简单粗暴提取拟南芥DNA-1

Simple, but robust and highly scalable protocol

简单粗暴法提取DNA

1. 四片以上叶子的苗龄时，取一片适当大小（0.5-1cm2均可，没必要太大）；

2. 加钢珠和500μL extraction buffer，磨样3min，12000rpm离心10min（时

间不可太短，否则无法充分分层）；

3.吸取400 ~450μL上清（尽量不要吸到叶片组织沉淀）至1.5mL离心管，加

等体积异丙醇（或2倍体积冰乙醇）沉淀，-20℃放置30min左右，离心5min；

4.倒掉乙醇，加500μL 75%乙醇，泡洗10min后倒掉75%乙醇，可重复洗1

遍；

5.晾干（最好过夜），加100μL ddH2O溶解，约1hr后即可取1μL左右直接

做PCR（10μL的PCR体系）模板。

说明：

1.extraction buffer配方（1L）：1

2.1 g Tris, 28.1 g NaCl, and 18.6 g EDTA（实是乙

二胺四乙酸二钠即EDTA Na2，加水溶解并定容至1L；分子生物学实验一般都是用的EDTA Na2，所以一般默认简称EDTA）

2.本方法改编自：Alonso J M, Stepanova A N. Plant Functional Genomics:

Methods and Protocols[M].2nd ed. Humana Press, 2015. 326-335（大家可以看看这本书，方法挺全）

3.此法提取DNA，室温放2个月做PCR没有问题，没有试过放更长时间（更

长时间建议还是放-20℃冰箱）。检测2Kb片段扩增成功（更长片段没有试过，可用于做TAIL PCR）。因没有用氯仿、异戊醇抽提，全程可不用在通风橱操作。所提DNA中蛋白含量稍高，加水后有白色不溶物属正常现象，不影响PCR。