实验五 金黄色葡萄球菌检测概述
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物中都可找到。
• 作为人和动物的常见病原菌,其主要存在于人和动物的鼻
腔、咽喉、头发上,50%以上健康人的皮肤上都有金黄色 葡萄球菌存在。因而,食品受其污染的机会很多。
• 传播媒介为被该菌污染的食品,主要为淀粉类(如剩饭、
米面、粥等)、牛乳及乳制品,以及鱼、肉、蛋类等。被 污染的食物在室温20℃-22℃放置5小时以上时,病菌大量 繁殖,并产生肠毒素。
•
• • • • • • • • • • • • •
三、试剂和仪器 (一)最先准备的器材 规格名称 数量 用途 1、500ml三角瓶 1个 7.5%氯化钠肉汤 2、500ml三角瓶 1个 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 3、250ml三角瓶 4个 制血培养基等 4、10×100mm试管 6支 血浆凝固酶试验 5、1ml移液管 2支 6、10ml移液管 2支 7、直径为90mm平皿 12套 制血平板、B-P平板 8、250ml量筒 1支 (二)应灭菌的其它器材 剪刀1把 不锈钢汤匙1把 称量纸适量
• 称取本品63 克,加入950ml蒸馏水中,加热煮沸溶解,分
装,121℃高压灭菌15分钟备用。冷至50℃,每95ml加入 预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌液(04-025)配套试剂(用 法与用量见配套试剂说明)。摇匀后倾注平皿。培养基应 是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h)
• 四、实验内容 • (一)、增菌培养法 • 样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分
致病性
• 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的
疾病,可引发不同程度的急性胃肠炎症状,恶心、 呕吐最为突出而且普遍,腹痛、腹泻次之。
• 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食
品,如牛奶和奶制品、肉、蛋等,在温度条件适 宜时,经8-10小时即可相当数量的肠毒素。
分布
• 在自然界中广泛存在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄
流行病学
• 季节分布,多见于春夏季;
• 中毒食品种类多,如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外,剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中 毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率 83%,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
流行病学
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题, 在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒 占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多, 占45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
实验五 乳制品中金黄色葡萄球菌检测
生物学特性
---菌体形态及培养特征
• 革兰氏阳性球菌,直径为0.8-1.0微米,镜
检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群; • 无芽孢,不运动; • 兼性厌氧菌,在好氧条件下生长最好; • 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长
生物学特性
---菌体形态及培养特征
• 大多数菌株能生长在6.5-46℃之间(最
流行病学
肠毒素形成条件: 存放温度,在37°C内,温度越高,产毒时间越 短; 存放地点,通风不良氧分压低易形成肠毒素; 食物种类,含蛋白质丰富,水分多,同时含一定 量淀粉的食物,肠毒素易生成。
耐受力
• 几乎所有的消毒试剂以及热加工过程对金黄色葡
萄球菌都有严重的破坏作用
• 肠毒素可耐受100℃ 30分钟不被破坏。 • 对于加工过的食品或食品加工设备而言,此菌或
其肠毒素的存在通常作为卫生条件差的一种指标。
源自文库 污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品
防止带菌人群对各种食物的污染:定期对生产加 工人员进行健康检查,患局部化脓性感染(如疥 疮、手指化脓等)、上呼吸道感染(如鼻窦炎、 化脓性肺炎、口腔疾病等)的人员要暂时停止其 工作或调换岗位。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品
A.4 Baird-Parker琼脂平板
• • • • • • • •
A.4.1 成分 胰蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 酵母膏 1.0 g 丙酮酸钠 10.0 g 甘氨酸 12.0 g 氯化锂(LiCl· 6H2O) 5.0 g 琼脂 20.0 g 蒸馏水 950 mL pH 7.0±0.2 A.4.2 增菌剂的配法 30%卵黄盐水 50 mL 与经过除菌过滤的 1%亚碲酸钾溶液 10 mL 混合,保存于冰箱内。 A.4.3 制法 将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,调节 pH。分装每瓶 95 mL,121 ℃高 压灭菌 15 min。 临用时加热溶化琼脂,冷至 50 ℃,每 95 mL 加入预热至 50 ℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂 5 mL 摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过 48 h。
• (三)应制备的培养基 • 培养基总量
– – – – –
所用容器
500ml三角瓶 500ml三角瓶 250ml三角瓶 250ml三角瓶
7.5%氯化钠肉汤 225ml/瓶1瓶 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 225ml/瓶1瓶 血琼脂 100ml/瓶1瓶 B—P培养基 95ml/瓶1瓶 兔血液 5ml
• • • •
第二天 接种选择性平板进行分离培养 (一)、接种选择性平板 取增菌液1环,划线接种于血平板或B-P平板。 (二)、培养 放于36±1℃培养24h。
• 第三天 观察分离结果、镜检、做血浆凝固酶试 • •
• • • • •
验 (一)、观察分离结果 结果:金黄色葡萄球菌,在血平板上呈:金黄或 白色菌落,大而凸起,表面光滑,周围有溶血圈; 在Baird-Parker平板上:菌落为圆形,直径23mm,颜色灰或黑色,周围有一浑浊带,在其外 层有一透明圈。 (二)、革兰氏染色、镜检 操作:革兰氏染色→镜检 结果:金黄色葡萄球菌,革兰氏阳性,显微镜下 呈葡萄状排列无芽胞,直径0.5-1μm。 (三)、结果报告: 综合形态特征,血平板情况以及血浆凝固酶试验 结果,判别检样有否金黄色葡萄球菌作出报告。
检测步骤
---分离
• 在BP平板上其典型菌落为:圆形,光滑突起,湿
润,直径2-3mm,颜色呈灰色到黑玉色,边缘常 为淡色(米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白 色),周围为一混浊带,在其外缘常有一透明圈。 用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。 偶然会遇到不分解脂肪菌株,除无混浊带及透明 圈外,其他外观基本相同。 长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落,其 黑色常较典型菌落淡些,且外观可能粗燥,质地 较干燥。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成
应在低温和通风良好的条件下贮藏食物,以防肠 毒素形成; 在气温高的春夏季,食物置冷藏或通风阴凉地方 也不应超过6小时,并且食用前要彻底加热。
检测步骤
---增菌
• 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性(可耐受15%的
氯化钠),用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增 菌。
适温度30-37℃)能在pH4.2-9.3之间 生长(最适pH为7.0-7.5); • 大多数菌株产生类胡罗卜素,使细胞 团呈现出深橙色到浅黄色,色素的产 生取决于生长的条件,而且在单个菌 株中可能也有变化
生物学特性
---菌体形态及培养特征
• 好氧生长的细胞产生接触酶; • 产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶
防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染:如牛 奶厂要定期检查奶牛的乳房,不能挤用患化脓性 乳腺炎的牛奶;奶挤出后,要迅速冷至-10℃以下, 以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶 为原料,注意低温保存。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品
对肉制品加工厂,患局部化脓感染的禽、畜尸体 应除去病变部位,经高温或其他适当方式处理后 进行加工生产。
• •
血(或兔血) 5 mL~10 mL A.3.2 制法:加热溶化琼脂,冷却至 50 ℃,以无菌操作 加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板。 血琼脂平板:蛋白胨10g 牛肉膏5g 氯化钠5g 琼脂 10~20g 蒸馏水1000ml
• 煮沸至充分溶解,高压灭菌15~20min 待冷却至50 ℃左
右时加入50ml抗凝羊血(除去纤维)或兔血。摇匀或搅匀 倒平板或试管斜面。 温度过高,培养基呈棕褐色;温度 过低则不利于血液与培养基混匀。
A.2 7.5%氯化钠肉汤
• A.2.1 成分 • 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 氯化钠 75 g
蒸馏水 1 000 mL pH 7.4 • A.2.2 制法 • 将上述成分加热溶解,调节 pH,分装,每 瓶 225 mL,121 ℃高压灭菌 15 min。
A.3 血琼脂平板
• A.3.1 成分:豆粉琼脂(pH7.4~7.6) 100 mL 脱纤维羊
和结果的判断。 掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。
• 二、原理
• 葡萄球菌在自然界分布极广,空气、土壤、水、饲料、食
品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜 等处均有存在,大部分是不致病,也有一些致病的球菌。 金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎 症,还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖,产生 毒素,人误食了含有毒素的食品,就会发生食物中毒,故 食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险, 检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶,使血浆凝固,多数致病菌 株能产生溶血毒素,使血琼脂平板菌落周围出现溶血环, 在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球 菌的重要指标。
•
•
检测步骤
---鉴定
• 金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶,因此对其鉴别 •
的主要实验是测定其凝固酶。 对于凝固不完全的菌株,可以通过一些其他实验 来进一步确认,例如:厌氧葡萄糖发酵、溶葡萄 球菌酶敏感性实验、耐热核酸酶实验等。 所有这些实验不能作为鉴别其产毒与否的依据。
•
• 一、实验目的要求
• 了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。 • 掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 • 掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法 •
离→→血浆凝固酶试验鉴别→→结果报告
• 第一天 样品处理和增菌培养
• (一)、样品处理 • 固体或半固体食品:以无菌操作称取25g样品,放入装有
• • • •
225mL灭菌生理盐水的灭菌均 质杯内,于8000r/min均质 1~2min,制成1:10样品匀液。 液体食品::用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有 225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的 玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。 (二)、增菌培养 接种操作:吸取5mL稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白 胨肉汤中。37°C培养24小时。 培养:放于36±1℃培养24h。 培养结果:在NaCl肉汤中呈混浊生长,胰蛋白胨肉汤中有 时液体澄清,菌量多时呈混浊生长。
菌酶,大多数菌株可水解天然的动物蛋白, 例如血红蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和 多肽类如明胶,水解脂类、吐温类和磷脂 蛋白质,并释放脂肪酸; • 所有的毒株产生凝固酶,人和动物来源的 菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
致病性
• 金黄色葡萄球菌为条件致病菌,菌株致病力的强弱主要取
决于其产生的毒素和侵袭性酶:
A.1 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤
• A.1.1 成分 • 胰酪胨(或胰蛋白胨) 17.0 g 植物蛋白胨(或
• •
大豆蛋白胨) 3.0 g 氯化钠 100.0 g 磷酸氢二钾 2.5 g 丙酮酸钠 10.0 g 葡萄糖 2.5 g 蒸馏水 1 000 mL pH 7.3±0.2 A.1.2 制法 将上述成分混合,加热,轻轻搅拌并溶解,调节 pH,分装,每瓶 225 mL,121 ℃高压灭菌 15 min。
检测步骤
---分离
• 血平板:金黄色葡萄球菌可
以产生溶血素,因此在血平 板上产生明显的溶血环。
• 血平板上其典型菌落呈金黄
色,有时也为白色,大而突 起,圆形,不透明,表面光 滑,有溶血圈。
检测步骤
---分离
• BP平板:
胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、 维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄 的菌株有毒性,并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌 株有抑制作用。
a.溶血素:外毒素,分α、β、γ、δ四种,能损伤血小板, 破坏溶酶体,引起肌体局部缺血和坏死; b.杀白细胞素:可破坏人的白细胞和巨噬细胞; c.血浆凝固酶:当金黄色葡萄球菌侵入人体时,该酶使 血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固,阻碍吞 噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶 有关; d.脱氧核糖核酸酶:金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核 酸酶能耐受高温,可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌; e.肠毒素:金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎 的蛋白质性肠毒素,分为A、B、C、D、E五种。
• 作为人和动物的常见病原菌,其主要存在于人和动物的鼻
腔、咽喉、头发上,50%以上健康人的皮肤上都有金黄色 葡萄球菌存在。因而,食品受其污染的机会很多。
• 传播媒介为被该菌污染的食品,主要为淀粉类(如剩饭、
米面、粥等)、牛乳及乳制品,以及鱼、肉、蛋类等。被 污染的食物在室温20℃-22℃放置5小时以上时,病菌大量 繁殖,并产生肠毒素。
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三、试剂和仪器 (一)最先准备的器材 规格名称 数量 用途 1、500ml三角瓶 1个 7.5%氯化钠肉汤 2、500ml三角瓶 1个 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 3、250ml三角瓶 4个 制血培养基等 4、10×100mm试管 6支 血浆凝固酶试验 5、1ml移液管 2支 6、10ml移液管 2支 7、直径为90mm平皿 12套 制血平板、B-P平板 8、250ml量筒 1支 (二)应灭菌的其它器材 剪刀1把 不锈钢汤匙1把 称量纸适量
• 称取本品63 克,加入950ml蒸馏水中,加热煮沸溶解,分
装,121℃高压灭菌15分钟备用。冷至50℃,每95ml加入 预热至50℃的卵黄亚碲酸钾增菌液(04-025)配套试剂(用 法与用量见配套试剂说明)。摇匀后倾注平皿。培养基应 是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过48h)
• 四、实验内容 • (一)、增菌培养法 • 样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分
致病性
• 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的
疾病,可引发不同程度的急性胃肠炎症状,恶心、 呕吐最为突出而且普遍,腹痛、腹泻次之。
• 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食
品,如牛奶和奶制品、肉、蛋等,在温度条件适 宜时,经8-10小时即可相当数量的肠毒素。
分布
• 在自然界中广泛存在,空气、水、灰尘及人和动物的排泄
流行病学
• 季节分布,多见于春夏季;
• 中毒食品种类多,如奶、肉、蛋、鱼及其制品。
此外,剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中 毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率 83%,所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。
流行病学
金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题, 在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒 占整个细菌性食物中毒的33%,加拿大则更多, 占45%,我国每年发生的此类中毒事件也非常多。
实验五 乳制品中金黄色葡萄球菌检测
生物学特性
---菌体形态及培养特征
• 革兰氏阳性球菌,直径为0.8-1.0微米,镜
检时呈单个、成对、四联或不规则的簇群; • 无芽孢,不运动; • 兼性厌氧菌,在好氧条件下生长最好; • 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长
生物学特性
---菌体形态及培养特征
• 大多数菌株能生长在6.5-46℃之间(最
流行病学
肠毒素形成条件: 存放温度,在37°C内,温度越高,产毒时间越 短; 存放地点,通风不良氧分压低易形成肠毒素; 食物种类,含蛋白质丰富,水分多,同时含一定 量淀粉的食物,肠毒素易生成。
耐受力
• 几乎所有的消毒试剂以及热加工过程对金黄色葡
萄球菌都有严重的破坏作用
• 肠毒素可耐受100℃ 30分钟不被破坏。 • 对于加工过的食品或食品加工设备而言,此菌或
其肠毒素的存在通常作为卫生条件差的一种指标。
源自文库 污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品
防止带菌人群对各种食物的污染:定期对生产加 工人员进行健康检查,患局部化脓性感染(如疥 疮、手指化脓等)、上呼吸道感染(如鼻窦炎、 化脓性肺炎、口腔疾病等)的人员要暂时停止其 工作或调换岗位。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品
A.4 Baird-Parker琼脂平板
• • • • • • • •
A.4.1 成分 胰蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 酵母膏 1.0 g 丙酮酸钠 10.0 g 甘氨酸 12.0 g 氯化锂(LiCl· 6H2O) 5.0 g 琼脂 20.0 g 蒸馏水 950 mL pH 7.0±0.2 A.4.2 增菌剂的配法 30%卵黄盐水 50 mL 与经过除菌过滤的 1%亚碲酸钾溶液 10 mL 混合,保存于冰箱内。 A.4.3 制法 将各成分加到蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,调节 pH。分装每瓶 95 mL,121 ℃高 压灭菌 15 min。 临用时加热溶化琼脂,冷至 50 ℃,每 95 mL 加入预热至 50 ℃的卵黄亚碲酸钾增菌剂 5 mL 摇匀后倾注平板。培养基应是致密不透明的。使用前在冰箱储存不得超过 48 h。
• (三)应制备的培养基 • 培养基总量
– – – – –
所用容器
500ml三角瓶 500ml三角瓶 250ml三角瓶 250ml三角瓶
7.5%氯化钠肉汤 225ml/瓶1瓶 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 225ml/瓶1瓶 血琼脂 100ml/瓶1瓶 B—P培养基 95ml/瓶1瓶 兔血液 5ml
• • • •
第二天 接种选择性平板进行分离培养 (一)、接种选择性平板 取增菌液1环,划线接种于血平板或B-P平板。 (二)、培养 放于36±1℃培养24h。
• 第三天 观察分离结果、镜检、做血浆凝固酶试 • •
• • • • •
验 (一)、观察分离结果 结果:金黄色葡萄球菌,在血平板上呈:金黄或 白色菌落,大而凸起,表面光滑,周围有溶血圈; 在Baird-Parker平板上:菌落为圆形,直径23mm,颜色灰或黑色,周围有一浑浊带,在其外 层有一透明圈。 (二)、革兰氏染色、镜检 操作:革兰氏染色→镜检 结果:金黄色葡萄球菌,革兰氏阳性,显微镜下 呈葡萄状排列无芽胞,直径0.5-1μm。 (三)、结果报告: 综合形态特征,血平板情况以及血浆凝固酶试验 结果,判别检样有否金黄色葡萄球菌作出报告。
检测步骤
---分离
• 在BP平板上其典型菌落为:圆形,光滑突起,湿
润,直径2-3mm,颜色呈灰色到黑玉色,边缘常 为淡色(米黄色或灰白色略带灰色或黄色的白 色),周围为一混浊带,在其外缘常有一透明圈。 用接种针接触菌落似有黄油树胶的粘稠感。 偶然会遇到不分解脂肪菌株,除无混浊带及透明 圈外,其他外观基本相同。 长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落,其 黑色常较典型菌落淡些,且外观可能粗燥,质地 较干燥。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成
应在低温和通风良好的条件下贮藏食物,以防肠 毒素形成; 在气温高的春夏季,食物置冷藏或通风阴凉地方 也不应超过6小时,并且食用前要彻底加热。
检测步骤
---增菌
• 利用金黄色葡萄球菌耐盐的特性(可耐受15%的
氯化钠),用含10%氯化钠的胰酪胨大豆肉汤增 菌。
适温度30-37℃)能在pH4.2-9.3之间 生长(最适pH为7.0-7.5); • 大多数菌株产生类胡罗卜素,使细胞 团呈现出深橙色到浅黄色,色素的产 生取决于生长的条件,而且在单个菌 株中可能也有变化
生物学特性
---菌体形态及培养特征
• 好氧生长的细胞产生接触酶; • 产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶
防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染:如牛 奶厂要定期检查奶牛的乳房,不能挤用患化脓性 乳腺炎的牛奶;奶挤出后,要迅速冷至-10℃以下, 以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶 为原料,注意低温保存。
污染的控制
• 防止金黄色葡萄球菌污染食品
对肉制品加工厂,患局部化脓感染的禽、畜尸体 应除去病变部位,经高温或其他适当方式处理后 进行加工生产。
• •
血(或兔血) 5 mL~10 mL A.3.2 制法:加热溶化琼脂,冷却至 50 ℃,以无菌操作 加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板。 血琼脂平板:蛋白胨10g 牛肉膏5g 氯化钠5g 琼脂 10~20g 蒸馏水1000ml
• 煮沸至充分溶解,高压灭菌15~20min 待冷却至50 ℃左
右时加入50ml抗凝羊血(除去纤维)或兔血。摇匀或搅匀 倒平板或试管斜面。 温度过高,培养基呈棕褐色;温度 过低则不利于血液与培养基混匀。
A.2 7.5%氯化钠肉汤
• A.2.1 成分 • 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 5.0 g 氯化钠 75 g
蒸馏水 1 000 mL pH 7.4 • A.2.2 制法 • 将上述成分加热溶解,调节 pH,分装,每 瓶 225 mL,121 ℃高压灭菌 15 min。
A.3 血琼脂平板
• A.3.1 成分:豆粉琼脂(pH7.4~7.6) 100 mL 脱纤维羊
和结果的判断。 掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。
• 二、原理
• 葡萄球菌在自然界分布极广,空气、土壤、水、饲料、食
品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜 等处均有存在,大部分是不致病,也有一些致病的球菌。 金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎 症,还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖,产生 毒素,人误食了含有毒素的食品,就会发生食物中毒,故 食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险, 检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶,使血浆凝固,多数致病菌 株能产生溶血毒素,使血琼脂平板菌落周围出现溶血环, 在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球 菌的重要指标。
•
•
检测步骤
---鉴定
• 金黄色葡萄球菌可以产生凝固酶,因此对其鉴别 •
的主要实验是测定其凝固酶。 对于凝固不完全的菌株,可以通过一些其他实验 来进一步确认,例如:厌氧葡萄糖发酵、溶葡萄 球菌酶敏感性实验、耐热核酸酶实验等。 所有这些实验不能作为鉴别其产毒与否的依据。
•
• 一、实验目的要求
• 了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。 • 掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 • 掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法 •
离→→血浆凝固酶试验鉴别→→结果报告
• 第一天 样品处理和增菌培养
• (一)、样品处理 • 固体或半固体食品:以无菌操作称取25g样品,放入装有
• • • •
225mL灭菌生理盐水的灭菌均 质杯内,于8000r/min均质 1~2min,制成1:10样品匀液。 液体食品::用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有 225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的 玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。 (二)、增菌培养 接种操作:吸取5mL稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白 胨肉汤中。37°C培养24小时。 培养:放于36±1℃培养24h。 培养结果:在NaCl肉汤中呈混浊生长,胰蛋白胨肉汤中有 时液体澄清,菌量多时呈混浊生长。
菌酶,大多数菌株可水解天然的动物蛋白, 例如血红蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和 多肽类如明胶,水解脂类、吐温类和磷脂 蛋白质,并释放脂肪酸; • 所有的毒株产生凝固酶,人和动物来源的 菌株通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
致病性
• 金黄色葡萄球菌为条件致病菌,菌株致病力的强弱主要取
决于其产生的毒素和侵袭性酶:
A.1 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤
• A.1.1 成分 • 胰酪胨(或胰蛋白胨) 17.0 g 植物蛋白胨(或
• •
大豆蛋白胨) 3.0 g 氯化钠 100.0 g 磷酸氢二钾 2.5 g 丙酮酸钠 10.0 g 葡萄糖 2.5 g 蒸馏水 1 000 mL pH 7.3±0.2 A.1.2 制法 将上述成分混合,加热,轻轻搅拌并溶解,调节 pH,分装,每瓶 225 mL,121 ℃高压灭菌 15 min。
检测步骤
---分离
• 血平板:金黄色葡萄球菌可
以产生溶血素,因此在血平 板上产生明显的溶血环。
• 血平板上其典型菌落呈金黄
色,有时也为白色,大而突 起,圆形,不透明,表面光 滑,有溶血圈。
检测步骤
---分离
• BP平板:
胰蛋白胨、牛肉膏和酵母膏提供碳源、氮源、硫、 维生素和痕量矿物元素 丙酮酸钠是一种生长促进剂 亚碲酸盐对除金黄色葡萄球外的其他能分解卵黄 的菌株有毒性,并使菌落产生黑色 卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环 甘氨酸和氯化锂对金黄色葡萄球菌以外的其它菌 株有抑制作用。
a.溶血素:外毒素,分α、β、γ、δ四种,能损伤血小板, 破坏溶酶体,引起肌体局部缺血和坏死; b.杀白细胞素:可破坏人的白细胞和巨噬细胞; c.血浆凝固酶:当金黄色葡萄球菌侵入人体时,该酶使 血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固,阻碍吞 噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶 有关; d.脱氧核糖核酸酶:金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核 酸酶能耐受高温,可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌; e.肠毒素:金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎 的蛋白质性肠毒素,分为A、B、C、D、E五种。