犬科动物繁殖生物技术研究进展

５天 ． 银狐 持续 １ ３天 ， 持 续 １ ４天 。通 过卵 巢 卵母 细胞 ～ 貉 ～
体 外 培 养 获 取 大 量 成 熟 卵 母 细 胞 ． 后 体 外 受 精 获 得 胚 胎 然
１３ 培 养 液 中添加 激 素 ．
在 体 内 ．排 卵 前 激 素 的 刺 激 被 认 为 是 犬 科 动 物 卵 母 细
１２ 卵丘 细 胞 的 完 整 性 ．
布 范 围 犬科 动 物 中体型 最 大 的是狼 ． 分布 于 欧 亚大 陆 和 北 美洲 貉在 我 国 大部分 地 区都 能见 到 ， 形 介 于狐 和 浣 外
熊 之 间 ． 性 比较 杂 ， 犬 科 中 吃 植 物 性 食 物 最 多 的 成 员 食 是 之 一 是 ． 于 生 态 环 境 的 恶 化 ， 些 犬 科 动 物 的 生 存 环 但 由 这 境 正 受 到 前 所 未 有 的 威 胁 ．为 了 保 护 濒 危 野 生 犬 科 动 物 ， 必 须 开 展 犬 科 动 物 的 人 工 辅 助 生 殖 技 术 。 面 就 这 一 领 域 下 的研 究 进 展 做 一 简 单 讨 论 １ 卵 母 细 胞 体 外 成 熟 培 养
胚胎 移植 是指 雌性 供体 发情 并 配种后 ． 一 定时 期从 在 其 体 内 取 出 胚 胎 ， 经 体 外 受 精 、 隆 获 得 胚 胎 ， 植 到 另 或 克 移
王 永 彬 ， 玉 军 ， 静 静 ， 巧 云 ， 金 苗 赵 丁 李 主
（ 封 市畜 产 品质 量监 测 检验 中心 ， 南 开 封 开 河
４ ５０ ） ７ ０ ０
中 图 分 类 号 ：８ ９２ ￥２ ．
文 献 标 识 码 ： Ｂ
文 章 编 号 ：０ ４ ５ ９ （ ０ ） ６ ０ １ － ３ １０ — ０ ０ ２ １ ０ — ０ ０ １ １
蠢 南牲 座 阿富 兽 ◆
少 利用 自然 发情犬 卵巢 上 的卵泡 卵母 细 胞 ． 经体 外培 养
和体 外 受精 ， 获得 了原 核胚 ｛１利用 诱 发发 情犬 卵 巢上 囊 １： ３
状 卵泡 卵进 行 体外 成 熟 和 Ｉ ．获得 了 ８ 细胞 胚胎 ．但 ＶＦ 一 成熟 率 、 受精 率 和卵裂 率都 很低 ［ 。从 发情 排卵 后的次 级 １ ４ ］
细 胞到 达 生发 泡破 裂期 ． 对 随后 减数 分 裂 的进行 并 无促 但 进 作 用 ＿ 在 基 础 培 养 液 中 添 加 Ｈ Ｇ 有 助 于 颗 粒 细 胞 的 ５ ］ Ｃ 扩 散 ． 利于 颗 粒 细胞 与 卵母 细 胞 问 的缝 隙连 接 ． 而促 有 从
进 卯母 细 胞成 熟 ［ ６ Ｊ
Ｒ — Ｃ 检 测 及 ７ ３Ｂ 血 清 型 的 鉴 定 ｆ １ 北 农 林 科 技 大 ＴＰＲ ９／ Ｊ． 西
１ 王 泽 霖 ． 丽 ． 地 高 辛 标 记 的 核 酸 探 针 从 尿 囊 液 和 ５ 王 用
ｉ ｅｂ ａ ｅｔｓ ａｎＪ ， ｉ ｉ ａｅ ２ ０ ，４ ）７ ８ ７ ４ ｎｔ ｅｄ ｔ ｔ ｉ［］Ａｖａ Ｄｓ ｓ ，０ ３ （７ ： １— ２ ． ｈ ｅｒ ｎ ｅ １ 武 聚 富 ． 中 文 ． 东 有 ． ． 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 ９ 张 毛 等 鸡 荧 光 定 量 Ｐ Ｒ标 准 曲线 的 建 立 『］ Ｃ Ｊ ．北 京 农 学 院 学 报 。
ｓｅｉｃｔ，ｎ ｈ ｙ ｒ ｉａｉ ｓｈ ｒ ｆＤ Ａ ｃ ｉｓＪ ． ｐ ｃｆ ｉ ａｄ ｔｅｈ ｂｉ ｚｔ ｎ ｉ ｔｅｍｓｏ Ｎ ｈｐ ［ ｉ ｙ ｄ ｏ ｌ ３
Ｂ ｏ ｈ ｓｃ ｌ ｏ ｒａ ， ０ ４ （ ６ ： １ － ３ ． ｉ ｙ ｉａ ｕ ｎ ｌ ２ ０ ， ８ ） ７ ８ ７ ０ ｐ Ｊ
母 细 胞 的体 外 成熟 率 （９ ） 高 于直 径 小 于 １０Ｉ 卵母 １％ ． ０ ｍ ｘ 细胞 的 成熟 率 （０ 。只有 直径 大 于 １ ０Ｉ 并有 ２层 １ ％） ２ ｍ ｘ
或 ３层 以 上 颗 粒 细 胞 的 卵 母 细 胞 才 能 达 到 Ｍ Ⅱ ． 径 小 于 直 １ ０Ｌ 的 卵 母 细 胞 不 能 发 育 到 Ｍ Ⅱ 。 １ ｍ Ｌ
止 ．还没有 建立适合 犬科 动物卵母 细胞较优 化 的体 外受精
体 系。
４ 胚胎 移植
选 用常 温保存较 为合适 。 冷冻保 存适宜 长期保存 Ⅲ。 大量 在
试 验的基础 上 ． 人建立 了一种犬颗 粒冻精 的方 法— — “ 有 炸
熏 法 ”【， 精 液 直 接 滴 人 液 氮 ，～ Ｂ将 ］ ５ ８秒 后 将 颗 粒 捞 出 ， 续 继
２ 曹 三 杰 ． 种 主 要 禽 疫 病 诊 断 基 因 芯 片 的 制 备 及 初 步 ｌ 几 应 用 ［］畜 牧 兽 医 学 报 ，０ ６，７ ４ ：５ — ６ ． Ｊ． ２ ０ ３ （ ）３ ６ ３ ０ ２ 陈 凤 梅 ．鸡 呼 吸 道 传 染 病 基 因 芯 片 诊 断 方 法 的 建 立 ２ ［］ 牧 兽 医 学 报 ，０ ５ ３ （２ ：３ ８ １ ６ ． Ｊ． 畜 ２ ０ ，６ １ ） １ ５ — ３ ２
包 括 以下 几 个 方 面 ：
１１ 卵母 细 胞 的 大 小 ．
外 成 熟 培 养 时 常 添 加 外 源 激 素 ． 促 进 卵 母 细胞 的 成 熟 。 以 在 成 熟 培 养 液 中添 加 Ｆ ＨＬ 并 不 能 促 进 卵母 细胞 Ｓ ／Ｈ
的体外 培 养成 熟 率 ［ 不 添加 Ｆ Ｈ 的培 养 液有 助 于 卵母 ４ ］ Ｓ
行 体 外 受 精 的 研 究 ．总 的 卵 裂 率 只 有 ２９ ％ ＿ 。 到 目前 为 ． ２ ｌ ６ ］
精液 的保存 主要参 照 家畜 的精液 保存 方法 同时 也在 积极 ． 筛选适 合犬 科动 物精 液保 存的保 存 液 液保存 依据 人工 精 授精技 术要 求分 为常 温保存 和冷 冻保 存 短期保 存犬 精液
Ｉｆ ｔ ｕ ｂｏｃｉｓ ｉ ｓ ｙｒ ｌｔ ｅｒ ｅｓ ｔ ｎｃｉ ａｅ ｎ ｃ０ｓ ｒ ｈ ｉ ｖ ｕ ａ—ｉ ｅ ｒ ｒ ｓ ｐ ｓ ｅ ｉ ｎ ｔ ｒ ｂ ｅ ｍ ｖ ｅ ａ ｒ ｔ
‘ （ 收稿 日 ：０ ０ — ８ 期 ２ １— ３ １） １
犬 科 动 物 繁 殖 生 物 技 术 研 究 进 展
１４ 培 养 液 中 添 加 蛋 白 ． 通 常 在 培 养 液 中 添 加 的 蛋 白 是 热 灭 活 血 清 或 血 清 白 蛋 白 ． 清通 过 促进 卵丘 细 胞增 殖 ， 强 颗粒 细 胞 功 能及 血 增
卵 母 细 胞 的 大 小 对 卵母 细 胞 体 外 成 熟 有 直 接 影 响 ，
胞 在 输 卯 管 中恢 复 减 数 分 裂 并 成 熟 的 必 需 因 素 。 以 ， 体 所 在
的方 法越 来越 受 到人们 的重视 。
有 关犬 科 动物 卵母 细胞 体 外成 熟 的研 究 报道 很 多 ， 但
内 容 主 要 集 中 在 筛 选 培 养 液 组 成 成 分 的 研 究 方 面 。 目前 ， 混 合 培 养 液 Ｔ Ｍ１９是 公 认 的 犬 科 动 物 卵 母 细 胞 体 外 成 Ｃ ９ 熟培 养 的最好 基 础培 养液 。 然犬 科动 物 卵母 细胞 体 外成 虽 熟培 养研 究取 得 了一定 进 展 ． 卵母 细胞 的体外 成 熟 率不 但 高 ． 常 只有 ２ ％ …。 通 ０ 卵 母 细 胞 体 外 成 熟 是 多 种 因 素 共 同作 用 的 结 果 ， 要 主
１ 何 永强 ． 继 勇 ． 涟 ． ． 用 Ｒ — Ｃ 和 Ｒ Ｌ ７ 周 于 等 应 ＴＰＲ Ｆ Ｐ分 析 肾 型 鸡 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 基 因 型 『］ Ｊ ．浙 江 农 业 学 报 ，
２ ０ （） ０ ｏ，３ ．
１ Ｊ ｃ ｗｏ ｄ ８ ａ ｋ ｏ Ｍ ， ｈ ＤＡ， ｌ ｓ ｎ Ｓ Ａ，ｔａ． ｔｃｉｎ ｏ Ｗ Ｈｉ Ｃａｌ ｏ ｅ １ ｉ Ｄｅｅ ｔｏ ｆ
卵 丘 细 胞 与 卵 母 细 胞 关 系 密 切 ． 丘 细 胞 在 卵 母 细 胞 卵 发 育 过 程 中 提 供 营 养 ． 与 透 明 带 的 形 成 。 与 卵 母 细 胞 最 参
接 近 的 几 层 卵 丘 细胞 能 穿 过 透 明 带 ．产 生 类 固醇 激 素 。
输 送 某 些 重 要 的 胞 质 成 分 到 卵 母 细 胞 。 只 有 具 有 ２层 或
阿奄 牲 ｃ 善鏖 寓
学学 报 （ 自然 科 学 版 ）２ ０ ，６ ６ ：５ ４ ． ，０ ８ ３ （ ） ４ — ７
２１（３ ）６ ０年 ２ 第 期 １ 第卷
ｐ ｌ ｍｅ ａ ｅ ｃ ａ ｎ ｒ ａ ｔｏ ｎ ｄ ｎ ｉ ｃ ｔ ｎ ｏ ｕ ｓｓ ｅ ｉ ｓ ｏ ｙ ｒ ｓ ｈ ｉ ｅ ｃ ｉ ｎ ａ ｄ ｅ ｔ ｉ ａ ｉ ｆａ ｑ ａ ｉｐ ｃｅ ｆ ｏ
３层 卯 丘 细 胞 紧密 包 围的 卵 母 细 胞 在 体外 培 养 时才 能 释 放第 一 极体 ．若 仅有 １ 卵 丘 细胞 。培 养 ４ 层 ８小 时 则 发 情 ． 情期 长 是 区别 于 其他 哺 发
乳 动 物 的 一 大 特 点 犬 发 情 期 持 续 ｌ周 左 右 ， 狐 持 续 ３ 蓝 ～
医 学 报 。Ｏ ０，２ １ ：４ ６ ． ２ ０ ２ （ ）６ — ６
１ 磨 美兰 ． 康然 ． ６ 李 韦平 ． Ｔ Ｐ Ｒ及 Ｒ Ｌ Ｒ—Ｃ Ｆ Ｐ分 析 技 术 对 鸡 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 的诊 断 和 Ｓ基 因分 型 的研 究 『 １ Ｊ．
中 国 预 防 兽 医 学 报 ，０ １ （ ） ２ ７ ２ １ ２ ０ ，４ ：７ — ８ ．
２年 ３）期 ０ （２第 １第卷 ６ １
刺激 卵 丘细 胞 扩散 等 一 系列 机制 影 响 卵母 细 胞 的体 外 成 熟 。 加超过 ｌ ％的胎 牛血清 可 以提高 卵母 细胞 的体外 成 添 ０ 活率 ． 对成 熟没 有促 进作用 。 但
２ 精 液 保 存 和 人 工 授 精
２１ 精 液 保 存 ．
２ ０ ，２ ． ０９（）
２ Ｈａ ｐ ｒｎ ０ ｌ ｅ ｉ Ａ ， ｈ ｔ Ｂｕ ｏ Ａ ， ｈ ｌ ａ Ｂ ， ｔ １ ｅ ｓｔ ｉ Ｚ ｕ ｉ Ｅ ｎ ｅ ａ． ｎ ｉ ｖ ｔ Ｓ ｉ ｙ，
组 织中 检 测 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒 的研 究 『 ］中 国预 防 兽 Ｊ．
卵 泡获 得 的 蓝 狐 卵母 细 胞 能体 外成 熟 、体 外 受精 ．但 是
卵 裂 率 很 低 （％）并 且 受 精 卵 只 能 发 育 到 ４ 细 胞 。通 过 ９ ， 一 对 发 情 犬 和 未 发 情 犬 卵 母 细 胞 体 外 受 精 的 研 究 发 现 ．发 情
精 液保存 技术 是人 工授 精 和体外 受精 的基 础 ． 有有 没
效 的 精 液 保 存 技 术 ． 难 将 人 工 授 精 、 外 受 精 技 术 推 广 很 体 应用 ． 就很 难获得 体外 受精 的胚 胎 。 也 目前 ， 于 犬 科 动 物 对
组 卵母细 胞的单精 受精 率 （１ ％） ３ ． 和原核 形成率 （９ ％） ２ １ ． 高 ４ 于未发情组 ［］ ｏｒ ｕ ｓ １ ５ Ｒ ｄｉ ｅ 等应用 体外成 熟 的犬 卵母 细胞进 ｇ
犬 科动 物 是适 应 追 逐 猎 物 的食 肉类 ，全 部 为 陆 栖 类
型 ． 有 极 少 数 种 类 偶 尔 会 爬 树 ： 食 肉 目 中 分 布 最 广 泛 只 是 的 一 科 ． 了 少 数 岛 屿 外 ． 乎 遍 及 陆 生 食 肉 类 的 全 部 分 除 几
卵母 细胞 越大 ， 外 成熟 的潜 力越 大 ， 径 大于 １ ０ 体 直 ０ ｍ 卵