣转入消解试管中，加入催化剂1.5g，混液10ml。同前方法消解，残渣碳化变黑后要多次轻微摇动，冲下管壁上的黑色残渣，消解至溶液清亮、淡蓝，白烟消失。总消解时间约为120～150min。按凯氏定氮蒸馏、滴定法测定残渣消解液中的含氮量。由于消解时加混液10ml，所以蒸馏时要加40%的NaOH30ml。