色谱峰拖尾 分叉

由于被分析物与色谱柱间的相互作用导致峰拖尾。这种相互作用是在做反相分析中所发生的分配行为以外的作用。峰拖尾一般发生在碱性化合物上，通常是由于残留的硅羟基和带正电荷的碱性化合物之间的相互作用引起的。这种相互作用一般是发生在带正电荷的碱性化合物与带负电荷的色谱柱表面硅羟基之间的离子交换。当流动相的pH 值大于 4.5-5.0 时，色谱柱表面的硅羟基会带负电荷。因此，消除峰拖尾的最有效方式是使用pH 值小于4 的缓冲流动相。由于硅羟基的活性和离子化会降低，因此选用高纯羟基化硅胶色谱柱也会减少峰拖尾。

实际应用中常见的峰拖尾(甚至分叉)与色谱柱相关的原因：

原因处理方法

色谱柱污染清洗或更换色谱柱

柱前滤片污染反冲色谱柱

或更换进样口过滤片

色谱柱出现间断更换色谱柱或填充空隙

保护柱失效更换保护柱

样品分布差改进色谱柱进样口的设计

与色谱柱无关的原因：柱外体积过大、样品过量、流动相组分（添加剂、pH值、缓冲浓度）改变。

一、造成色谱峰( 不对称)拖尾的原因

1.色谱柱本身填装问题,筛板堵塞或填料塌陷;

2.柱头有污染;

3.样品超载;

4.样品溶剂不合适;

5.柱外效应;

6.化学或二次保留(硅羟基)效应;

7.缓冲容量不足或不合适;

8.重金属污染。

二、如何解决峰形拖尾的问题

A. 与化学有关的拖尾问题

1.流动相中，加入30mM的三乙胺(用于碱性化合物)或醋酸胺(用于酸性化合物)，未知化合物加醋酸三乙胺;

2.如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺);

3.降低进样量至<1μg。

B. 与色谱柱有关的拖尾问题

1.如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二氯甲烷与4%甲醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗;正向柱可用甲醇冲洗;

2.使用保护柱。

C. 与HPLC系统有关的峰拖尾和峰加宽

1.进样体积过大，(通常≤25μL);

2.进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大(最佳连接管应<20cm，内径为”);

3.检测器流通池的体积过大。